探讨PTEN、β-CAT与子宫内膜病变的关联性

秦天生 马晓玲 张芳仙 杨毓琴

(1.甘肃省人民医院妇产科;2.兰州大学第一医院生殖中心，兰州 730000)

子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，病因学分子机制尚不清楚。从正常子宫内膜向子宫内膜癌的转变过程较为漫长，病变早期基因改变对疾病的防治有重要意义。本研究对PTEN及β-CAT基因在子宫内膜癌发生、发展中的作用及相互关系进行初步探讨，以期为子宫内膜癌及其癌前病变的早期诊断提供参考。

1 材料和方法

1.1 标本来源 收集甘肃省人民医院病理科2000-2008年26例正常子宫内膜组织、55例子宫内膜增生症(27例单纯型，28例复杂型)、38例子宫内膜癌(术前均无放疗、化疗及激素治疗史)石蜡标本，共计119例(表1)。

1.2 方法 PTEN兔抗人多克隆抗体购自北京中山生物技术公司，β-CAT单抗试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司，严格按照试剂盒说明书操作，苏木素复染。

1.3 结果判定标准 选用已知阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照。每张切片选10个高倍视野，每高倍视野计数100个正常细胞或瘤细胞，PTEN、β-CAT阳性表达定位于胞浆。用半定量积分法判断结果先按染色强度打分:0分无色，1分黄色，2分棕黄色，3分棕褐色，染色强度需与背景着色相对比;再按阳性细胞所占百分比打分:0分阴性;1分阳性细胞≤10%;2分阳性细胞11% ～50%;3分阳性细胞51%～75%;4分阳性细胞＞75%。两者积分的乘积≤4分为免疫反应为阴性(-);≤6分为弱阳性(+);≤8分为中度阳性(++);≤12分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法 试验结果应用SPSS 11.0软件包进行Pearson χ2检验、Fisherman精确概率检验Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN、β-CAT在不同子宫内膜组织中的表达 见表1。PTEN蛋白在正常增生期子宫内膜的腺上皮细胞胞质中均为阳性表达，从正常增生期子宫内膜、子宫内膜增殖症(单纯增生、复杂型增生、不典型增生)到子宫内膜腺癌，PTEN阳性表达率呈递减趋势(图1～4)，其阳性表达率在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症及EC组织中呈递减趋势，组间差异有显著统计学意义(P＜0.01);在腺瘤型增生过长、非典型增生及EC组织中呈递减趋势，差异有统计学意义(P＜0.05)。子宫内膜增殖症中PTEN表达存在不同程度的表达减弱或消失，子宫内膜癌组织中PTEN失表达率最高(图4)。

增生期子宫内膜的腺上皮细胞胞质中β-CAT基本表达为阴性(表1)，子宫内膜增殖症(单纯型增生、复杂型增生、非典型增生)和EC中β-CAT蛋白的阳性表达率呈递增趋势，组间差异有显著统计学意义(P＜0.01)，各组内β-CAT蛋白表达的阳性率逐渐递增但各组内差异无显著统计学意义(P＞0.05);在腺瘤型增生过长、非典型增生过长和EC组织中β-CAT蛋白表达的阳性率逐渐递增，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

表1 不同子宫内膜组织中PTEN、β-CAT的表达情况［n(%)］

2.2 PTEN、β-CAT在子宫内膜癌组织中的表达见表2。经Fisher精确概率法检验，PTEN蛋白在子宫内膜腺癌不同肌层的表达差异无统计学意义(P＞0.05)，β-CAT蛋白在子宫内膜腺癌不同肌层表达的差异有统计学意义(P＜0.05)，两指标在年龄、是否绝经、手术病理分期和组织学分级各组内的表达差异均无显著统计学意义(P＞0.05)。

2.3 子宫内膜癌中PTEN、β-CAT表达的相关性子宫内膜中PTEN、β-CAT蛋白表达呈负相关(r=-0.398，P ＜0.01)。

表2 PTEN、β-CAT与不同子宫内膜癌组织临床病理参数的关系 (n=38)

