盐酸乐卡地平片有关物质HPLC检查方法研究

汤典慧 ，李 威 ，彭敏 ，郭思维 ，朱剑波 ，邱细敏

（1.湘雅医院药剂科，湖南 长沙 410008；2.湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410006）

盐酸乐卡地平是1,4-二氢吡啶类化合物，是一种治疗高血压的新型药物[1]。它是由意大利Recordati公司开发,1997年在荷兰首次上市,现已在欧美国家得到广泛应用，且反响良好。在国内上市以后得到了快速发展，未来应用前景广阔。近年有关的报道有：用RHPLC测定盐酸乐卡地平片剂含量[2]、用HPLC-MS方法测定人血清中乐卡地平的含量[3]及用HPLC-电化学检测器方法测定乐卡地平中的含量[4]，而乐卡地平中的有关物质测定报道甚少,片剂中有关物质测定未见报道。为规范药品生产及保证临床所用药品质量安全，同时能方便、快捷、准确地测定盐酸乐卡地平药品中的有关物质，作者采用高相色谱法，建立了一种快速、灵敏、精密度好的测定盐酸乐卡地平药品中有关物质的分析方法。

1 仪器、试药及试剂

日本岛津LC-2010高效液相色谱仪，LC-solution色谱工作站， 依利特 300A-ODS(5μm、4.6x200mm)色 谱柱 ，AS2060、Cleaner(autosience)超声波清洗仪，pHS-2c酸度计。盐酸乐卡地平片(湖南天地恒一有限公司提供)，盐酸乐卡地平对照品(中国药品生物制品鉴定所)。乙腈(色谱纯，上海陆都化学试剂厂)，乙酸铵(分析纯 )，乙酸(分析纯)，三乙胺(分析纯，广东汕头市西龙化工厂)，水(超纯水，自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：依利特 300A-ODS(5μm,4.6×200mm);流动相:乙腈-0.01moL/L乙酸铵溶液-三乙胺(650:350:1)[用乙酸调节 pH 值至 6.0]；柱温：25℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm;进样量：20 μL。 在此条件下,盐酸乐卡地平片和有关物质可达到良好的分离，理论塔板数按乐卡地平峰计不得少于2000，见图1。

图1 系统适用性实验图谱

2.2 测定方法

取本品细粉适量，用流动相配制成1mL中含盐酸乐卡地平约0.3 mg的供试品溶液和1mL中含盐酸乐卡地平约6 μg的对照溶液。取对照溶液20 μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%～20%；再准确量取上述两种溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至保留时间的3倍。在供试品溶液色谱中，单个杂质峰的峰面积不得大于对照溶液中主成分峰的峰面积的0.5%，各杂质峰的峰面积之和不得大于对照溶液中主成分峰的峰面积的2.0%[5]。

2.3 专属性考察

2.3.1 破坏试验

取本品20片，置250mL容量瓶中，加0.01moL/L盐酸溶液25mL，超声使崩解，加甲醇100mL超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为样品储备液；按同法操作，用250mL容量瓶配制空白溶剂作为溶剂储备液；同样，取不含盐酸乐卡地平的空白对照样品，制成辅料储备溶液。量取溶剂储备液、样品储备液及辅料各5 mL置于两个刻度试管中,分别用2 moL/L的盐酸1 mL破坏 12 h，破坏后的溶液用相应的碱进行中和；2 moL/L的氢氧化钠1 mL破坏12 h，破坏后的溶液用相应的酸进行中和；30%的双氧水0.5 mL破坏12h；100℃水浴锅中破坏1 h；强光照射下破坏24 h；最后分别用乙腈-0.01 moL/L乙酸铵溶液-三乙胺(650:350:1)[用乙酸调节pH值至6.0]的混合溶液稀释到10 mL的刻度。精密移取上述不同溶液20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，如图2。

2.3.2 破坏结果分析

(1)根据破坏试验的色谱图进行分析，样品经强酸、强碱、光照、氧化、水浴等破坏试验破坏后，降解产物的色谱峰与主峰分离良好。(2)各有关物质均在240 nm的波长处有吸收，说明该HPLC法能有效检测杂质。(3)从图谱可知，氧化后的样品溶液较未被破坏样品溶液多出一个杂质峰，此峰经图谱比较可以看出是双氧水产生的峰。(4)由图可知，辅料样品破坏稳定，在主峰的位置无降解杂质，不干扰本品的有关物质检查。(5)由上述试验结果可知：该色谱条件专属性好，符合本品有关物质检查的要求。

