乙酰肝素酶-2在结肠癌中的表达及其临床意义

曾 超，宋玉兰，姚运红

(1.广东医学院病理学教研室，广东 东莞 523808；2.广东药学院附属第一医院病理科，广东 广州 510080)

乙酰肝素酶-2在结肠癌中的表达及其临床意义

曾 超1，宋玉兰2，姚运红1

(1.广东医学院病理学教研室，广东 东莞 523808；2.广东药学院附属第一医院病理科，广东 广州 510080)

目的研究乙酰肝素酶-2(Hpa-2)在结肠癌组织中的表达及其与各临床病理因素的相关性。方法采用免疫组化检测结肠癌组织和癌旁正常结肠组织中Hpa-2蛋白表达情况。结果结肠癌组织中Hpa-2蛋白表达阳性率高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结肠癌临床分期越高，阳性表达率越高；分化程度越高，阳性表达率越低；Hpa-2表达在有淋巴结转移组中明显高于无淋巴结转移组(P均＜0.05)。结论Hpa-2在结肠癌的进展中起着重要作用，可作为判断大肠癌恶性程度的指标。

结肠癌；乙酰肝素酶-2；免疫组化

乙酰肝素酶(Hpa)是一种内源性β-葡萄糖醛酸酯酶，识别并且切割硫酸乙酰肝素蛋白多糖的侧链，硫酸乙酰肝素被切割和降解为10个左右糖单位大小的短链。因此，Hpa不仅可以破坏细胞外基质和基底膜，降低细胞间质屏障功能，还可以促进肿瘤细胞侵入基质和血管壁，从而在肿瘤转移过程中起重要作用[1]。Hpa是目前发现的唯一的作用于细胞外基质多聚糖成分的酶，可以认为它是引起肿瘤转移关键酶，同时也是一个抗肿瘤转移的新靶点。人类Hpa有Hpa-l、Hpa-2两个亚型，目前人们的研究热点都集中在Hpa-l，已经证实Hpa-l高表达与多种恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关[2-5]，而对HPa-2的研究报道较少。考虑到人类Hpa-l和Hpa-2的氨基酸序列约有35%的一致性，因此，Hpa-2可能在恶性肿瘤的进展过程中起重要作用。本实验旨在探讨Hpa-2的表达与结肠癌发生发展的关系，阐明Hpa-2在结肠癌进展过程中的作用，以期寻找结肠癌诊断及治疗的新靶点。

1 资料与方法

1.1 病例资料 收集广东药学院附属第一医院2002年2月至2004年2月的手术存档石蜡标本40例，男性26例，女性14例；年龄48～76岁，中位年龄62岁。所有病例都经病理医生证实为腺癌，其中低分化及未分化腺癌10例，高分化及中分化腺癌30例；有淋巴结转移19例，无淋巴结转移21例；癌组织侵及黏膜及黏膜下层的18例，侵及肌层和浆膜层的22例；TNM分期标准分为Ⅰ/Ⅱ期21例，Ⅲ/Ⅳ期19例。患者术前均未行任何治疗。

1.2 主要试剂 免疫组化染色试剂盒购自迈新生物公司，实验采用S-P免疫组化法，兔抗人多克隆抗体Hpa-2购自Santa Cruz(sc-30123)。实验步骤按试剂盒说明书进行。

1.3 免疫组化染色结果判定 Hpa-2表达阳性染色定位于肿瘤细胞胞浆。以阳性细胞比例和细胞染色强度的乘积判定肿瘤细胞中Hpa-2评分。肿瘤细胞染色强度评分标准：无着色，0分；淡黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分；阳性细胞比例评分标准：阳性细胞数＜6%，6%～24%，25%～49%，50%～74%及≥75%的病例，分别判定评分为0、1、2、3、4。用强度和阳性细胞数的评分的乘积进行最终评分：＜2分为阴性表达，≥2分为阳性表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS11.0统计软件分析，对所获得数据进行卡方检验和Fisher确切概率法检测，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠癌组织与癌旁正常结肠黏膜组织中Hpa-2的表达情况检测 免疫组化分析结果表明：癌旁正常结肠黏膜中Hpa-2蛋白阳性表达率为37.50%(15/40)，在结肠癌组织中Hpa-2蛋白阳性表达率为72.50%(29/40)，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Hpa-2在癌旁结肠黏膜组织中表达阳性率低(图1)，Hpa-2在不同分化程度的结肠癌组织中均有阳性表达，其表达主要定位于肿瘤细胞胞浆中(图2～图4)，阳性染色肿瘤细胞呈弥漫性分布于肿瘤间质之中。

图1 Hpa-2在癌旁正常结肠黏膜组织中阴性表达(200×)；图2 Hpa-2在高分化结肠癌组织中的表达(200×)；图3 Hpa-2在中分化结肠癌组织中的表达(200×)；图4 Hpa-2在低分化结肠癌组织中的表达(200×)

