P16和Ki-67在宫颈鳞癌癌前病变中的表达及其诊断价值

崔芳瑜，李青，黄文斌

1. 南京迪安医学检测中心 病理室，江苏 南京 210010；2. 南京市妇幼保健院 病理科，江苏 南京 210000；3. 南京市第一医院 病理科，江苏 南京 210006

0 前言

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其中最常见的组织学类型是鳞状细胞癌。已有的研究表明，宫颈鳞状细胞癌是由高危型人类乳头状瘤病毒（HPV）感染所致，导致宫颈鳞状上皮发生上皮内瘤变，并最终发展为浸润性鳞状细胞癌。本文应用免疫组化方法研究宫颈癌前病变中P16和Ki-67表达，探讨它们在宫颈鳞状上皮内瘤变诊断和分类中的价值。

1 材料和方法

1.1 临床资料

收集南京市第一医院和南京市妇幼保健院2009年1～10月门诊宫颈活检病例51例，年龄28～49岁，平均43.7岁。51例宫颈活检病例中慢性宫颈炎10例、低级别CIN16例、高级别CIN25例。所有标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋。

1.2 方法

采用免疫组化EnVision法。切片常规脱蜡，梯度酒精脱水，剩余步骤在自动免疫组化仪（Labvision）上进行。免疫组化具体染色步骤按照仪器操作说明书进行，抗原修复均采用高压锅高温修复。鼠抗人单克隆抗体P16和Ki-67为Novocarstra公司产品，与检测试剂盒均购于福州迈新生物公司。以已知阳性片分别作P16和Ki-67阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

P16表达于细胞核或胞核伴胞质，Ki-67定位于细胞核，见图1～4。

图1 P16在宫颈低级别CIN中的表达，EnVision法×200

图2 P16在宫颈高级别CIN中的表达， EnVision法×100

图3 Ki-67在宫颈低级别CIN中的表达，EnVision法×100

图4 Ki-67在宫颈高级别CIN中的表达，EnVision法×200

P16根据阳性细胞分布而分为阴性、弱阳性（<25%）和强阳性（>25%）。Ki-67表达根据阳性细胞在上皮的分布而分为阴性、低表达（<1/3）、中等表达（1/3～2/3）和高表达（>2/3）。为了分析方便，我们将Ki-67为中等表达及以上者判为阳性，P16>25%作为阳性。

1.4 统计学处理

所有数据应用SPSS13.0统计软件处理。各组资料的比较采用χ2检验和Fisher精确概率检验。

2 结果

2.1 宫颈各组病变中P16和Ki-67的表达

由表1可知，P16在慢性宫颈炎中表达为阴性或局灶性表达，而在低级别CIN中有4例表达阳性，高级别CIN中阳性表达者20例，阳性率分别为25%和80%。P16在高级别CIN中的表达明显高于低级别CIN和慢性宫颈炎，差异有显著性（χ2=12.159，P=0.000；P=0.000），而P16在低级别CIN和慢性宫颈炎中的阳性表达率没有差异（P=0.136）。Ki-67在慢性宫颈炎中主要表达于基底细胞，随着宫颈病变的加重，Ki-67阳性细胞分布向表面上移，高级别CIN均超过上皮1/3，Ki-67在高级别CIN中的阳性表达率明显高于低级别CIN和慢性宫颈炎（χ2=41.000，P=0.000；P=0.000），而在低级别CIN和慢性宫颈炎中表达无差异（P=0.385）。

表1 宫颈各组病变中P16和Ki-67的表达

2.2 P16和Ki-67单个或联用在区分低级别CIN和慢性宫颈炎的价值

由表2可知，P16在区分低级别CIN和慢性宫颈炎的敏感性和特异性分别为25%和100%，Ki-67在区分低级别CIN和慢性宫颈炎的敏感性和特异性分别为0%和90%，P16在区分低级别CIN和慢性宫颈炎的敏感性和特异性虽然高于Ki-67，但差异无显著性（P=0.101；P=1.000）。P16/Ki-67联合检测在区分LSIL和宫颈慢性炎的敏感性和特异性分别为25%和90%，敏感性与P16相当，但＞Ki-67，特异性与Ki-67一样，但略＜P16。

