通便玉蓉丸治疗非酒精性脂肪肝及高脂血症的实验研究＊

闫曙光 周永学 惠 毅 成都中医药大学（成都 610075）

脂肪肝是由多种原因引起的肝细胞内脂肪堆积和脂肪变性为特征的病理状态。近年来脂肪肝的发病主要与肥胖的高发密切相关，肥胖与脂肪肝的关系比饮酒与脂肪肝的关系更为密切［1］。有学者研究发现肥胖导致的脂肪肝60%都是由营养过剩引起的［2］。目前对非酒精性脂肪肝的治疗以合理饮食和增加体力运动为主的生活方式的干预较为有效，但依从性不够。临床上尚缺乏较满意的抗脂肪肝药，已报道的考来烯胺、烟酸肌醇酯、苯扎贝特、吉非罗齐等药物虽然可以从不同环节抑制脂肪肝，但不良反应多、疗程长，故临床应用受到限制。我们在临床应用通便玉蓉丸治疗便秘的同时，发现该药治疗非酒精性脂肪肝以及高脂血症疗效显著，为了进一步验证其治疗作用，我们对该药治疗非酒精性脂肪肝及高脂血症进行了实验研究。

1 材 料 1.1 实验动物 雄性SD大鼠66只，体重80～120g清洁级，由西安交大医学院实验动物中心提供，动物的饲养和实验在陕西中医学院清洁级动物实验室。

1.2 仪器 低温冰箱：日本三洋公司；低温4℃离心机：上海第三仪器厂；LD－10001型电子天平：沈阳龙腾电子称量仪器有限公司；721分光光度计：上海第三仪器厂；奥林巴斯显微镜（Imager A1Zeiss）。OET－200半自动生化分析仪：北京尚精光电技术有限公司。

1.3 药物 通便玉蓉丸：陕西中医学院制药厂制备，批号：20101001，通便玉蓉丸每克含生药1.977g，用时将药粉与蒸馏水配制成所需浓度的混悬液。东宝肝泰：通化东宝药业股份有限公司生产，批号：100114，用时将药片研磨后用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液。

1.4 试剂和试剂盒 游离脂肪酸（FFA）、超氧化物歧化酶（SOD）蛋白测定试剂盒购于南京建成生物医学工程研究所；总胆固醇（TC）试剂盒：上海荣盛生物技术有限公司；甘油三脂（TG）试剂盒：温州津玛生物科技有限公司；胆固醇：湖南祁东县同信生化厂；10%水合氯醛：陕西中医学院附属医院制剂研究中心。

2 方 法 2.1 动物模型的建立和给药 大鼠适应性喂养1周，随机分为正常组、模型组、东宝肝泰组、通便玉蓉丸大、中、小剂量组，每组10只。正常组普通饲料喂养，余高脂饲料喂养，配方根据文献报道［3］进行改进（普通饲料77%、胆固醇1%、猪油20%、花生5%、奶粉5%、白糖2%），喂养16周后，每组随机抽取1只，取肝脏，可见大鼠肝脏体积增大，呈淡黄色，触之有油腻感。镜下见肝细胞肿大变圆，胞浆疏松，内含大的脂肪滴，将细胞核挤压向胞膜，确定造模成功（见图2）。开始灌胃给药，正常组：生理盐水10mL／kg／d，模型组：生理盐水10mL／kg／d，大剂量组：通便玉蓉丸混悬液3.67g／kg／d，中剂量组：1.83g／kg／d，小剂量组：0.915g／kg／d，东宝肝泰组：东宝肝泰混悬液0.45g／kg／d，给药30d。给药期间除正常对照组外，其余各组继续给予高脂饮食，直至实验结束。

2.2 样本的采集与检测 实验动物禁食12h，10%水合氯醛麻醉，心脏采血，4000转／分离心15min清液，检测血清TG、TC、FFA含量。取肝脏，称重后计算肝指数。肝组织制成10%的组织匀浆，测匀浆TC、TG、SOD，取部分肝组织4%甲醛固定。做病理切片行病理组织学检查。

2.3 统计学方法 采用SPSS17.0处理数据，计量资料采用均数±标准差（）表示。

3 实验结果 3.1 一般情况 各组高脂饮食喂养大鼠10周后反应较正常组迟钝，毛色发黄，失去光泽，喜扎堆，懒动且摄食量逐渐减少。灌胃给药后通便玉蓉丸大、中、小剂量组在灌胃两天后均出现不同程度的稀便，其中以大剂量组最为明显，约3周后稀便逐渐消失，但便质软，含水量增多。

3.2 各组实验大鼠血清胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸的变化 表1显示：模型组与正常组比较血清甘油三脂、胆固醇和游离脂肪酸浓度升高且有统计学意义（P＜0.05），符合高脂血症的发病特点。各给药组与模型组比较，通便玉蓉丸大、中剂量组能降低血清TG、TC和FFA水平且有统计学意义P＜0.05，通便玉蓉丸小剂量组能降低血清TC、FFA水平且有统计学意义（P＜0.05）。通便玉蓉丸大、中剂量组的降血脂作用最强。东宝肝泰对血清TG、TC和FFA的影响无统计学意义。

