加压提取9味中药饮片中的皂苷类物质及其含量测定

赵文英，岳 莉，黄巧燕，戎晋华，宋筱菡

(青岛科技大学化工学院，山东 青岛 266042)

皂苷类物质广泛分布于自然界双子叶植物中，具有抗衰老、增强机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等生物活性和药理作用[1]。由于中药材成分复杂，活性成分含量相对较低，因而在对含皂苷类物质的中药材的开发利用过程中，如何利用现代提取技术提高皂苷类物质的提取得率具有十分重要的现实意义。

加压提取法[2，3]是在密闭容器内，加大压力使提取溶剂在高于溶剂沸点的温度下仍保持液体状态，再通过升高提取温度[4]有效地改善溶剂的溶解性和选择性，从而提高有效成分的提取得率，具有效率高、杂质含量少、有效成分纯度高等优点，已广泛应用于天然药材与中药材、药物分析、植物化学、生物[5]等领域。

作者在此分别采用加压提取法和加热回流提取法对中药饮片中的皂苷类物质进行提取，并通过高效液相色谱测定其含量，以期为加压提取法用于中药材有效成分的提取提供可靠的实验依据。

1 实验

1.1 试药、试剂与仪器

地榆、甘草、柴胡、白头翁、黄芪、麦冬、穿山龙、黄精、知母，安徽海鑫中药饮片有限公司。

薯蓣皂苷元对照品(纯度≥98%)、齐墩果酸对照品(纯度≥98%)，四川维克奇生物科技有限公司；95%食用乙醇；色谱纯甲醇；超纯水；其它试剂均为分析纯。

KQ-100型超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；RE-52型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；循环水多用真空泵，河南巩义英峪予华仪器厂；GZX-9070 MBE型不锈钢数显电热鼓风干燥箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；U3000型高效液相色谱仪，戴安公司；加压提取器，自制。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件与系统适用性实验[5，6]

色谱柱为Hypersil ODS C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(12∶88，体积比)；检测波长210 nm；柱温25 ℃；进样量20 μL；理论塔板数按薯蓣皂苷元与齐墩果酸峰计不低于5000。

1.2.2 对照品溶液的制备

精密称取105 ℃干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品、齐墩果酸对照品各20.0 mg，置50 mL容量瓶中，分别加入甲醇定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得0.4 μg·μL-1的薯蓣皂苷元对照品溶液和齐墩果酸对照品溶液，备用。

1.2.3 供试品溶液的制备

1.2.3.1 加压提取物

将9味中药饮片干燥粉碎成粗粉，各精密称定40.0 g，分别置加压提取器中，加400 mL蒸馏水，于110 ℃、0.3 MPa下密封加压浸提30 min，提取液浓缩至135 mL，醇沉浓度至60%，静置过夜。取上清液，挥干溶剂得浸膏。精密称取0.1 g各样品浸膏分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得加压提取物，待测。

1.2.3.2 加热回流提取物

将9味中药饮片干燥粉碎成粗粉，各精密称定40.0 g，分别加热回流提取3次(第1次提取2 h，第2次与第3次各提取1 h)，每次溶剂用量200 mL。合并提取液，浓缩后，醇沉浓度至60%，静置过夜。取上清液，挥干溶剂得浸膏。精密称取0.1 g各样品浸膏分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得加热回流提取物，待测。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制

2.1.1 薯蓣皂苷元标准曲线

精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、9.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇定容。按色谱条件进样，得标准曲线回归方程为A=2.3916c-9.1413，R=0.9995，线性范围为0.80～7.20 μg。

2.1.2 齐墩果酸标准曲线

精密吸取齐墩果酸对照品溶液2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇定容。按色谱条件进样，得标准曲线回归方程为A=1.2721c+5.3279，R=0.9996，线性范围为1.60～8.00 μg。

