麦芪益肺合剂质量标准的研究

2012-11-01王申东陈培丽李江奇孟琳懿

中成药 2012年2期

王申东，陈培丽，胡斯，李江奇，孟琳懿

（上海交通大学附属儿童医院，上海 200040）

麦芪益肺合剂是我院自制中药制剂。由麦冬、黄芪、陈皮、乌梅、白术、五味子等八味药材组成，用于治疗小儿呼吸道反复感染，应用于临床30余年，疗效确切，安全性好。已对处方中君药黄芪制定了黄芪甲苷定量测定［1］，此次对本品质量标准做进一步提高。处方中陈皮能行散肺气壅遏，用于痰多咳嗽等症［2-3］。所含主要成分橙皮苷已证明具有较多的生理活性［4］，与陈皮的药理作用息息相关。因此本实验采用高效液相色谱法对陈皮中主要成分橙皮苷进行测定。同时研究白术［5］、乌梅［6］、五味子［7］的有效成分，分别建立TLC鉴别方法，得到的色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。提高后的质量标准，可有效地控制本品质量，保证临床疗效。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪(紫外检测仪)；MERCK G60及 GF254薄层板；Sartorius BP211D天平；BRANSON B5500S-MT超声仪；橙皮苷对照品(批号110721-200613)、五味子甲素对照品(批号110764-200107)、熊果酸对照品(批号110742-9908)、白术对照药材(批号120925-200206)、五味子对照药材(批号120922-200304)、乌梅对照药材(批号121208-0101)均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为超纯水。麦芪益肺合剂由上海市儿童医院提供。

2 薄层鉴别

2.1 白术的薄层鉴别［2，8-9］取本品25 mL，加正己烷20 mL振摇提取，正己烷液低温挥干，残渣加正己烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。同时制备不含白术的阴性制剂，同法制成阴性对照溶液。取白术对照药材0.25 g，加正己烷20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验(中国药典2010年版一部附录VI B)，吸取上述溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性制剂无干扰，见图1。

图1 白术薄层鉴别色谱图

2.2 乌梅的薄层鉴别［2，10-11］取本品25 mL，加甲醇30 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚(30～60℃)浸泡两次，每次2 min，每次15 mL，倾去石油醚，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同时制备不含乌梅的阴性制剂，同法制成阴性对照溶液。另取乌梅对照药材4 g，同法制成对照药材溶液。再取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液(v/v)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性制剂无干扰，见图2。

图2 乌梅薄层鉴别色谱图

2.3 五味子的薄层鉴别［2，12-13］取本品20 mL，加三氯甲烷20 mL，摇匀，加热回流30 min，取三氯甲烷液蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。同时制备不含五味子的阴性制剂，同法制成阴性对照溶液。另取五味子对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-乙酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性制剂无干扰，见图3。

图3 五味子薄层鉴别色谱图

3 定量测定

3.1 色谱条件 Agileng XDB-C18色谱柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇-水-乙酸(25∶71∶4)；体积流量1 mL/min；柱温30℃；检测波长283 nm；进样量10 μL。

3.2 标准曲线的制备取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.128 mg的溶液，作为对照品贮备溶液，分别精密吸取对照品贮备溶液 2、4、6、8、10 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件分别进行测定，以进样量(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 A=2969.13C－16.29(r=0.9999)，橙皮苷在0.256～1.28 μg范围内进样量与峰面积值呈良好的线性关系。

3.3 供试品溶液制备精密量取供试品溶液20 mL置于分液漏斗中，加乙醚20 mL振摇提取，弃去乙醚液，水液再用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

3.4 干扰性试验取不含陈皮的阴性制剂，按样品溶液制备项下的方法处理，进样。结果，阴性制剂在橙皮苷对照品色谱峰处无干扰峰出现，表明处方中其它成分对测定无影响。结果见图4。

图4 HPLC色谱图

3.5 精密度试验精密吸取供试品溶液，重复进样6次，以橙皮苷峰面积计RSD为0.47%。表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性试验精密吸取供试品溶液，分别在0、2、4、8、16.5、24.5 h测定，RSD 为0.56%。

3.7 重复性试验取同一批号样品6份，按供试品溶液制备项下的方法处理，测定，橙皮苷质量浓度为0.09492 mg/mL，RSD为1.31%。

3.8 回收率试验精密量取样品10 mL，分别精密加入质量浓度为0.328 mg/mL的橙皮苷溶液2.5、3.0、3.5 mL，分别平行处理3份，按供试品溶液制备项下的方法处理，置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液测定。计算加样回收率，结果橙皮苷的平均回收率为99.1%，RSD为2.64%。

3.9 样品测定取3批自制样品(批号为110320、110324和110328)，依法测定，计算橙皮苷的质量浓度分别为0.1064、0.1048、0.0950 mg/mL。