荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测生殖器疱疹病毒的对比研究

尹兴平，张海平，曹 蕾，金 城

（南京医科大学附属无锡市第二人民医院 皮肤科，江苏 无锡 214002）

荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测生殖器疱疹病毒的对比研究

尹兴平，张海平，曹 蕾，金 城

（南京医科大学附属无锡市第二人民医院 皮肤科，江苏 无锡 214002）

生殖器疱疹（GH）是由Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-Ⅱ）感染引起的、以生殖器部位水疱、溃疡等为主要表现的一种性传播性疾病，需与其他表现为生殖器溃疡的疾病如龟头炎、宫颈炎和梅毒等鉴别。目前本病的诊断主要以临床经验为主，因此对一些不典型病例容易出现漏诊或误诊，借助实验室检查能够提供更加充分的诊断依据。本文分析了FQPCR和EIA法对GH患者HSV-Ⅱ的检测结果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料2009年6月－2010年12月在我院性病门诊就诊的131例GH患者。入选标准：①有非婚性接触史或配偶有GH病史；②外阴、生殖器或宫颈皮肤或粘膜出现红斑、水疱、糜烂、溃疡和裂隙等，局部有痒或刺痛；③近两周内未系统使用过抗生素、抗病毒药物和免疫调节剂；④一个月内局部未用过抗病毒药物。男78例，女53例；年龄：17－41岁（平均26.26±5.20岁）；皮损类型：水疱50例，溃疡51例，结痂30例；部位：男包皮、龟头62例，阴囊5例，包皮、龟头和阴囊同时受累11例，女性外阴部38例，宫颈13例，两个部位同时发病2例。病程：1－8天（平均3.98±1.63天）；初发74例，复发57例。

1.2 标本的采集和保存对于水疱性皮损，用棉拭子弄破疱壁后吸取疱液；溃疡、糜烂性皮损，用棉拭子摩擦基底面，让棉拭吸收渗出液。如泌尿生殖道炎症有感染者，用棉拭子取尿道或宫颈分泌物。采集女性宫颈管样本时，先用灭菌棉拭子擦去宫颈表面粘液，再用另一灭菌棉拭子插入宫颈管1－2cm，捻转数圈，停留10s后取出，或用棉拭子在宫颈可疑损害部位反复擦拭以获取粘膜组织上皮细胞。采集男性尿道内样本时，将男用尿道拭子伸入尿道内2－4cm，捻转数圈停留10s后取出。

所有病例均同时取两份标本，根据检测方法的不同，分别给与相应的处理和保存。取材后1周内完成检测。

1.3 试剂HSV-2抗原检测采用丹麦DAKO公司生产的ELISA试剂盒。FQ-PCR法试剂由中山大学达安基因股份有限公司生产的HSV-II PCR荧光法检测试剂盒。按照试剂说明书进行操作。

1.4 统计分析采用SPSS14.0软件建立数据库，用χ2检验进行统计分析（检验水准α＝0.05）。

2 结果

2.1 两种检测方法阳性率的比较从表1知，FQPCR和EIA法检测HSV-Ⅱ阳性率的统计学分析，χ2＝2.23，P＞0.10，二者无差异性。

表1 两种检测方法阳性率的比较（n）

2.2 不同发病情况中两种方法检测阳性率的比较

于初发患者FQ-PCR检出率为94.6%（70／74），明显高于 EIA 85.1%（63／74），而复发患者两种方法的检出率分别为 86.0%（49／57），84.2% （48／57），两者间无明显差异。此外，从表2知，两种方法对初发和复发患者间检出的阳性率无明显差异（χ2值分别为0.221，2.88，P值＞0.05）。

表2 两种方法对初发和复发患者检测阳性率的比较 例数（%）

2.3 不同皮损类型中两种方法检测阳性率的比较FQ-PCR对三种皮损中HSV DNA的检出率分别为96.0%（48／50），86.3%（44／51）和90%（27／30），三者间无显著差别（χ2＝2.90，P＞0.05）。EIA法中三种皮损的检出率分别为94.0% （47／50），82.4（42／51）和73.3%（22／30），三者间有显著性差异（χ2＝6.56，P＜0.05），水疱的检出率显著高于结痂性损害。此外，结痂性皮损中FQ-PCR的阳性检出率明显高于EIA法（结果见表3）

表3 两种方法对不同类型皮损检测阳性率的比较 例数（%）

3 讨论

GH是一种常见的性传播性疾病，表现为红斑、水疱、糜烂、溃疡和结痂等，局部有痒或轻痛感，并与女性外阴癌和宫颈癌的发生有关［1］。本病发病率高，仅次于人免疫缺陷病毒（HIV）感染［2，3］。同时，复发率高，临床表现多样，需与其他表现为生殖器溃疡的疾病相鉴别。

HSV-Ⅱ感染常用的实验室检查有：病毒的细胞培养、病毒抗原及抗体的检测以及分子生物学检测等。病毒的细胞培养是实验室诊断HSV感染最为敏感的方法，虽作是诊断GH的金标准［4］，因实验条件严格、成本高、操作繁琐等，只用作科研或流行病学调查。病毒抗原、抗体的检测由于试剂的敏感性、特异性、重复性和稳定性均不够理想［5，6］。另外，患者感染HSV后抗体（IgM或IgG）产生的时间及抗体滴度高低因个体差异变化较大，国内报道GH患者中抗体的阳性率仅为42.9%，而非疱疹感染者中假阳性率达13.5%［7］，HSV抗体检测不适于临床应用。

近年来，国内外多采用EIA法检测皮损处HSV-Ⅱ抗原。国外研究敏感性为93.7%，特异性为97.9%［8］。张俊等［9］应用 EIA 法检测 GH 不同类型的皮损，发现水疱性损害中HSV-II的阳性率最高，可能与水疱期皮损较新鲜，活动的HSV量多、毒性强等因素有关。FQ-PCR是近年来发展起来的分子生物学技术，具有灵敏度高、特异性强、检测速度快，同时无需开盖检测PCR产物，避免了传统PCR易发生假阳性污染的缺点，增强了特异性和准确性，临床上被广泛应用于对病原体的检测［10，11］。本研究显示，尽管两种检测方法对GH患者HSV－Ⅱ检出的阳性率总体上无显著差异，但是对于初发患者FQ-PCR法的阳性率明显高于EIA法。

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1007－4287（2012）07－1260－02

尹兴平（1970-），男，副主任医师，皮肤性病学博士，主要从事痤疮和色素性疾病诊断、治疗和发病机制的研究。

2011－04－07）