岩陀中岩白菜素提取工艺优化的探索

王 燕，金 杨，刘振琪*

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.大理州中医医院，云南大理 671000）

岩陀为虎耳草科植物西南鬼灯擎Rodgersia sambucifolia Hemsl.或羽叶鬼灯擎Rodgersia pinnata Hemsl.的干燥根茎〔1〕，具有收敛、消炎、祛风除湿的功效，对菌痢、肠炎、感冒头痛、外伤出血、风湿骨痛、老年性支气管炎等常见疾病有较好的疗效〔2〕，在民间应用广泛。岩白菜素（bergenin）为岩陀的主要有效成分。岩白菜素有止咳作用，中国药典收为镇咳祛痰药，用于慢性支气管炎，文献曾报道岩白菜素还有抗炎、抗溃疡、护肝、抗凝血、抗HIV病毒和提高免疫能力及镇痛等作用〔3〕。因此进一步开发利用岩陀具有重要的社会价值。目前，对岩陀中岩白菜素的提取工艺缺乏系统研究，本文通过正交试验法对其提取工艺进行探讨〔4〕。

1 仪器与试药

LC-20AD型HPLC系统，包括CTO-20AC柱温箱、CBM-20A系统控制器、SPD-M20A二极管阵列检测器、LC solution工作站（日本岛津公司）；TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；XS205型梅特勒电子天平（上海亚荣生化仪器厂）；中药材粉碎机（浙江温岭市林大机械有限公司）。所用药材购自云南大理，由贵州省药品检验所陈德媛研究员鉴定为真品；岩白菜素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：1532-200202）；HPLC所用乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），检测波长为274 nm（ 对照品紫外光谱扫描图见图1），流速为1.0 mL·min-1，柱温为30℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸（10∶90）。 理论塔板数按岩白菜素峰计不得少于4000。对照品及样品色谱图见图2。

图1 岩白菜素对照品的光谱扫描图谱

图2 岩陀中岩白菜素HPLC图谱

2.2 对照品溶液的配置 精密称取干燥至恒量的岩白菜素对照品11.36 mg，置于25 mL的量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得0.4544 mg·mL-1的岩白菜素对照品溶液。

2.3 标准曲线的绘制 取上述岩白菜素对照品溶液，分别进样2、4、6、8、10、12 μL，按上述色谱条件测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，岩白菜素进样量（X，μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=2×106X-86377（ r=0.9998）。 结果表明，岩白菜素进样量在0.9088～5.4528 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备 合并所得滤液，挥干，残渣加甲醇适量，溶解，全部转移至25 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，临用前过0.45 μm滤膜。

2.5 岩白菜素含量测定〔5〕取上述对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，各进样10 μL，用外标法计算供试品溶液中岩白菜素的含量（mg·g-1），计算公式为：

岩白菜素的含量（ mg·g-1）=（ A供/A对）×C对×25/W

A对为对照品溶液峰面积积分值；A供为供试品溶液峰面积积分值；C对为对照品溶液浓度（mg·mL-1）；25为溶液稀释倍数；W为供试品取样量（g）。

2.6 提取方法的选择 称取岩陀细粉（过四号筛）0.5 g，平行3份，精密称定，分别加20 mL甲醇，用冷浸提取法冷浸24 h；超声提取法提取20 min；回流提取法提取40 min，滤过，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件操作，各进样10 μL，测定岩白菜素含量。不同提取方法对岩白菜素含量的影响见表1。

表1 不同提取方法对岩白菜素含量的影响

由表1可知，采用超声提取法得到的提取物岩白菜素含量最高，因此选择超声为提取方法。

2.7 提取溶剂的选择〔6〕称取岩陀细粉（过四号筛）0.5 g，平行4份，精密称定，分别加20 mL的水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯，用超声提取法提取20 min，滤过，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件操作，各进样10 μL，测定岩白菜素含量。不同提取溶剂对岩白菜素含量的影响见表2。

表2 不同提取溶剂对岩白菜素含量的影响

由表2可知，采用甲醇作为提取溶剂得到的提取物岩白菜素含量最高，因此选甲醇为提取溶剂。

2.8 正交试验 称取岩陀细粉（过四号筛）0.5 g，平行9份，精密称定，按L9（34）表下条件进行提取，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件操作，各进样10 μL，测定岩白菜素含量。根据预试验结果，选择溶剂浓度（A），溶剂体积（B），提取时间（C）和提取次数（D）为考察因素，按正交设计表进行试验。因素水平见表3，正交试验结果见表4，方差试验结果见表5。

表3 因素水平表

表4 正交试验结果

表5 方差分析结果

由表4、表5可知，4种因素对提取物岩白菜素含量的影响程度依次为C＞A＞D＞B，即提取时间＞溶剂浓度＞提取次数＞溶剂体积，提取时间、溶剂浓度、提取次数对提取物岩白菜素含量都具有统计学意义（P＜0.05），溶剂体积对提取物岩白菜素含量无统计学意义，且其3个水平结果相差不大。为了使滤过等操作便于进行，最终确定最佳提取工艺为A2B2C3D3，即用60%的甲醇20 mL，超声提取3次，每次30 min。

2.9 验证试验 按正交试验结果，称取岩陀细粉（过四号筛）0.5 g，平行6份，精密称定，分别加60%的甲醇20 mL，超声提取3次，每次30 min，滤过，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件操作，各进样10 μL，测定岩白菜素含量。结果见表6。

表6 验证试验结果

由表6可知，优化得到的工艺简便、易行，稳定性好，重现性好，可为进一步开发利用该药材提供理论参考。

3 讨论

超声提取法操作简单、省时，最主要的是提取效果高。作为中药提取的工艺之一，具有良好的应用前景，且实验可在室温下进行，设备简单，操作方便〔7〕，是提取岩陀中岩白菜素的一种有效方法。

在超声条件下提取岩陀中岩白菜素时，根据预实验结果和文献报道〔3〕综合分析得知超声温度和超声功率对岩白菜素含量影响微弱，因此未把超声温度和超声功率列入正交试验。通过正交试验结果可知，提取时间、溶剂浓度、提取次数是影响岩白菜素含量的主要因素，而溶剂体积对岩白菜素含量影响较小。本实验所优化得到的岩陀中岩白菜素提取工艺简单、经济、稳定、可行。

〔1〕贵州省药监局.贵州省中药材、民族药材质量标准〔S〕.贵阳：贵州科技出版社，2003.

〔2〕史彦斌，胡振英，董鹏程，等.中草药鬼灯檠的现代研究进展〔J〕.时珍国医国药，2004，15（ 9）：23-24.

〔3〕蔡正军，但飞军，王威，等.超声提取鬼灯擎中岩白菜素的最佳工艺研究〔J〕.中国现代应用药学杂志，2009，26（ 7）：559-561.

〔4〕陈吉生，黄雪莹.正交试验优选荔枝核总皂苷提取工艺〔J〕.中国药房，2009，20（ 27）：2107-2109.

〔5〕肖培云，杨永寿，施贵荣，等.HPLC法测定喙尾琵琶甲药材中氨基酸的含量〔J〕.安徽农业科学，2011，39（ 23）：14162-14163.

〔6〕李君富，尹蓉莉，李肖屹，等.正交试验优选葛根芩连汤提取工艺〔J〕.中国药房，2009，20（ 27）：2114-2116.

〔7〕吴晓宁，张春椿，吴巧凤.乌蕨总黄酮超声提取工艺的研究〔J〕.中国中医药科技，2007，14（ 3）：190-191.