HIF-1α在宫颈癌组织中的表达与临床特征的关系

梁少强 涂青松 黄 荣 蒋 军 姜武忠 袁 君 曾晓红 何 瀚 周菲菲

1.广东省佛山市第一人民医院肿瘤中心放疗科，广东佛山 528000；2.中南大学湘雅医院放疗科，湖南长沙 410008

恶性肿瘤细胞增殖迅速，使得细胞耗氧量不断增加，同时肿瘤组织新生血管往往不足导致肿瘤组织缺氧。缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）的转录因子在肿瘤适应缺氧的机制中起着关键的调控作用[1]。笔者采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织中HIF-1α表达的水平，并进行临床追踪随访，研究HIF-1α在宫颈癌转移和预后中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集笔者所在科室2007年1月～2009年12月经病理确诊为宫颈癌患者的瘤体活检组织标本40例，均为鳞癌。年龄31～74岁，平均（51.2±2.9）岁；按1994年FIGO分期，Ⅰ期4例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期4例；病理分级，低分化7例，中分化27例，高分化6例。宫颈炎组织标本10例，宫颈非典型增生组织标本10例，两者均来自同时期的活检宫颈组织。

1.2 方法

试剂：兔抗人HIF-1α多克隆抗体（IgG）；抗原修复液Ⅰ及通用型SABC染色试剂盒和DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。采用常规免疫组织化学SABC法。切片常规脱蜡脱水，3%过氧化氢乙醇溶液阻断内源性过氧化物酶的活性，微波抗原修复，正常非免疫动物血清，室温下孵育10 min，滴加一抗HIF-1α，工作浓度均为1∶100，4℃冰箱中过夜，滴加生物素标记的第二抗体，置入37℃恒温箱中孵育30 min，加入链酶亲和素-生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育10 min，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，设阴性对照（以PBS代替一抗）以及阳性对照（已知的乳腺癌阳性反应组织）。

1.3 结果判断

免疫组化染色的结果参考Krajewska等标准判断，采用双盲法在显微镜下进行评分。先按阳性细胞比例将无、1%～25%、26%～50%、51%～75%及76%～100%依次计为0～4分；再按染色强度将无、弱、中、强分别计为0～3分，最后综合两部分得分。如某片有25%弱阳性（1×1）、50% 中 等 阳 性（2×2）及 25% 强 阳 性（1×3），则 总 分 为1+4+3=8。

1.4 统计学处理

采用SPSS13.0统计软件包统计。计量资料采用（）表示，单因素进行方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织HIF-1α的表达

HIF-1α阳性染色主要集中在肿瘤细胞胞浆，胞核也有少许染色。在宫颈癌组织、宫颈炎组织和宫颈非典型增生组织中均有一定程度的表达，分别为（8.60±1.77）、（7.20±1.32）、（5.10±1.20），方差分析显示差异有统计学意义（P＜0.05）。且宫颈癌组HIF-1α表达水平最高，宫颈炎组表达最低，组间两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 宫颈癌组织HIF-1α的表达与临床的关系

HIF-1α分别与宫颈癌临床分期、放疗敏感性和骨、肺、肝等远处转移和5年生存期有关（P＜0.05）。见表1。

表1 HIF-1α在宫颈癌组织中的表达与临床的关系

3 讨论

缺氧诱导因子-1是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子。研究发现，由于乏氧肿瘤细胞内一系列基因表达的改变可引起细胞凋亡抑制、细胞周期停滞、侵袭能力增强、对放化疗不敏感等，而HIF-1α在其中起着中枢调节作用[2]，所以目前以HIF-1α为靶点的治疗已成为新的研究热点。

本研究结果显示，HIF-1α在三组中均有一定程度的表达，但宫颈癌组织中HIF-1α的表达明显高于宫颈炎组织及非典型增生宫颈组织（P＜0.05），说明：（1）HIF-1α 参与了宫颈癌的恶性转化过程；（2）HIF-1α作为宫颈非典型增生发展成癌的一个标志或信号，可用于筛查和评估高危人群，对预防和治疗宫颈癌具有一定的临床意义[3-4]。

本研究同时显示，HIF-1α分别与宫颈癌临床分期、放疗敏感性和骨、肺、肝等远处转移和五年生存期有关（P＜0.05），提示HIF-1α的过表达与肿瘤的浸润发展及转移播散有关，与文献报道相一致[5-6]。

HIF-1α可能通过抑制细胞凋亡及调控DNA修复过程的因子表达，使电离辐射对肿瘤细胞DNA的损伤无法固定；同时HIF-1α促进血管生成、无氧代谢，使逃离电离辐射物理杀伤的肿瘤细胞获得必要的生存条件，最终降低放疗敏感性[7-8]。

HIF-1α的过表达与宫颈癌的远处转移密切相关，即HIF-1α的表达促进肿瘤新生血管生成及抑制细胞凋亡，使肿瘤细胞的生存能力增强，从而导致肿瘤易于发生远处转移，使患者5年生存期缩短，提示HIF-1α对于判断宫颈癌的预后有一定价值，可作为预后不良的生物指标之一[9-10]。

[1]Shimada T，Kojima K，Yoshiura K，et al.Characteristics of the peroxisome proliferators activated receptor gamma（PPAR gamma）ligand induced apoptosis colon cancer cells[J].Gut，2002，50（50）：658-664.

[2]Hamm JK，Park BH，Farmer SR.A role for C/EBP beta in regulating peroxisome proliferators-activated receptor-gamma activity during adipogenesis in 3T3-L1 preadipocytes[J].Biol Chem，2001，276（21）：18464-18471.

[3]Kato M，Kusumi T，Tsuchida S，et al.Induction of differentiation and proliferators-activated receptor γ expression in colon cancer cell lines by troglitazone[J].Cancer Res Clin Oncol，2004，130（2）：73-79.

[4]Ravi R，Mookerjee B，Bhujwall Zm，et al.Regulation of tumor，orangiogensis by P53-induced degradation of hypoxia-inducible factor 1 alpha[J].Genes Dev，2000，14（1）：34-44.

[5]Leung SK，Ohh M.Playing tag with HIF：the VHL story[J].Biomed Biotechnol，2002，2（3）：131-135.

[6]Na X，Wu G.Overproduction of vascular endothelial growth factor related to von Hippel-Lindau tumor suppressor gene mutations and hypoxia-inducible factor-1 alpha expression in renal cell carcinomas[J].Urol，2003，170（2）：588-592.

[7]王丽华，李胜泽.HIF-1α和VEGF在宫颈癌中的表达及相关性研究[J].解剖与临床，2008，13（3）：181-183，186.

[8]王立岩，许晓艳，盛敏佳，等.HIF-1α及VEGF在宫颈癌组织中的表达及其临床意义[J].中国实验诊断学，2009，13（12）：1749-1750.

[9]吴春凤，张丹丹，何志娟.HIF-1α在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].哈尔滨医科大学学报，2009，43（5）：464-468.

[10]孔德璇，瞿全新，糜若然，等.HIF-1α，COX-2在宫颈癌中的表达及意义[J].山东医药，2009，49（44）：53-54.