高效液相色谱法测定路边菊中绿原酸含量

2012-09-14梁聂彦陈学松

中国药业 2012年23期

梁聂彦，陈学松

(1.广西壮族自治区岑溪市人民医院，广西梧州 543200;2.广西壮族自治区梧州市食品药品检验所，广西梧州 543002)

路边菊始载于《本草拾遗》，原名紫菊，谓“其花呼为紫菊，以其花似菊而紫也”[1]，分布于我国南方各省，现无GAP基地。其性辛、苦，寒[2]，归肺、肝、胃、大肠经，具有清热解毒、散瘀止血、消积的功效。为更好地控制药材质量，笔者对路边菊的含量测定等进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试药

Shimadzu LC－20AD型高效液相色谱仪;AE240S型电子天平(梅特勒－托利多仪器＜上海＞有限公司);绿原酸对照品(批号为110753－200413，中国药品生物制品检定所，供含量测定用);10批路边菊样品(分别采自广西壮族自治区苍梧县新地镇都梅村、龙圩镇寨中村，梧州市)，经广西壮族自治区梧州市食品药品检验所鉴定为菊科马兰属植物马兰 Kalimeris indica(L.)Sch.－Bip的全草;乙腈为色谱纯(Merck)，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent SB －C18柱 (250 mm ×4.6 mm，5 μm);流速:1.0 mL/min;检测波长:348 nm;柱温:35 ℃;进样体积:10 μL;流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液[3]。高效液相色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取绿原酸5.21 g，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，得质量浓度为0.104 2 g/L的对照品溶液。取本品粉末(过一号筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率300 W，频率45 kHz)40 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取已配制好的对照品溶液，分别精密吸取0.25，0.50，1.00，1.00，4.00 mL 至 10，10，10，5，5 mL 量瓶中，加溶剂 70% 甲醇得质量浓度分别为 0.002 605，0.005 21，0.010 42，0.020 84，0.041 68 g/L的对照品溶液，按拟订的色谱条件测定峰面积。以绿原酸进样量(μg)为纵坐标(Y)、峰面积为横坐标(X)绘制标准曲线，得回归方程 Y=1 846 039 X－10 829，r=0.999 9(n=5)。结果表明，绿原酸进样量在 0.026 05 ～1.667 2 μg 范围内与峰面积具有良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液(质量浓度为0.020 84 g/L)，按拟订的色谱条件连续进样测定。结果的 RSD=0.1%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按拟订的色谱条件分别在0，3，6，9，15，30 h 时进样测定。结果峰面积积分值的 RSD 为0.6%(n=6)，表明供试品溶液在30 h内稳定。

重复性试验:精密称取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并进样测定。结果绿原酸平均含量是0.19%，RSD=0.7%(n=6)。

加样回收试验:精密称取已测定含量样品(0.19%)0.25 g，置25 mL量瓶中，取样9份，分别精密加入质量浓度为0.208 4 g/L的绿原酸对照品溶液 1.80，2.30，2.80 mL，按拟订的方法测定，计算回收率。结果见表1。