芒果苷对氧嗪酸钾所致慢性高尿酸血症大鼠尿酸及肝肾功能的影响

牛艳芬，高丽辉，刘 旭，林 华，张 媛，李 玲

(1.昆明医科大学生物医学工程研究中心;2.昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明 650500)

痛风(Gout)是长期嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少引起的一种异质性、代谢性疾病。在欧洲、北美、日本等地区和国家痛风的发病率较高，近年随着我国人民生活水平的提高，饮食结构的改变及肥胖者的增加，痛风和高尿酸血症的发病率逐年增加，据估计，我国目前痛风患者约在1 200万以上，而血尿酸值过高者约有1.2亿(约占人口总数的9%)，痛风不再是达官贵人的专利，已成为现代生活的文明病。痛风的发生与高尿酸血症密切相关，据统计约有5%～12%的高尿酸血症患者最终可发展为痛风［1］，近年的研究表明高尿酸血症不仅是痛风最重要的生化基础，而且是引起心血管病死亡的独立风险因素［2］，同时与代谢紊乱综合征和胰岛素抵抗综合症密切相关［3］，已成为严重威胁人类健康的代谢性疾病，联合国将其列为21世纪的20大顽症之一。

然而，治疗痛风和高尿酸血症的药物非常有限，除应用秋水仙碱、非甾体类抗炎药、糖皮质激素等对痛风患者进行对症治疗外，主要依赖于降尿酸药物如别嘌醇、苯溴马隆。这些药物多是20世纪60年代研制的产品，且毒副作用较大，病人常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，随着高尿酸血症和痛风发病率的大幅度升高，寻找新型高效、低毒、价廉的抗高尿酸血症和痛风药物仍是目前药学研究的一个热点。

芒果苷(mangiferin，Fig 1)系四羟基吡酮的碳糖苷、属双苯吡酮类化合物，存在于多种植物中，资源非常丰富。国内外学者对芒果苷的药理学活性进行了较为广泛的研究，发现芒果苷具有一定的抗氧化、抗糖尿病、抗肿瘤、抗病毒和肝保护作用等多种药理活性［4－8］。本课题组研究发现芒果苷具有明显降低尿酸的作用，已获国家发明专利(专利号:ZL 2008 1 0058019.6.)，本文将进一步研究芒果苷对氧嗪酸钾所致慢性高尿酸血症大鼠尿酸及肝肾功能的影响，以期为芒果苷的进一步研究提供依据。

Fig 1 Structure of mangiferin

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 芒果苷:由昆明医学院生物医学工程研究中心提供，纯度≥95%;别嘌醇片:广东彼迪药业有限公司产品;苯溴马隆:德国赫曼大药厂生产企业，由昆山龙灯瑞迪制药有限公司分装。临用前用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制成不同浓度备用。

尿酸(UA)测定试剂盒:南京建成生物工程研究所产品，丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒、尿素氮(BUN)测定试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒为上海科华东菱诊断用品有限公司产品。γ-谷氨酰转肽酶测定试剂盒(GGT)、肌酐测定试剂盒(Cr)为上海科华生物工程股份有限公司产品。

氧嗪酸钾:Alderich产品，纯度97%，批号STBC1486V。其他试剂均为国产分析纯。

1.1.2 实验仪器 CL-770型临床分光光度计为日本岛津公司产品;MP4R型离心机为美国IEC公司产品，全波长紫外-可见光酶标仪为BioTek公司产品，型号PowerWave XS，全自动生化仪为GLAMOUR 2000 Radom Access Clinical Analyzer产品。

1.1.3 实验动物 SD大鼠，由昆明医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号:SCXK(滇)2005-0008，饲养管理条件:SPF级动物实验室，室温为(20±2)℃，相对湿度(60～70)%。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的复制 ♂性SD大鼠90只，体质量(150～180)g，随机分为2组，正常组(n=10)和模型组(n=80)，参照文献［9］模型组动物每天上午按15 ml·kg－1体重灌胃给予氧嗪酸钾(2.5 g·kg－1体重)，连续灌胃1周后眼内呲取血用磷钨酸法测定血清尿酸水平，尿酸水平 ＞110 μmol·L－1视为高尿酸血症大鼠，符合该标准的大鼠有75只，无动物死亡，挑选出其中的60只留待下一步实验。