表1 对非酒精性脂肪肝大鼠血清胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸含量的影响

3.3 各组大鼠肝组织匀浆甘油三酯、胆固醇、超氧化物歧化酶的变化 表2表明：模型组大鼠肝脏匀浆TG、TC含量明显高于正常组，超氧化物歧化酶水平低于正常组，且均有统计学意义（P＜0.05），符合非酒精性脂肪肝的特点。与模型组比较，通便玉蓉丸大、中剂量以及东宝肝泰均能明显降低肝组织内TG、TC水平且有统计学意义（P＜0.05），通便玉蓉丸小剂量则无统计学意义（P＞0.05）。通便玉蓉丸大剂量及东宝肝泰能显著增加肝组织内SOD活性（P＜0.05），通便玉蓉丸中、小剂量则无统计学意义（P＞0.05）。与东宝肝泰组比较，通便玉蓉丸大、中剂量能更有效降低肝内TG、TC含量且有统计学意义（P＜0.05）。通便玉蓉丸大剂量组升高肝内SOD活性的作用于东宝肝泰组相当（P＞0.05）。

表2 对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织匀浆甘油三脂、胆固醇、超氧化物歧化酶含量的影响

图1

图2

图3

图4

图5

图6

3.4 各组大鼠给药前后体重以及肝指数变化 表3表明，各组大鼠在治疗前体重均明显高于正常组，有统计学意义（P＜0.05），符合肥胖特征。灌胃给药后与模型组相比，通便玉蓉丸大、中剂量体重明显降低且有统计学意义（P＜0.05），通便玉蓉丸大、中、小剂量组，东宝肝泰肝指数明显降低且有统计学意义（P＜0.05）。与东宝肝泰组比较，通便玉蓉丸大剂量体重明显降低，有统计学意义（P＜0.05）；通便玉蓉丸大、中剂量肝指数降低显著，有统计学意义（P＜0.05）。

表3 治疗前后体重以及肝指数的变化

3.5 肝组织病理学变化 3.5.1 大体形态观察：正常组大鼠肝脏颜色鲜红，质地柔软，富有弹性；模型组大鼠肝脏体积明显增大，呈黄褐色，触之有油腻感，边缘饱满，质地稍韧。

3.5.2 肝脏组织HE染色观察：正常大鼠肝细胞无脂肪变性，肝索排列整齐，肝窦清晰（图1）；模型组肝细胞发生程度不等脂肪变性，肝细胞肿大变圆，胞浆疏松，内含大的脂肪滴，将细胞核挤压向胞膜，肝索排列混乱，肝窦受压变形（图2）；通便玉蓉丸大剂量组（图3），中剂量组（图4）肝脏未见脂变细胞，可见少量炎细胞浸润。通便玉蓉丸小剂量组（图5）以及东宝肝泰组（图6）可见大量脂变肝细胞以及炎细胞。

4 讨 论 通便玉蓉丸是周永学教授临床治疗肾虚精亏型便秘常用方，由肉苁蓉、当归、芒硝等中药组成，具有滋补肾精，软坚散结，滋阴润肠、运下通便的功效。目前对非酒精性脂肪肝的中医药治疗以从肝脾论治为主［4－6］，通便玉蓉丸则体现了从肾论治非酒精性脂肪肝的思想。通便玉蓉丸所治的非酒精性脂肪肝及高脂血症患者多表现为肾精亏虚，肾精不足则肾阴、肾阳的功能不能正常发挥，肾阴不足，则水不涵木，肝的疏泄功能失常；肾阳不足则血液运行的原动力不足，肾阳不能温煦脾阳则脾不能正常运化水湿痰浊，进而导致脂肪肝以及高脂血症等脂代谢紊乱性疾病。通便玉蓉丸能滋补肾精，有助于肾阴、肾阳功能的发挥，方中当归活血润肠、芒硝通便泻下，促进了水湿痰浊的转运，从而起到影响脂质代谢转运，对非酒精性脂肪肝以及高脂血症起到治疗作用。实验研究证明该药能降低脂肪肝大鼠肝组织内的甘油三脂和胆固醇含量，升高因脂肪肝而降低的组织内SOD水平，而起到保护肝细胞的作用，SOD在机体的氧化和抗氧化平衡中起到了极为关键的作用，能清除超氧离子自由基，保护细胞免受损伤［7］。通便玉蓉丸能能降低高脂血症大鼠血清甘油三脂、胆固醇和游离脂肪酸水平，起到治疗高脂血症的作用，且能有效降低肥胖大鼠体重，王欢［8］等通过实验研究也发现该药能有效降低便秘小鼠的体重的作用。高脂血是动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等高发疾病的主要诱发因素，因此本药物通过治疗高脂血症对该类疾病又有一定的预防作用。本实验从探索的角度初步验证了通便玉蓉丸对非酒精性脂肪肝以及高脂血症的治疗作用，其具体作用机制还需进一步研究。

［1］范建高.非酒精性脂肪性肝病的流行率［J］.中国医师进修杂志，2006，9（29）：9.

［2］钟 岚，范建高，王国良，等.肥胖、高脂血症性脂肪性肝［J］.广西医科大学学报，2000，17（2）：16－20.

［3］张玉峰，陈文惠.非酒精性脂肪肝动物模型造模方法的研究［J］.中西医结合肝病杂志，2002，12（2）：123－125.

［4］李合国.国医大师李振华教授从脾论治非酒精性脂肪肝经验［J］.中医研究，2011，24（7）：62－63.

［5］刘淑红，高尚社.国医大师周仲英教授辨治脂肪肝验案赏析［J］.光明中医，2011，26（7）：1319－1321.

［6］杜秀英.中医对脂肪肝的认识及治疗现状［J］.陕西中医，2002，23（1）：85－86.

［7］邴飞虹，常 青.华夏小葱制剂对脂肪肝大鼠抗脂质过氧化损伤及细胞因子损伤的影响［J］.中医杂志，2007，48（5）：446－449.

［8］王 欢，周永学.通便玉蓉丸通便效应及机制的实验研究［J］.陕西中医学院学报，2011，34（4）：76－78.