2.2 Hpa-2的表达与结肠癌各临床病理因素之间的关系 Hpa-2表达与结肠癌临床病理因素之间的关系详见表1。统计结果表明，Hpa-2表达与肿瘤细胞浸润深度、TNM分期和肿瘤有无淋巴结转移有关(P＜0.05)，而与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度等临床病理因素之间无明显相关性(P＞0.05)。

表1 结肠癌组织中Hpa-2蛋白表达与各临床病理因素的关系（例）

3 讨论

结肠癌是消化系统最为常见的恶性肿瘤之一。研究表明，随着人民生活水平质量的不断提高，饮食结构发生变化，结肠癌发病率和病死率也呈逐年上升趋势。与大多数其他恶性肿瘤一样，侵袭和转移是结肠癌的重要生物学特征，也是严重影响患者预后的主要因素。研究发现，Hpa-1在肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用，Hpa-1可以破坏、改变基底膜和细胞外基质的结构，从而突破侵袭和转移的屏障，加速肿瘤细胞的侵袭和转移；Hpa-1还可通过调控VEGF的表达，诱导肿瘤血管生成。值得注意的是，作为Hpa家族的另一重要成员[6]，与Hpa-1具有高度同源性的Hpa-2在结肠癌发生发展过程中的作用尚未见报道。

本实验发现Hpa-2蛋白高表达于在结肠癌癌细胞胞浆中，且其阳性表达率明显高于癌旁正常结肠黏膜组织，提示Hpa-2蛋白表达在结肠癌的发生中发挥着重要作用。Hpa-2蛋白在黏膜及黏膜下层中阳性表达率显著低于在肌层和浆膜层中的表达，提示Hpa-2可能在促进癌细胞的浸润和侵袭能力等方面起着重要作用。Hpa-2蛋白在Ⅲ/Ⅳ期中的表达明显高于Ⅰ/Ⅱ，表明Hpa-2与结肠癌的临床进展具有显著相关性。Hpa-2蛋白在高-中与低-未不同分化程度结肠癌组织中的表达差异无统计学意义，揭示Hpa蛋白表达可能与结肠癌分化程度无关。Hpa-2蛋白表达在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组，提示Hpa-2与结肠癌组织的淋巴结转移密切相关。

总之，实验结果表明，Hpa-2蛋白在结肠癌组织中的表达不仅可以促进结肠癌的进展，而且严重影响患者的预后。本研究为结肠癌的基因治疗提供了新的分子靶点和实验依据，但Hpa-2促进结肠癌侵袭转移的具体分子机制需进一步深入研究。

[1]Watanabe M,Aoki Y,Kase H,et a1.Heparanase expression and angiogenesis in endometrialesncer[J].Gynecol Obstet Invest,2003,56 (2):77-82.

[2]Maxhimer JB,Quiros RM,Stewart R,et a1.Heparanase-1 expression is associated with the metastatic potentialof breastcancer[J]. Surgery,2002,132(2):326-333．

[3]Fairbanksm MB,Mildner AM,Leone JW,et a1.Processing of the human heparanase precursor and evidence that the active enzyme is aheterodimer[J].J Biol Chem,1999,274(42):29587-29590.

[4]Friedmann Y,Vlodavsky I,Aingmo HT,et a1.Expression of heparanase in normol dysplastic and neoplastichuman colon mucosa and stroma Evidenceforitsroleinclonictumoirgenesis[J].Am J Pathol, 2000,157(4):1167-1175.

[5]Kin AM,Xu X,Hollinger EF,et a1.Human heparanase gene expression in adenocarcinoma[J].J Gastrointest Surg,2002,6(2):167-172. [6]Mekeie E,Tyson K,Stamps A,et al.Cloing and expression Profiling of HPa-2 a novel mammalian heParanase family member[J]. Biochem Biophys Res Commun,2000,276(30):1170-1177.

Expression of Heparanase-2 in colorectal carcinoma and its clinical significance.

ZENG Chao1,SONG Yu-lan2, YAO Yun-hong1.
1.Department of Pathology,Guangdong Medical College,Guangzhou 523808,Guangdong,CHINA;2. Department of Pathology,the First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510080, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression of Heparanase-2(Hpa-2)protein in colorectal carcinoma and its relation to clinicopathologic features.MethodsThe Hpa-2 protein levels were detected in 40 patients of colorectal carcinoma by immunohistochemistry.ResultsThe positive expression rates of Hpa-2 in colorectal carcinoma were significantly higher than those in adjacent normal tissues(P＜0.05).The positive expression of Hpa-2 was associated with TNM stage and lymphnode metastasis.ConclusionHpa-2 may play a role in the carcinogenesis of colorectla carcinoma.

Colorectal carcinoma;Hpa-2;Immunohistochemistry

R735.3+5

A

1003—6350（2012）20—003—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.20.002

2012-03-27)

曾 超(1979—)，男，湖南省邵东县人，讲师，博士，研究方向：结肠癌病因和发病机制。