高效液相色谱法测定小儿热速清糖浆中黄芩苷含量

2012-09-14李延雪苏玉娟

中国药业 2012年24期

李延雪，孙菲，苏玉娟

(黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西 158100)

小儿热速清糖浆由柴胡、黄芩、葛根、水牛角、金银花、板蓝根、连翘、大黄8味药材经适宜加工方法制成的中药口服制剂，具有清热解毒、泻火利咽的功效，用于小儿外感高热、头痛、咽喉肿痛、鼻塞、流涕、咳嗽、大便干结，收载于国家食品药品监督管理局国家药品标准，标准号WS3－172(Z－172)－2009Z。黄芩是处方中的君药，其中的有效成分黄酮化合物之一黄芩苷具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化等多种生物活性[1]。原质量标准中无黄芩苷的含量测定项，笔者参考文献[2－10]采用高效液相色谱法测定了黄芩苷的含量，样品处理方法简单，分离效果好，方法快速准确，重复性好，可更好地控制该制剂的质量。现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－2010A型高效液相色谱仪(包括LC－2010型紫外检测器，LC solution色谱工作站);AG285型电子分析天平;岛津UV－2550型紫外分光光度计。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110715－200815，含量95.2%);小儿热速清糖浆(批号分别为20110901，20110902，20110903);D101型大孔吸附树脂(天津市汇达化工有限公司，粒度为16～60目);水为纯化水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Extend C18柱(250mm ×4.6mm，5μm);流动相:甲醇－水－磷酸(47∶53∶0.2);流速:0.9mL/min;柱温:30℃;对照品进样量:10μL;供试品进样量:5μL;检测波长:276 nm。理论板数按黄芩苷峰计算不低于6 000。

2.2 溶液制备

精密称取黄芩苷对照品适量，加50%甲醇适量，置热水浴中振摇使溶解，制成每1 mL中含黄芩苷对照品26.22μg的溶液，即得对照品溶液。精密量取本品0.5mL，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm，柱高 10 cm)，以 1.5mL/min流速用水70mL洗脱，继用40%乙醇洗脱，弃去8mL洗脱液，收集续洗脱液，置50mL量瓶中至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量并以相同工艺制备不含黄芩的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2项下3种溶液，按2.1项下色谱条件测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，在黄芩苷色谱峰相应位置上无干扰峰出现，表明阴性样品的其他组分对黄芩苷的测定无干扰(见图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取上述含黄芩苷对照品的溶液2，5，10，15，20，25，30 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品进样质量浓度为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，得回归方程 Y=4.049 8×104X －4.021 3×103，r=1.000 0(n=7)。结果表明黄芩苷质量浓度在5.245～78.68μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10μL，连续进样6次，以峰面积计算。结果黄芩苷的平均峰面积值为1 054 809，RSD=0.28%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:分别精密吸取同一批样品(批号为20110901)6份，按供试品溶液的制备方法制备，测定含量。结果黄芩苷的平均含量为 6.12 g/L，RSD=0.74%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:精密吸取供试品溶液(批号为20110901)，在0，2，4，6，8，12，24 h 时分别进样 5 μL，记录峰面积。结果黄芩苷峰面积的平均值为1 210 984，RSD=1.05%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验:取已知含量的同批样品(批号为20110901，黄芩苷含量为6.12 g/L)6份，每份精密量取本品0.25mL，以3份为1组，共3组，每组分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.153 0 g/L)8，10，12mL，按供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。