1.2.2 动物分组及给药 将上述挑选出的高尿酸血症大鼠按血清尿酸水平均衡原则分组为:高尿酸血症模型对照组(model)、芒果苷不同剂量组、苯溴马隆和别嘌醇阳性对照组，每组10只，分别灌胃给予等体积溶媒(0.5%CMC-Na)、芒果苷(0.78、1.55、3.13 mg·kg－1)、苯溴马隆(6.25 mg·kg－1)和别嘌醇(1.01 mg·kg－1);除正常对照组外，其余各组动物每天上午灌胃给予氧嗪酸钾(2.5 g·kg－1体重)，下午按10 ml·kg－1灌胃给予各受试药物，连续5周，1、3、5周末眼内呲取血测定血清尿酸水平。5周末将动物置于代谢笼，收集24 h尿液，记录尿量，测定尿中尿酸和尿肌酐;然后，处死大鼠，取血测定血 ALT、AST、GGT 水平。

2 结果

2.1 芒果苷对高尿酸血症大鼠血中尿酸的影响结果表明实验期间模型组动物的血尿酸水平一直维持在较高水平，与正常对照组相比，差异有统计学意义，提示模型成功;灌胃给予芒果苷后，慢性高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平明显降低，与高尿酸血症模型对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05，0.01)，并呈现一定的剂量效应关系;芒果苷3.13 mg·kg－1组动物的血尿酸水平与等摩尔的阳性对照药苯溴马隆组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)，与别嘌醇组相比，于给药1周时血尿酸水平高于别嘌醇组，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示芒果苷对氧嗪酸钾所致的慢性高尿酸血症大鼠具有降尿酸作用，其效价弱于等摩尔的别嘌醇，但不亚于苯溴马隆(Fig 2)。

Fig 2 Effects of mangiferin on serum uric acid levels in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

2.2 芒果苷对高尿酸血症大鼠尿中肌酐、尿素氮及尿量的影响 由Tab 1可见，灌胃给药5周后，芒果苷各剂量组明显降低尿中的尿酸水平(P＜0.05，0.01)，对肌酐、尿素氮和尿量的影响不明显，与模型组相比无统计学意义;阳性对照药别嘌醇和苯溴马隆明显降低尿中尿酸水平(P＜0.05)，对尿中肌酐含量明显降低，对尿素氮和尿量影响不明显。

2.3 芒果苷对高尿酸血症大鼠血中ALT、AST、GGT的影响 灌胃给药5周后，模型组动物ALT和AST活性降低，与正常对照组比较，差异有显著性;而芒果苷 0.78、1.55 mg·kg－1组和苯溴马隆组明显升高血清ALT水平，与模型对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)，其余各组均无差别;各给药组对血清AST、GGT水平均无明显影响。

3 讨论

尿酸是人类嘌呤代谢的终末产物，由次黄嘌呤、黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的作用下生成的，其中2/3由肾脏排除，1/3经消化道排除。人体由于缺乏尿酸酶，不能将尿酸进一步分解成水溶性的尿囊素而排出体外，使人类极易形成高尿酸血症。尿酸在细胞外液的浓度，取决于尿酸生成速度和排泄之间的平衡。国际上将血液中尿酸水平男性大于420 μmol· L－1，女性大于357 μmol· L－1诊断为高尿酸血症。任何原因引起尿酸生成增多和(或)排泄减少均可导致高尿酸血症。当血尿酸增高超过其血中的超饱和浓度，即可在组织内形成尿酸盐沉积，导致痛风发生。

Tab 1Effects of mangiferin on urine UA，Cr，BUN and urine volume in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

Tab 1Effects of mangiferin on urine UA，Cr，BUN and urine volume in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal group;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model group(Dunnett's test)