2.2 精密度

分别取薯蓣皂苷元对照品溶液与齐墩果酸对照品溶液，连续进样测定6次，每次进样20 μL，测定含量，RSD分别为1.09%、1.53%。表明该方法精密度良好。

2.3 重复性

称取同一批地榆供试品6份，按照样品处理方法处理，平行测定含量，RSD为0.97%。表明方法的重现性良好。

2.4 稳定性

取地榆样品溶液10 mL 连续3 d进样6次，RSD为1.8%。表明样品在3 d内稳定性良好。

2.5 加样回收率

采用标准加入法进行回收率实验，测得地榆、甘草、柴胡、白头翁、黄芪、麦冬、穿山龙、黄精、知母的加样回收率分别为99.12%、99.23%、99.54%、99.02%、98.87%、98.69%、99.05%、98.35%、99.34%，RSD分别为0.45%、0.97%、1.02%、0.54%、1.12%、0.73%、0.59%、0.82%、0.92%。表明方法的回收率良好。

2.6 样品溶液的测定

精密吸取供试品溶液各20 μL，分别进样，甾体类皂苷样品按2.1.1方法测定样品溶液含量(穿山龙样品HPLC图谱见图1，其余略)，三萜类皂苷样品按2.1.2方法测定样品溶液含量(地榆样品HPLC图谱见图2，其余略)，据标准曲线计算皂苷含量。

图1 薯蓣皂苷元对照品(a)与加压提取穿山龙样品(b)的 HPLC图谱

图2 齐墩果酸对照品(a)与加压提取地榆样品(b)的 HPLC图谱

9味中药饮片中皂苷类物质的浸膏量及含量比较结果见表1。

表1 9味中药饮片中皂苷类物质的浸膏量及含量比较(n=3)

由表1可以看出，加热回流提取的皂苷类物质浸膏量均比加压提取的高。这可能是因为，加热回流提取时间较长，药材长时间浸泡在溶剂中，皂苷类物质不断浸出，同时溶于溶剂的其它成分也浸出，其浸膏量明显增多；而加压提取是在高于溶剂沸点条件下提取，溶剂的溶解性和选择性提高，有利于溶剂快速进入药材细胞中溶解有效成分，不断与外界溶剂进行溶质交换，有效成分快速浸出，提取效率提高，浸膏量相对较少。虽然加热回流提取的皂苷类物质浸膏量高，但提取时间长、杂质含量较高，不利于进一步纯化；而加压提取的皂苷类物质浸膏量相对较少、提取效率较高，为快速准确地测定有效成分的含量奠定了基础。

由表1还可以看出，与加热回流提取法相比，加压提取的皂苷类物质含量除穿山龙外均有所提高。这可能是因为，较高的压力使溶剂可以在高于沸点的条件下进行提取，增大了溶剂的极性，介电常数增大，使溶剂的溶解性和选择性提高，溶剂的流动性增强，溶剂溶解有效成分的能力提高，进而使有效成分选择性快速溶出。同时，提取温度升高，分子的传质速度加快，药材表面的浸润过程及溶质的扩散过程加快，有效成分的提取效率提高。

3 结论

分别采用加压提取法与加热回流提取法对9味中药饮片中的皂苷类物质进行提取。结果表明，与加热回流提取法相比，加压提取中药饮片中的皂苷类物质浸膏量少、有效成分含量高、提取物纯度高、杂质含量少、提取效率高、提取物后处理简单，是一种理想的提取中药材有效成分的新型技术。

[1] 徐先祥，夏伦祝，高家荣.中药皂苷类物质抗氧化作用研究进展[J].中国中医药科技，2004,11(2):126-128.

[2] Richter B E,Jones B A,Ezzell J L，et al.Accelerated solvent extraction：A technique for sample preparation[J].Anal Chem，1996，68(6)：1033-1039.

[3] Barriada-Pereira M,González-Castro M J,Muniategui-Lorenzo S，et al.Comparison of pressurized liquid extraction and microwave assisted extraction for the determination of organochlorine pesticides in vegetables[J].Talanta，2007，71(3):1345-1351.

[4] Giergielewicz-Mozajska H，Dabrowski L，Namiesnik J.Accelerated solvent extraction(ASE) in the analysis of environmental solid sample——Some aspects of theory and practice[J].C R Anal Chem，2001，31(3):149-165.

[5] 中国药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：化学工业出版社，2000:188．

[6] 邹盛勤，陈武.地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱测定[J].时珍国医国药，2006，17(8)：1373-1374.