3 讨论

3.1 PTEN在子宫内膜癌发生、发展中的意义 本研究结果显示:①子宫内膜癌组织中PTEN蛋白表达缺失率为53.27%(21/38);子宫内膜癌前病变组织中PTEN蛋白表达缺失率为50%(12/24)，均显著高于正常子宫内膜组织，提示PTEN功能异常不仅发生于子宫内膜癌组织，还发生于癌前病变组织。从正常增殖期子宫内膜、癌前病变到内膜癌的发展过程中PTEN表达缺失逐渐积累，PTEN表达的改变在子宫内膜细胞恶性转化和癌变过程中发挥重要作用［1］;②PTEN蛋白在不同组织学分级的子宫内膜癌组织中，蛋白表达缺失率随组织学分级的增高略有增高。在组织学分级为G1级的子宫内膜癌组织中，PTEN表达缺失率为54.17%，而在组织学分级为G2、G3级的组织中缺失率57.14%，差异不明显，提示，PTEN基因的表达缺失不与子宫内膜癌的恶性程度有关［2］;③PTEN蛋白表达与年龄、月经状况、病理分级及肌层浸润深度无明显相关性。能否作为判断组织分化程度和预后的指标尚有待于进一步的研究。

3.2 β-CAT在子宫内膜癌发生、发展中的意义 研究发现β-CAT基因作为一种癌基因使EC的癌细胞有高度侵袭性。本研究中正常子宫内膜、单纯型增生过长、复杂型增生过长及EC中β-CAT蛋白的表达率均逐渐增高，差异有显著统计学意义(P＜0.01);EC组织中β-CAT蛋白表达较正常子宫内膜明显升高，在腺瘤型增生、非典型增生及子宫内膜腺癌组织中呈递增趋势且差异有统计学意义(P＜0.05)，提示，β-CAT 结构和功能异常，刺激了瘤细胞的增殖，从而利于肿瘤浸润转移［3］。Fisher精确概率检验显示不同肌层β-CAT蛋白的表达差异有统计学意义(P ＜0.05)，EC 组内G1、G2、G3期各组间差异无显著统计学意义，提示β-CAT在EC的发展中是晚期事件，是否可用于判定肿瘤的浸润、转移，还需更为确切的研究。

3.3 子宫内膜癌中PTEN、β-CAT相关表达的意义 PTEN基因是定位于染色体10q23的抑癌基因，编码蛋白质酪氨酸磷酸酶，在生长因子的细胞信号传递中起着复杂而重要的作用，其突变和纯合性丢失见于多种原发性恶性肿瘤。本实验证明，细胞增殖活性的改变在不典型增生阶段就已经发生，且增殖活性的改变与癌变过程相关，而PTEN、β-CAT蛋白在子宫内膜病变中的表达存在负相关性(r=-0.398，P ＜0.01)，推测异常增殖的细胞中可能有PTEN抑癌基因功能缺失，PTEN基因功能异常后，其对抗酪氨酸激酶的作用消失或减弱，从而使β-CAT抗原表达明显增加，增强了内膜癌细胞的增殖活性，对细胞恶变有促进作用。

综上，本实验结果提示，应用免疫组化法检测子宫内膜组织中PTEN、β-CAT蛋白的异常表达，对了解子宫内膜癌的发病机制有重要的参考价值，为开发抗肿瘤药物和寻找新的基因治疗靶基因提供了新线索和思路［4］。

［1］Lin M C，Burkholder K A，Viswanathan A N，et al.Involution of latent endometrial precancers by hormonal and nonhormonal mechanisms［J］.Cancer，2009，115(10):2111-2118.

［2］Samuelson E，Hedberg C，Nilsson S，et al.Molecular classification of spontaneous endometrial adenocarcinomas in BDII rats［J］.Endocr Relat Cancer，2009，16(1):99-111.

［3］Schwartz D R，Wu R，Kardia S L，et al.Novel candidate targets of beta-catenin/T-cell factor signaling identified by gene expression profiling of ovarian endometrioid adenocarcinomas［J］.2003，63(11):2913-2922.

［4］Lacey J V Jr，Mutter G L，Ronnett B M，et al.PTEN expression in endometrial biopsies as a marker of progression to endometrial carcinoma［J］.Cancer Res，2008，68(14):6014-6020.