2.4 检测限与定量限的测定

图2 破坏试验的HLPC图谱

取盐酸乐卡地平对照品适量，精密称定为19.6mg，用流动相逐级稀释。分别量取各级稀释溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取盐酸乐卡地平色谱峰峰高，采取信噪比法，按照S/N=3计(N是指噪音，S是信号)，计算盐酸乐卡地平的检测限约为0.2ng；按照S/N=10计，计算盐酸乐卡地平的定量限约为0.4ng。见下图3、4。

图3 盐酸乐卡地平片检出限HPLC图谱

图4 盐酸乐卡地平片定量限HPLC图谱

2.5 精密度的考察

取本品10片，置250 mL量瓶中，加0.01 moL/L盐酸溶液25 mL，超声使崩解，加甲醇100 mL超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液；精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，以面积归一化法计算本品含量，并考察RSD%，结果见下表1。

表1 本品有关物质溶液精密度考察结果

2.6 稳定性的考察

取精密度实验项下的样品溶液，置于室温条件下,在第 0、2、4、6、8 h 分别取样 20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，以面积归一化法计算有关物质，并考察RSD%。结果见下表2。

表2 本品有关物质溶液稳定性考察结果

表3 本品有关物质测定结果

3 有关物质的测定

取4批样品及上市品分别加流动相使其溶解，并稀释成0.3mg/mL的溶液，依法测定有关物质，计算有关物质含量，结果见下表3。

4 讨论

4.1 检测波长的选择

本研究曾参考文献的色谱条件对盐酸乐卡地平有关物质进行测定，结果分离度达不到要求，采用紫外检测器，对供试品溶液进行光谱扫描，发现乐卡地平在356nm处有最大吸收峰，但各杂质峰在此处吸收很少，甚至没有吸收，所以此波长不适宜该药有关物质的含量检查，另外检测到有关物质在波长220nm-240nm之间均有较大吸收，但由于流动相中含有缓冲盐，采用较低波长时，流动相会有干扰，因此决定采用240nm为检测波长来进行有关物质的测定。

4.2 流动相的选择

参照文献，作者以0.15mol/L高氯酸钠溶液(用70%高氯酸调节PH值至3.0)-乙腈(39:61)为流动相时，主峰对称度为2.253，拖尾严重，且分离度(1.221)不好；为了改善主峰对称性，作者在流动相中加入0.1%的三乙胺，并且考虑到色谱柱的耐受性，将流动相的pH值调至6.0，并将极性高的高氯酸钠缓冲液改用极性相对弱的乙酸铵代替，即以乙腈-0.1mol/L乙酸铵溶液-三乙胺 (650:350:1)[用乙酸调节pH值至6.0]为流动相，结果峰形良好，主峰对称度为1.052，理论板数高于4000，且分离度为18.709，各项指标均符合要求,系统适用性良好。因此，本品流动相选择为：乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液-三乙胺(650:350:1)[用乙酸调节pH值至6.0]。

[1]Taya K,Watanabe Y,Kobayashi H,et al.Nimodipine improves the disruption ofspatial cognition induced by cerebral ischemia Physiol[J].Behavior,2000,70:19-25.

[2]杨丽萍,张津枫,张广明,等.反相高效液相色谱法测定乐卡地平片的含量[J].天津药学,2006,18(5):16-18.

[3]黄小玉,尚京川.高效液相-质谱法测定人血浆中乐卡地平的浓度[J].中国医院药学杂志,2008,28(22):1939-1942.

[4]Yuksl Altuna,Bengi Uslu,Sibel A,et al.Electroanalytical Characteristics of Lercanidipine and its Voltammetric Determination in Pharmaceuticals and Human Serum on Boron-Doped Diam-ond Electrode[J].Analytical Letters,2010,43:1958-1975.

[5]张才煜,吴健敏,张启明.关于紫杉醇注射液有关物质检查方法的探讨[J].中国药师,2010,13(9):1310-1312.