斑点金标免疫渗滤新技术检测家畜血吸虫病的效果试验

胡香兰，严世龙，郭友春，和学武

(1.永胜县动物疫病预防控制中心，云南 永胜 674200;2.永胜县光华乡畜牧兽医站，云南 永胜 674211;3.永胜县顺州乡畜牧兽医站，云南 永胜 674210)

云南省永胜县是血吸虫病重度流行县，长期以来在动物血吸虫病防治领域一直采用粪便顶管毛蚴孵化法作为诊断动物感染血吸虫病的唯一方法。该方法具有检出率高、诊断准确、设备简单、技术要领易掌握的特点，长期在基层动物血吸虫病防治工作中推广运用。但由于该方法自身的局限性，受季节、气候、水质等因素的影响较大，尤其是干旱缺水年，无法保证动物血防工作的正常开展。为探索新的快速诊断方法，2011年永胜县采用浙江省农业科学院畜牧兽医研究所提供的斑点金标免疫渗滤诊断技术，在县内6个血吸虫病疫区乡(镇)54个村委会中进行试验推广，取得了较好的效果。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

血吸虫病抗原胶体金，试剂由浙江省农业科学院、浙江省畜牧兽医局提供，玻璃毛细管由四川成都华西医科大学仪器厂提供，每筒500支。待检血清、血纸、牛粪便均采自血吸虫病疫区乡(镇)。

1.2 操作

①待检血清的稀释:80倍稀释待检血清，即吸取待检血清0.01mL，加生理盐水0.79mL，摇匀。②待检血纸的浸泡:用账页打孔器(直径 0.55 cm)裁取待检血纸 1片(0.24 cm2)，加生理盐水0.5mL浸泡30min，摇匀成待检血纸浸出液。③用玻璃毛细管吸取80倍稀释的血清或血纸浸出液点样于反应板孔的NC上，每个孔点2个样品。④点样3～4mim后，滴甲液封闭，1滴/孔。⑤待甲液渗入NC后，滴乙液反应显色，1滴/孔。⑥待乙液渗入NC后，用蒸馏水或自来水洗涤，1滴/孔，判定结果。⑦判定:红色斑点判定为血吸虫病阳性，黄色或浅粉红色斑点判为阴性。

1.3 符合率试验

首先在动物血吸虫病感染率相对较高的部分乡(镇)采集牛血清、血纸，用斑点金标免疫渗滤诊断技术检测，检出的阳性牛用粪便顶管毛蚴孵化法进行病原检查［1］，按标准采样，实行一粪三检，在规定的时间段观察记录，结果进行对比。

1.4 特异性试验

在疫区采集粪检肝片吸虫感染阳性而血吸虫病感染阴性的牛血清35份，血吸虫病阳性感染牛血清30份，用斑点金标免疫渗滤诊断技术进行特异性试验。

2 结果

2.1 符合率试验

在永胜县6个血吸虫病疫区的54个村委会采集2 800份牛血纸和755份牛血清，用斑点金标免疫渗滤诊断技术检测，血纸检出阳性牛78头，血清检出阳性72头;再对这2 800头牛采用粪便毛蚴孵化检查法进行检测，检出阳性74头。斑点金标免疫渗滤诊断技术与病原学检查阳性符合率血纸为94.8%，血清为97.3%。

2.2 特异性试验

肝片吸虫阳性牛血清35份，血吸虫病感染阳性牛30份，用斑点金标免疫渗滤诊断技术进行检测，未发现与肝片吸虫之间出现交叉反应现象，与阳爱国等所做结果相一致，说明具有较强的特异性。

2.3 阴性符合率比较

参照阳爱国等的做法，在永胜县血吸虫病非疫区4个乡(镇)采集牛血纸600份，用斑点金标免疫渗滤诊断技术进行检测，未检出阳性牛。同样对这600头牛用粪便顶管毛蚴孵化法检测也未检出阳性畜，阴性符合率达100%。

2.4 血清与血纸比较

在永胜县6个血吸虫病疫区54个村委会采取2 800份牛血纸、755份牛血清进行检测，血纸检测出阳性牛78头，血清检出阳性72头，说明不论是用血纸还是血清检测均可达到相同效果。

2.5 推广应用

在开展了符合率、特异性等试验的基础上，在血吸虫病轻度感染区采集牛耳静脉血纸18 480份，用金标免疫渗滤诊断技术与粪便检测同步进行检查，开展疫情监测，结果两种方法均未查出阳性。金标免疫渗滤诊断技术的应用在永胜县取得了较好的效果。

3 讨论与小结

(1)从永胜县试验的结果来看，在血吸虫病疫区不论采集血纸和血清作病原材料，用斑点金标免疫渗滤诊断技术进行检测，其阳性符合率分别达94.8%和97.3%，符合率较高。所以在实际应用过程中两者均可使用。

(2)斑点金标免疫渗滤诊断技术检测血吸虫具有特异性强，检出符合率高，操作简单、方便、快速，且不受环境气候影响［2］，不受检查时间限制，能够同时结合其它动物防疫、诊疗活动同步开展工作的优点，特别适合在目前血吸虫病感染强度低，粪便检查容易引起漏判的情况下在基层推广应用。

(3)斑点金标免疫渗滤技术使永胜县家畜血吸虫病防治技术从单一的顶管毛蚴孵化检查法向多种检查方法纵深发展，同时也全面提升了永胜县家畜血吸虫病诊断技术，开创了山区动物血防工作的新局面。斑点金标免疫渗滤诊断技术是将斑点酶标与免疫胶体金结合起来的一种新型免疫标记技术［2］，该方法在加样过程中如果不按规程操作，会导致检测结果判断出现偏差，用血清来检测容易出现漏检，而用血纸检测容易出现误判。建议:在大规模推广使用前首先进行小范围试验，在熟练掌握技术操作规程后再进行大面积推广。

［1］ 农业部血吸虫病防治办公室.动物血吸虫病防治手册［M］.北京:中国农业科技出版社，1998:184－192.

［2］ 阳爱国，毛光琼，谢智明，等.斑点金标免疫渗滤新技术检测家畜血吸虫病的效果试验〔J〕.中国兽医杂志，2008，44(4):3 －4.