Group Dose/mg·kg－1 Urine UA/μmol·L －1 Urine Cr/μmol·L －1 Urine BUN/μmol·L －1Urine volume/ml Normal 0.5%CMC-Na 173.9 ±57.7 390.5 ±105.1 7.2 ±1.2 8.2 ±2.6 Model 0.5%CMC-Na 329.5 ±51.3## 420.3 ±69.7 8.0 ±1.8 14.9 ±3.7##Mangiferin 0.78 159.9 ±96.1* 401.0 ±103.4 6.8 ±0.6 13.5 ±3.6##1.55 138.0 ±66.1＊＊ 417.5 ±103.4 7.2 ±1.0 15.5 ±3.2##3.13 138.6 ±51.4＊＊ 379.6 ±159.4 6.9 ±0.9 14.6 ±8.3##Allopurinol 1.01 120.6 ±15.3#* 340.5 ±86.1* 6.7 ±1.4 15.9 ±6.4##Benzbromarone 6.25 160.9 ±87.9* 351.7 ±87.7* 7.5 ±2.5 13.9 ±4.8##

Tab 2 Effects of mangiferin on serum ALT，AST，GGT in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

Tab 2 Effects of mangiferin on serum ALT，AST，GGT in the hyperuricemic rats(±s，n=10)

#P＜0.05，##P＜0.01 vs normal group;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model group(Dunnett's test)

Group Dose/mg·kg－1 ALT/U·L－1 AST/U·L－1 GGT/U·L －1 Normal 0.5%CMC-Na 36.4±7.1 97.2±29.4 7.8±3.3 83.6 ±15.9 9.4 ±4.0 Model 0.5%CMC-Na 24.3 ±4.3## 78.3 ±9.2# 8.2 ±3.5 Mangiferin 0.78 30.6 ±7.7* 81.6 ±22.6 6.8 ±1.1 1.55 30.5±5.4#＊＊ 76.8±9.5# 6.4±1.0 3.13 25.2 ±6.7## 88.1 ±18.5 9.4 ±8.0 Allopurinol 1.01 27.7 ±5.4# 73.3 ±13.7 5.7 ±1.6 Benzbromarone 6.25 29.5 ±6.5#*

目前，国内外用于制备高尿酸血症动物模型的方法主要有3种:①通过破坏动物尿酸酶基因及基因重组法;②补充尿酸或尿酸前体物质法;③ 给予尿酸酶抑制剂法。氧嗪酸钾(potassium oxonate)是一种尿酸酶抑制剂，作为化学诱导剂可抑制尿酸分解，增加体内血清尿酸水平，造成高尿酸血症动物模型。该法灵敏简便、重复性好，在国际上已普遍用于评价药物的降尿酸作用。本研究灌胃给予氧嗪酸钾造成高尿酸血症模型，在该模型上研究表明芒果苷明显降低氧嗪酸钾所致的慢性高尿酸血症大鼠的血尿酸水平，其效价弱于等摩尔的别嘌醇，但不亚于苯溴马隆。此外，在氧嗪酸钾诱导的急性高尿酸血症小鼠模型上，芒果苷也显示出较好的降血尿酸作用，其机制与抑制黄嘌呤氧化脱氢酶有关［10］，而与抑制嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的活性无关［11］。

血清肌酐和尿素氮是肾功能的重要指标，本实验研究结果显示，芒果苷灌胃给药5周后，对高尿酸血症动物尿中肌酐和尿素氮的影响不明显，而阳性对照药别嘌醇和苯溴马隆明显降低尿中肌酐含量，提示芒果苷对肾功能没有影响，但别嘌醇和苯溴马隆则减少了肾脏对肌酐的排泄。肝内转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶，是人体代谢过程中必不可少的“催化剂”。当肝细胞受损时，转氨酶便会释放到血液里，使血清转氨酶升高。在本实验中，模型组动物ALT和AST活性明显低于正常对照组，这是否与造模剂氧嗪酸钾有关，有待进一步研究;而芒果苷0.78，1.55 mg·kg－1组和苯溴马隆组明显升高血清ALT水平，接近正常动物的水平，此外，各给药组对血清AST、GGT水平均无明显影响。综上所述，芒果苷在降低血尿酸的同时，并不影响动物的肝肾功能影响，具有较好的安全性。

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