超高压液相测定技术在人参皂苷含量测定中的应用

石家庄以岭药业股份有限公司 李 净 祁星星 吕 洁 霍际伟

超高压液相测定技术在人参皂苷含量测定中的应用

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人参为五加科植物，具有很高的药用价值，但由于药典收录的人参皂苷的测定方法运行时间较长。本文，笔者采用超高压液相的测定方法对人参中皂苷的含量进行分析，以缩短测定时间，提高测定效率。

一、仪器与试药

1.仪器。实验使用的仪器主要有U3000测定仪，该测定仪包括LPG–3400RS型四元泵、WPS–3000型进样器、TCC–3x00（RS）型柱温箱和 VWD–3x00（RS）型检测器；采用的色谱柱有 DIONEX C18 5 μm 4.6 mm ×100 mm 、Agilent XDB–C18 5 μm 4.6 mm×150mm。

2.试药对照品。包括人参皂苷Rgl（中检所：110703–201027）、人参皂苷Re （中检所：110754–200822）、 人参皂苷Rbl（中检所：110704-201122）等，所用试剂均为色谱纯。

二、实验方法与结果

1.色谱条件。

（1）超高压液相条件。以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速为0.6 m L/m in，按下表中的规定进行梯度洗脱，检测波长为203 nm。具体参数见表1。

表1 流速为0.6 m L/m in时的梯度洗脱要求

（2）《中国药典》2010年版（一部）条件。以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速为1.0 m L/min，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203 nm。具体参数见表2。

表2 流速为1.0 m L/m in时的梯度洗脱要求

2.溶液的制备。

（1）对照品溶液的制备。 精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成质量浓度为0.2 mg/m L的混合溶液，摇匀，即可得到对照品溶液。

（2）供试品溶液的制备。取本品粉末（过四号筛）约1 g，精密称定，置于索氏提取器中；加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液并在药渣挥干溶剂后，连同滤纸筒移入100 m L锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50 mL，密塞，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 m in，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 m L，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 m L量瓶中；加甲醇稀释至规定刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即可得到供试品溶液。

3.线性回归分析。精密吸取上述人参皂苷对照品溶液，分别进样0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 μL，按规定色谱条件测定峰面积。分别以人参皂苷Rgl、Re 、Rb1对照品进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。对所得实验数据进行线性回归，可得不同人参皂苷的回归方程：

不同仪器所测得的人参皂苷的含量 见表3。

表3 不同仪器所测得的人参皂苷含量

4.精密度试验。精密吸取上述人参皂苷对照品溶液，按上述超高压液相色谱条件，2 μL进样，重复进样6次，其RSD分别为人参皂苷Rgl为0.5%、人参皂苷Re为 0.6%、人参皂苷Rbl为0.5%，表明进样精密度较好。

5.重复性试验。在上述色谱条件下， 取同一批样品5 份，按“2.2.2供试品溶液的制备” 项下的方法测定， 测定结果表明：人参皂苷Rg1的平均含量为0.332 2%，RSD＝0.4%；人参皂苷Re的平均含量为0.1515%，RSD＝0.3%；人参皂苷Rb1的平均含量为0.4240%，RSD＝0.3%。

6.稳定性试验。按含量测定项下的超高压色谱条件，在室温条件下，对同一样品溶液每隔0，4，8，12，24 h进样一针，并记录色谱图，按峰面积计算RSD，样品在24 h内基本稳定。不同时段、不同人参皂苷含量的测量结果见表4。

表4 不同时段、不同人参皂苷含量的测量结果

三、结论

上述实验结果表明，利用超高压液相测定人参皂苷含量的检测方法准确、可靠，且大大缩短了检测时间，提高了工作效率，同时也节约了试剂，减少了对环境的污染，使人参皂苷测定方法的经济效益和社会效益得到了显著提高。