表2 P16和Ki-67在区分慢性宫颈炎和低级别CIN的价值

2.3 P16和Ki-67单个或联用在区分低级别CIN和高级别CIN的价值

从表3可以看出，P16在区分高级别CIN和低级别CIN中的敏感性和特异性分别为80%和75%，而Ki-67在区分高级别CIN和低级别CIN中的敏感性和特异性均为100%，虽然Ki-67＞P16，但差异无显著性（P＞0.05）。P16和Ki-67联合检测对区分高级别和低级别CIN的敏感性和特异性分别为100%和75%，与P16和Ki-67单用没有统计学差异（P＞0.05）。

表3 P16和Ki-67在区分高级别CIN和低级别CIN的价值

3 讨论

宫颈癌是发展中国家最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，已有的研究表明宫颈癌主要是由高危型HPV导致宫颈鳞状上皮发生异型增生并进而发展为浸润性癌。研究显示在宫颈癌发生过程中涉及到多种抑癌基因的失活或癌基因的激活。P16基因位于人染色体9p21上，是第一个发现的直接参与细胞周期调控的抑癌基因。正常情况下P16基因产物通过与CDK4/6结合抑制细胞周期进展，因而阻止了Rb基因的磷酸化和活化。P16在宫颈CIN诊断中的价值国内外已有较多研究，这些研究发现P16蛋白不仅在宫颈肿瘤性上皮细胞表达增加，而且与高危型HPV感染和CIN的程度密切相关[1-3]。我们的实验结果发现慢性宫颈炎中P16不表达或散在表达，随着宫颈上皮内瘤变的加重，P16阳性表达率增加，高级别CIN中P16蛋白阳性表达率可达到80%。国外一些研究显示高级别CIN中P16阳性表达率近90～100%，但有些研究结果却显示有15～30%高级别CIN不表达P16[4]。这些结果的差异可能与P16抗体的克隆号和阳性判断标准不一致有关。在人体其他组织器官恶性肿瘤中研究发现P16蛋白表达缺失或降低，在宫颈鳞状上皮内瘤变和鳞状细胞癌中异常表达可能是HPV E7导致Rb功能失活，继发性的负反馈回路所致[5]。我们的研究结果也进一步证实了P16蛋白的检测可有助于CIN诊断和分级。

Ki-67 的表达出现于除G0、G1早期以外的细胞周期中，并且有丝分裂后迅速降解或失去抗原决定簇，因此，被认为能较可靠全面地反映细胞群体增殖活性的客观指标。研究表明，它与很多恶性肿瘤的发展、转移和预后有关。国外多项研究发现正常情况下Ki-67表达于成熟宫颈鳞状上皮的基底细胞和基底旁细胞，但随着宫颈癌前病变的加重，Ki-67表达向上皮表面上移，Ki-67在鳞状上皮上2/3层表达被认为提高了CIN诊断的特异性[6]。国内李晓玲等[7]研究结果发现Ki-67表达在宫颈良性病变中明显低于恶性病变。本文的研究结果显示Ki-67在慢性宫颈炎中主要表达于基底细胞，而在高级别CIN中Ki-67表达均超过上皮的1/3，也进一步表明Ki-67在宫颈CIN诊断中的价值。

本研究结果显示P16在区分慢性宫颈炎和低级别CIN中的敏感性和特异性虽＞Ki-67，而在区分低级别与高级别CIN中，其敏感性和特异性均＜Ki-67，但差异均无显著性，提示P16在宫颈CIN诊断中的价值与Ki-67基本相当。P16和Ki-67联合检测对慢性宫颈炎和低级别CIN的敏感性和P16一致，但＞Ki-67，其特异性虽＜P16，但和Ki-67相一致。同样，在区分低级别与高级别CIN中P16和Ki-67联合检测的敏感性与Ki-67一致，＞P16，特异性与P16一样，但＜Ki-67，但均未达到统计学意义，提示P16和Ki-67联合检测对慢性宫颈炎和低级别CIN、低级别CIN和高级别CIN的鉴别诊断与单用P16或Ki-67相同，可能与我们研究的病例数相对较少有关，尚需要积累更多的病例进行深入地研究。根据本文的实验结果，结合国内外相关文献的报道，我们认为P16联合Ki-67检测可有助于宫颈CIN的诊断和分级。

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[4]Branca M,Ciotti M,Santini D,et al.P16 (INK4A)expression is related to grade of cin and high-risk human papillomavirus but does not predict virus clearance after conization or disease outcome[J].Int J Gynecol Pathol,2004,23(4):354-365.

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