正交试验法优选芍黄通便合剂的水提取工艺＊

2012-09-14郭廷东唐志立谢雨洮

中国药业 2012年24期

郭廷东，唐志立，谢雨洮，张惠，向薇

(四川省南充市中心医院中药剂科，四川南充 637000)

芍黄通便合剂由白芍、大黄、大腹皮、槟榔等组方，具有宽肠通便、行气导滞、洁肠净腑的功效，适用于气机不畅、腑实不通引起的便秘，阿片类药物引起的便秘，术后便秘等症[1]。该方是我院临床应用多年的协议处方，疗效确切，目前尚无不良反应发生，因此选为院内制剂研发，便于服用，为临床便秘提供了新的用药选择。笔者以方中君药白芍有效成分芍药苷及总的水浸出物为指标对其水提取工艺进行了考察，以期为扩大生产提供依据。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，包括2695泵、自动进样器、柱温箱，2487二极阵列检测器;电子天平;芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0736－9912);芍黄通便合剂(南充市中心医院制剂室提供，规格为100mL/瓶，批号为111121);阴性样品(南充市中心医院制剂室);乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂试药均为分析纯;试验所用中药饮片购于南充市药业集团中药饮片厂。

2 方法与结果

2.1 芍药苷含量测定[2]

2.1.1 色谱条件

色谱柱:Phenomene C18柱(250 mm ×4.60 mm，5μm);流动相:乙腈－0.1% 磷酸(20∶80)，流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:37℃，进样量:10μL。保留时间12min左右。

2.1.2 溶液制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1mL含68.2μg的溶液，即得对照品溶液。精密量取芍黄通便合剂2mL，加95%乙醇稀释，摇匀，过滤，取滤液，定容至25mL，即得供试品溶液。按处方组成同法同比例制成不含白芍的阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

干扰试验:分别精密量取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10μL，按上述色谱条件进样测定。结果表明，阴性对照品在芍药苷保留时间处无色谱峰，样品溶液中芍药苷与其他成分分离较好，表明阴性对照品对测定无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取芍药苷对照品溶液 2，4，8，10，12，15μL进样，测定其峰面积，以峰面积值(Y)对进样量(X)进行线性回归，得方程 Y=1.59 ×106X+5.05(r=0.999 7)。结果表明，芍药苷进样量在0.136～1.023μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积，结果的 RSD=0.58%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一批号供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，12 h进样10μL，测定峰面积。结果的 RSD=0.9%(n=6)，表明供试品在12 h内稳定。

重复性试验:取样品成品液6份，依法制备供试品溶液，进样10 μL 测定。结果芍药苷平均含量为 1.613 g/L，RSD=1.3%(n=6)，表明方法的重复性好。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品6份(成品液)，每份 1mL，分别加入对照品溶液 1.5，1.5，1.6，1.6，1.7，1.7mL，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算平均回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率试验结果(n=6)

2.2 水提取最佳工艺研究

2.2.1 因素水平选择

根据处方中药物的性质，经过初步考察，以提取后滤液中水浸出物与芍药苷含量为考察指标，选取对提取效率影响较大的提取时间(因素A)、提取次数(因素 B)、加水量(因素 C)作为考察因素，按表2水平，采用 L9(34)正交试验。

2.2.2 正交试验

取9份一瓶量处方药材(大黄除外)，适当碎段，按正交设计方案，煎煮，过滤，浓缩至约100mL。量取浓缩液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定质量，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。依据2.1.2项下供试品溶液的配制方法进行样品处理，在拟订色谱条件下测定芍药苷的含量。结果见表3。

2.2.3 试验结果分析

从表3中级差 R值可知，影响水浸出物和芍药苷含量的因素大小依次为A＞B＞C，即提取时间＞提取次数＞加水量，最佳提取工艺为A2B2C3，即每次提取1.5 h，提取2次，加水12倍。由方差分析可知，A因素有显著意义，应取A2，B因素稍有影响，但B2、B3差别不大，从节约能源和缩短工序考虑选择B2，C因素为不显著因素，即加水量对提取结果影响不大。故最佳提取工艺条件选择为A2B2C1，即提取2次，每次1.5 h，加水8倍。方差分析见表4。

2.2.4 验证试验

根据最佳工艺条件，即8倍水，提取2次，每次1.5 h，提取3批，测得其结果见表5。可知，验证试验结果与正交试验结果一致，说明提取工艺条件基本稳定可行，确定白芍、大腹皮、决明子、火麻仁、槟榔、白术等水提取工艺为:8倍水，提取2次，每次1.5 h。

表2 正交试验因素水平表

3 讨论

白芍为方中君药，试验表明，白芍能使大肠黏液分泌增加，促进小肠、大肠的推动运动，并使小肠、大肠含水量增多，对便秘有较好疗效[3]，白芍的活性成分是芍药苷，故本试验以芍药苷为评价指标之一。大黄致泻的主要成分为结合型蒽醌，久煎泻下作用减弱[4]，大黄在提取过程中，温度和时间对大黄蒽醌类成分影响较大，研究证明，夹层锅蒸汽煎煮2次，每次10min，可结合型蒽醌蒽苷溶出率最高[5]。因此，方中大黄采用单煎，取汤液，配液时加入的方法。