八珍袋泡茶的薄层色谱鉴别

杨惠莲，谢静，冷静

(1.重庆市食品药品检验所，401121;2.重庆市中医院药剂科，400021)

八珍袋泡茶是由党参、当归、川芎、白术、茯苓、甘草、白芍、熟地黄等八味药组成的中药成方制剂，具有补气益血的作用，用于气血两虚、面色萎黄、食欲不振、四肢乏力、月经过多等症。其质量标准收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第五册，自1991年收录后至今未做完善和提高，仅有性状、显微鉴别、干燥失重、装量差异、浸出物及茶剂项下的常规检查等项。2010年，我所接受了国家药典委员会下达的提高八珍袋泡茶质量标准的任务，开始着手研究并建立了该品种中主要药味的薄层色谱(thin layer chromatography，TLC)鉴别法。

1 仪器与试药

1.1 仪器939全自动薄层制板器(重庆市南岸贝尔德仪器技术厂)，CAMAG REPROSTAR3薄层色谱成像仪(瑞士CAMAG公司)。

1.2 材料八珍袋泡茶(重庆希尔安药业有限公司，每袋装2.4 g，批号:100301，100302，100303)。对照药材党参(批号:121057-200805)、当归(批号:120927-201014)、川芎(批号:120918-200809)、白术(批号:120925-200708)、茯苓(批号:121117-200605)均购自中国药品生物制品检定所。硅胶G购自青岛海洋化工有限公司，实验用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 党参的TLC鉴别本品2袋，取内容物，加水100 mL煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至近干，加稀盐酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加热回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取1次，合并三氯甲烷液，挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按八珍袋泡茶处方，除去党参，模拟工艺同法制成阴性对照溶液。另取党参对照药材2 g，加水50 mL，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。阴性对照色谱在相应位置上无干扰(图1)。

2.2 当归、川芎的TLC鉴别本品1袋，取内容物，研细，加乙醚20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加环己烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。按八珍袋泡茶处方，除去当归、川芎，模拟工艺同法制成阴性对照溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5 g，分别同法制成对照药材溶液。吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照色谱在相应位置上无干扰(图2)。

2.3 白术的TLC鉴别本品2袋，取内容物，研细，加50%乙醇20 mL加热回流1 h，滤过，滤液蒸至近干，加水20 mL使溶解，再加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按八珍袋泡茶处方，除去白术，模拟工艺同法制成阴性对照溶液。另取白术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热10 min，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照色谱在相应位置上无干扰(图3)。

图1 党参薄层色谱图

图2 当归、川芎薄层色谱图

2.4 茯苓的TLC鉴别方法以“2.2”项供试品溶液为供试品溶液。按八珍袋泡茶处方，除去茯苓，模拟工艺同法制成阴性对照溶液。另取茯苓对照药材4 g，加乙醚50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加环己烷1 mL使溶解，制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液10～20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-丙酮(7∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，放置15 min后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄绿色荧光斑点。阴性对照色谱在相应位置上无干扰(图4)。

图3 白术薄层色谱图

图4 茯苓薄层色谱图

3 讨论

《中华人民共和国药典》2010年版一部收载的八珍颗粒[1]的处方与本制剂的处方一致，党参在方中为君药，故笔者首先参考药典方法对党参的TLC鉴别方法进行了初步实验，结果供试品色谱中在与党参对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。笔者又考察了自制板和市售玻璃预制板、常温(25℃)和低温(7℃)、不同相对湿度(20%和80%)，通过对上述耐用性和专属性的考察，结果证明该方法专属性强、重复性好，可用于八珍袋泡茶中党参的薄层鉴别。

当归、川芎功效相近且具有相似的化学成分，均含有藁本内酯等挥发性成分、阿魏酸等酸性水溶性成分[2-3]。为增加鉴别的专属性，得到较多的色谱信息，TLC以当归、川芎对照药材为对照，制备缺当归和川芎的双阴性对照溶液，同时参考《中华人民共和国药典》2010年版一部当归[鉴别](2)项下供试品溶液的制备方法及TLC条件进行实验[1]。考虑到正己烷毒性较大，将展开剂中的正己烷改为环己烷，按前述条件进行了耐用性实验。结果证明该方法专属性强、重复性好，能够用于八珍袋泡茶中当归和川芎的薄层鉴别。

白术主要含挥发油，含量约为1.4%，其主要成分为苍术酮、苍术醇等[4]。另外还含有内酯类成分、多糖类成分、谷氨酸等多种氨基酸以及树脂、白术三醇、维生素A等物质[5]。本品处方中白术为炒制品，据报道，白术炒制后挥发油的含量均有不同程度下降[6-7]，而其内酯类成分如白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等则有不同程度的增加[8-10]。笔者首先以苍术酮对照品为对照进行预试，结果供试品色谱中不能检视到苍术酮的斑点，故参考《中华人民共和国药典》2010年版一部八珍颗粒[1]及吕武清等[11]对其进行了TLC鉴别方法的探索研究，并进行了专属性和耐用性实验。结果证明该方法专属性强、重复性好，能够用于八珍袋泡茶中白术的薄层鉴别。

茯苓主要含多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等化学成分，因本方中药味较多，要鉴别萜类和多糖类成分干扰较大，故参考文献方法对其脂溶性部分进行提取后再进行鉴别[12]。经过预试验发现，可以用鉴别当归、川芎的供试品溶液作为本项的供试品溶液，分别考察了“2.2”项的展开剂、环己烷-三氯甲烷-丙酮(7∶3∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶0.5)[1]，结果以正文所述的展开剂展开后Rf值适中。另外考察了直接于紫外光灯(365 nm)下检视，发现阴性对照有干扰，故改为10%硫酸乙醇显色后放置15 min，再在紫外光灯(365 nm)下检视，此时阴性对照无干扰，并进行了耐用性实验。结果证明该方法专属性强、重复性好，能够用于八珍袋泡茶中茯苓的薄层鉴别。

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