六味中药对养殖场供水渠道真菌的抗菌活性研究

蒋国政，李继昌，韩振兴，刘 挺，曹 宏，王 媛

（1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2.诺伟司国际贸易有限公司，北京 海淀 100015）

在养殖业中，防止饲料霉变早就受到很多关注，寻求安全有效的防霉剂已成研究的热点。然而，由于卫生条件等原因，许多养殖场的水管等供水渠道经常长霉，进而通过供水线引起畜禽真菌毒素中毒，直接危害其健康，甚至导致死亡。使用防霉剂是防止畜禽饮水霉变的重要措施。研究表明，许多中草药具有很好的防霉作用，同时由于中草药有提高畜禽机体免疫机能、毒副作用小等优势，使得中草药作为防霉剂日益受到人们的重视［1］。故选用黄连、苦参、蛇床子、黄柏、白鲜皮和土荆皮这六味药，参照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）提出的

M38-A液体微量稀释法对从哈尔滨市周边养殖场供水渠道分离鉴定的真菌进行了体外抗菌活性研究，期望筛选出能用于实际生产的防霉中药。

1 材料与方法

1.1 中药材 黄连（四川，100707）、苦参（四川，080303）、蛇 床 子 （河 南，100707）、黄 柏 （东 北，090304）、白鲜皮（辽宁，091001）和土荆皮（湖北，090305），均购自黑龙江省药材公司。

1.2 试验菌 按文献［2］从哈尔滨市周边15个养殖场供水渠道30份采样中分离、鉴定得到的真菌：黑曲霉、菌核曲霉、淡紫青霉、鲜绿青霉、扩展青霉和圆弧青霉各1株，共计6株。

1.3 培养基 RPMI1640培养液（批号：NUM0221，购于北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司）和沙保劳琼脂（SDA）。

1.4 中药提取 按文献［3-8］，用乙醇对黄连等六味中药分别提取。提取液经减压干燥得中药提取物。

1.5 药液配制 称取中药提取物0.2g溶于1mL无菌蒸馏水中，浓度为200mg／mL，作为储备药液。用RPMI1640培养液稀释，使终浓度为100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0.781、0.391mg／mL 和0.195mg／mL。

1.6 六味中药的体外抑菌活性试验

1.6.1 菌液的制备 将6株真菌接种至SDA斜面，28℃培养7d，活化2次。在试管斜面加适量RPMI1640培养液，吹打，使孢子游离于培养液中。经血细胞计数板计数后，调整菌液浓度为0.4×104～5×104CFU／mL。

1.6.2 MIC和MBC的测定 参照M38-A液体微量稀释法［9］测定六味中药对各菌株的 MIC值；用SDA琼脂平板涂布法测定MBC值。

1.7 统计学处理 对所记录的MIC值、MBC值计算中位数。

2 结果

2.1 六味中药对霉菌的体外抑菌活性 六味中药对6株真菌的MIC和MBC值见表1。表明，6种中药的抑菌效果与杀菌效果呈相关性。其中黄连和苦参对6株真菌的抑菌活性最好，其次为蛇床子，而黄柏、白鲜皮和土荆皮抗菌活性较差。

表1 六味中药对6株真菌的MIC和MBC值 （mg／mL）

2.2 六味中药抗真菌活性比较 六味中药不同浓度累积抑菌株数百分率及对6株真菌的MIC几何均值见表2及图1。

表2 六味中药不同浓度累积抑菌率（%）及MIC几何均值

图1 六味中药抗真菌活性比较

从表2可见，在6.25mg生药／mL的浓度下，黄连和苦参对所有受试菌株均具抗菌活性，蛇床子和黄柏只对部分受试菌株具有抑制作用，而白鲜皮和土荆皮无抑菌作用。在25mg生药／mL的浓度下，蛇床子对所有受试菌株有抗菌活性。当药液浓度提高至50mg生药／mL时，六味中药对6株受试菌株均有抗菌活性。比较各中药对6株受试菌株的MIC几何均值大小，发现抗菌活性大小顺序为：黄连＞苦参＞蛇床子＞黄柏＞白鲜皮＞土荆皮。

3 讨论

从20世纪开始，人们便开始从中药中寻找高效低毒的抗真菌中药，至今已发现300多种中药有抗真菌活性，其中黄连、苦参、黄柏、蛇床子、白鲜皮和土荆皮是常用抗真菌中药，故选用这六味药进行了试验。中药提取溶剂常用的有水和乙醇，据王玲等［10］的研究，黄连、黄柏、蛇床子、白鲜皮和土荆皮这五味中药水提生药率均比醇提高，但乙醇提取物对皮肤癣菌的抗真菌活性均比水提取物好，所以本试验对黄连等六味中药均用乙醇提取。

黄连、黄柏和苦参均有清热燥湿，泻火解毒等功效，黄连和黄柏的主要有效成分是以盐酸小檗碱为代表的生物碱类化合物，苦参中的主要有效成分是苦参碱，研究表明，生物碱具有很好的抗真菌作用；蛇床子素是蛇床子的主要有效成分，具有抗菌、杀虫等功效；白鲜皮提取物有抗真菌作用，用于治疗皮肤疥癣等；土荆皮的化学成分主要为二萜类化合物，具有治疗癣症等功效［11］。本试验结果表明，黄连和苦参的乙醇提取物对6株真菌均有很好的抑菌活性，其次为蛇床子，而黄柏、白鲜皮和土荆皮的抗菌活性差。宫毓静等［12］报道，白鲜皮和土荆皮乙醇提取物对白色念珠菌等真菌有很好的抗菌活性，而本试验中却对6株真菌抗菌活性差，提示同种药物对不同的菌作用靶点可能不同。

综上所述，黄连和苦参可以应用于养殖场临床生产中。

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