HPLC 法测定注射用盐酸普鲁卡因中普鲁卡因的含量

陆 滢（江苏盐城市第一人民医院，江苏盐城 224001）

盐酸普鲁卡因是局部麻醉药，主要用于浸润麻醉、阻滞麻醉、硬膜外麻醉及封闭疗法等，该药含量测定方法主要是永停滴定法（采用亚硝酸钠滴定液滴定）[1]，但永停滴定法操作烦琐且费时，干扰因素较多。为此，笔者查阅文献[2]并加以摸索，建立了高效液相色谱（HPLC）法测定其含量，该法操作简便，结果准确，可用于注射用盐酸普鲁卡因的质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 1200型HPLC测定仪，包括G1314B紫外检测器、AgiLent色谱工作站（美国Agilent科技有限公司）；BP 211D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；TB224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

盐酸普鲁卡因对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100098-2007009）；注射用盐酸普鲁卡因（常州兰陵制药有限公司，批号：200910232、201001031、201005032、201007093、201009031）；甲醇、庚烷磺酸钠均为色谱纯（Fisher），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Aglient C18柱（150 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：0.1%庚烷磺酸钠的0.05 moL·L－1磷酸二氢甲溶液（用磷酸调节pH至3.0）-甲醇（70∶30）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：290 nm；进样量：10µL；柱温：25℃。在该色谱条件下标准品、供试品色谱见图1。理论板数以盐酸普鲁卡因峰计在2 000以上。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照Fig 1 HPLC chromatogramsA.test sample；B.substance control；C.negative control

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸普鲁卡因对照品，精密称定100.03 mg，置于5 mL容量瓶中，加流动相适量溶解，并加至刻度，摇匀。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于5 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取注射用盐酸普鲁卡因5瓶，取其内容物，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸普鲁卡因0.2 g），置于10 mL容量瓶中，加水适量振摇使主药成分溶解，并加水至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方量取缺普鲁卡因的其他组分，按“2.2.2”下方法制备，即得。

2.3 线性关系考察

精密量取对照品0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于5 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。分别取10µL，注入HPLC仪测定。以盐酸普鲁卡因进样量为横坐标（c），峰面积积分值为纵坐标（A），绘制标准曲线，得普利卡因的回归方程c＝57.660 8A－45.950 9（r＝0.999 6）。结果表明，普鲁卡因检测浓度在2.0～160.0 mg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液适量，重复进样6次，按照“2.1”项下色谱条件测定。结果，RSD＝0.33%，表明该方法的精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密量取盐酸普鲁卡因对照品溶液适量，按样品含量测定项下操作，隔3 h测1次，共测定5次，计算含量。结果，日内RSD＝0.19%，说明供试品在16 h内稳定。另取上述不同浓度的溶液适量，同法处理，3 d重复测定3次，计算含量。结果，日间RSD＝0.36%，说明供试品在3 d内稳定。

2.6 重复性试验

取含量测定项下的供试品溶液（批号：201005032）适量，重复测定6次。结果，RSD＝0.39%，说明重复性良好。

2.7 回收率试验

取阴性对照溶液适量（批号：200910232、201001031、201005032），精密测定，按照相当于样品含量80%、100%、120%加入对照品，照“2.1”项下方法操作，记算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果Tab 1 Results of recovery tests

2.8 样品含量测定

分别取供试品溶液和对照品溶液各10µL，注入HPLC仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果详见表2。

表2 永停测定法和HPLC法检测结果比较（n＝5）Tab 2 Comparison of results between the permanent stop determination of test sample and HPLC（n＝5）

由表2可见，二者无显著性差异（P＞0.05），表明本法可作为注射用盐酸普鲁卡因的质量控制方法。

3 讨论

笔者选择参考文献[2]介绍的290 nm波长测定，结果有较好的线性且无干扰，故选用290 nm波长作为检测波长。

流动相首先选用甲醇-水，结果分离效果不好。在进行多次试验后，选用以含0.1%庚烷磺酸钠的0.05 mol·L－1磷酸二氢甲溶液（用磷酸调节pH至3.0）-甲醇（70∶30）作为流动相，取得了较好的峰形、分离度。

综上所述，采用HPLC测定注射用盐酸普鲁卡因的含量，方法操作简便、灵敏、结果准确、重复性好，可用于注射用盐酸普鲁卡因的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：794.

[2]魏世超，汪秋兰，张 南，等.高效液相色谱法同时测定盐酸普鲁卡因注射液中盐酸普鲁卡因含量及对氨基苯甲酸限量[J].药物分析杂志，2007，27（8）：1 249.

[3]黄玲霄.高效液相色谱法测定胃炎干糖浆中盐酸普鲁卡因的含量[J].中国药业，2003，12（9）：42.

[4]刘晓玲，单 敏，呼延玲.复方益康宁胶囊中盐酸普鲁卡因和维生素B6的含量测定[J].中国药业，2004，13（6）：44.