大叶蛇葡萄不同提取物总黄酮含量测定*

何枭宇，杨若婧，朱志凯，江灿，张秀桥，，刘焱文

(1.湖北中医药大学药学院，武汉430065;2.湖北中医药大学中药资源与中药化学重点实验室，武汉430061)

大叶蛇葡萄中蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷等黄酮类成分具有降血压等活性[1-3]。为进一步开发利用大叶蛇葡萄资源，笔者采用乙醇加热回流法和渗漉法制备大叶蛇葡萄提取物，并对其不同提取物中总黄酮含量进行比较研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器SHIMADZU UV-1800分光光度计(日本岛津公司)，RE-3000旋转蒸发仪(上海亚荣公司)，分析天平(瑞士Metiler Toledo公司)，HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)。

1.2 试药蛇葡萄素对照品(本实验室自制，高效液相色谱归一法确定其纯度为98%)，三氯化铝，95%乙醇等试剂均为分析纯。大叶蛇葡萄(采于湖北省来凤县，经湖北中医药大学药学院张秀桥鉴定为Ampelopsis megalophyllaDiels et.Gilg)在阴凉处干燥，粉碎后置干燥处备用。

2 方法与结果

2.1 不同提取物的制备称取大叶蛇葡萄药材100 g，置圆底烧瓶，以70%乙醇回流提取两次(分别1和0.5 h)，合并两次提取液，滤过、减压回收乙醇，水浴挥去残余水分后干燥即得。称取大叶蛇葡萄药材100 g，置渗漉提取器中，用70%乙醇浸泡24 h后，以2 mL·min－1速率开始渗漉，收集渗漉液，滤过、减压回收乙醇，水浴挥去残余水分后干燥即得。

2.2 对照品与供试品溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取60℃干燥至恒重的蛇葡萄素对照品，加95%乙醇，制成每毫升含0.101 mg的溶液，作为蛇葡萄素对照品溶液。

2.2.2 样品溶液的制备精密称取大叶蛇葡萄回流法提取物40.00 mg，置50 mL量瓶，以95%乙醇溶解并定容至刻度，即得大叶蛇葡萄回流法提取物样品溶液。另精密称取大叶蛇葡萄渗漉法提取物40.00 mg，置50 mL量瓶，以95%乙醇溶解并定容至刻度，即得大叶蛇葡萄渗漉法提取物样品溶液。

2.3 测定波长的选择精密吸取对照品溶液3 mL、回流法提取物样品溶液5 mL，分别置于10 mL量瓶，加5%三氯化铝溶液3 mL，再加95%乙醇定容至刻度，摇匀，放置40 min，以相应试剂作空白，进行全波长扫描，选择最大吸收波长311 nm为测定波长。

2.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL分别置于10 mL量瓶，加入5%三氯化铝溶液3 mL，加95%乙醇至刻度，摇匀，放置40 min，以相应试剂作对照，在311 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标(Y)、浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，得回归方程为:Y=59.142X+0.023 4，r=0.999 8(n=5)。结果表明蛇葡萄素在0.004～0.012 mg·mL－1范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验精密吸取同一对照品溶液0.8 mL，按“2.4”项方法测定吸光度6次。结果RSD为1.37%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，按“2.4”项方法，分别在0，0.5，1，2，3，4 h测定吸光度。考察其在4 h内的稳定性。结果RSD为1.54%，表明供试品溶液在4 h内稳定。

2.7 重复性实验精密称取同一批大叶蛇葡萄回流法提取物6份，按“2.2.2”项方法平行制备，按“2.4”项方法，分别测定吸光度。结果RSD为1.39%，表明方法重复性良好。

2.8 加样回收率实验精密称取6份已知含量的大叶蛇葡萄回流法提取物各20.00 mg，分别置于50 mL量瓶，分别向其中加入一定量的蛇葡萄素对照品，按“2.4”项方法，分别测定吸光度，并计算平均回收率。结果见表1。平均加样回收率99.36%，RSD=1.59%。

表1 总黄酮加样回收率实验结果Tab.1Result of recovery of total flavonoid

2.9 大叶蛇葡萄回流法和渗漉法提取物总黄酮含量测定分别精密称取大叶蛇葡萄回流法和渗漉法提取物适量各4份，置50 mL量瓶，以95%乙醇溶解并定容至刻度，按照“2.4”项方法测定吸光度，并计算总黄酮含量。结果见表2，3。回流法和渗漉法提取物总黄酮平均含量分别为640.74%和672.38 mg·g－1。

表2 大叶蛇葡萄回流法提取物总黄酮含量测定结果Tab.2Determination of tolal flavonoid in the extracts of Ampelopsis megalophyua by reflux method

表3 大叶蛇葡萄渗漉法提取物总黄酮含量测定结果Tab.3Result of determination of total flavonoid in the extracts of Ampelopsis megalophyua by percoteation method

3 讨论

本实验采用紫外分光光度法[4-6]，测定大叶蛇葡萄提取物中总黄酮含量，精密度、稳定性、重复性均符合要求，此方法准确可靠，可用于该药用植物提取物总黄酮的测定方法。实验结果表明，以蛇葡萄素计，渗漉法提取物中总黄酮的含量略高于回流法。本实验为进一步研究制备大叶蛇葡萄标准提取物和建立其质量评价体系提供了科学依据。

[1]湖北省卫生局.湖北中草药志(第二册)[M].武汉:湖北人民出版社，1982:1078.

[2]张秀桥，沈伟，陈树和，等.大叶蛇葡萄提取物对肾性高血压大鼠降压作用的实验研究[J].中国医院药学杂志，2008，28(24):2095－2096.

[3]姚汉林，沈伟，刘焱文，等.霉茶不同提取部位对肾性高血压大鼠降压作用的实验研究[J].中西医结合研究，2009，1(6):285－287.

[4]许沛虎，毛培，张雪琼，等.解毒保肝片中总黄酮与总鞣质的含量测定[J].医药导报，2009，28(3):362－364.

[5]向东山，刘晓鹏，翟琨，等.不同采收时期及不同部位绿风藤茶中总黄酮含量比较与分析[J].时珍国医国药，2009，20(7):1745－1746.

[6]周大寨，朱玉昌，王进.藤茶中总黄酮的三波长紫外光谱法测定[J].食品科学，2011，32(8):235－237.