树莓组培快繁及工厂化育苗技术研究

杨艳敏，袁兴福，魏永祥，王兴东，魏 鑫，王 莉，张 舵

（1.辽宁省果树科学研究所，辽宁熊岳 115009；2.辽宁省农业科学院，辽宁沈阳 1100161）

树莓为蔷薇科悬钩子属植物，果实富含多种维生素、SOD、花青素、鞣化酸等，具有特殊的保健和加工潜力，近年来国内外市场的需求日益增加，加快了树莓产业的发展，常规的繁殖方式已难以满足市场对苗木的需求，为此笔者进行树莓组织培养快繁技术的研究，并获得理想结果[1-4]。

1 材料与方法

1.1 无菌材料的获得

外植体处理：供试品种为托拉米、海尔特兹、秋红，将外植体叶片从叶柄基部切除，枝条剪成1.0～1.5 cm左右含单个腋芽或顶芽的茎段用流水冲洗2～3 h后，在超净工作台上用75%酒精荡洗30 s，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5～8 min，并不断搅动，倒去氯化汞溶液后用无菌水冲洗3～5次，经用无菌滤纸吸去材料上的附着水，将芽上下两端多余的茎段剪掉，留0.5 cm左右茎段，芽朝上接种到诱导培养基上。每瓶接种5个外植体，每处理接种10瓶，3 次重复[5]。

1.2 诱导培养基

设3个处理：

A1：MS+BA 0.5 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L；A2：MS+BA 0.8 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L；A3：MS+BA 1.0 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

1.3 继代增殖培养基

继代增殖培养基设5个处理：当试管苗长至2～4 cm时进行下一次的继代。每次继代时，将试管苗的茎条剪成单个芽的茎段，3个茎段为一丛，每瓶4～6丛接入培养基上。

B1：MS+BA 0.2 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B2：MS+BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B3：MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B4：MS+BA 0.6 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B5：MS+BA 0.8 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L。

1.4 试管苗瓶内及瓶外生根培养

生根培养基设6个处理：以1/2 MS为基本培养基，IBA 浓度分别为：0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/L。将长够生根标准的试管苗，剪成2～3个芽一个单苗，去掉叶片或保留顶叶接种到生根培养基上，每个处理接种10瓶，每瓶接种10个单株，重复3次。

试管苗瓶外生根。供试材料为在壮苗培养基培养21 d后的托拉米、海尔特兹、秋红组培苗；海藻素浓度为 400、500、667、1 000 mg/L，浸泡 3 ～ 5 min。以河沙+草炭土（1∶1）为培育基质，每个处理300株，3次重复，以清水为对照。调查始生根天数、30 d后调查成活率和成活幼苗的生根率[3]。

供试材料为在壮苗培养基中培养21 d后的海尔特兹组培苗，采用快速浸蘸和浸泡3～5 min 2种方式，生根诱导物选用 IBA(25、50、75、100 mg/L)、NAA(25、50、75、100 mg/L)和海藻素（400、500、667、1 000 mg/L）。以河沙+草炭土（1∶1）为培育基质，每处理300株，3次重复，以清水为对照。栽植5 d后调查伤害率，始生根天数、30 d后调查成活率和成活幼苗的生根率。

1.5 移栽基质筛选

培育基质的筛选：基质为河沙+园田土（1∶1）、河沙+草炭土（1∶1）、河沙+园田土+草炭土（1∶1∶1）、河沙(CK)。将试管苗浸泡在500 mg/L海藻素中3～5 min后，栽入4种基质中，每处理300株，3次重复。30 d后调查成活率。

1.6 炼苗与定植

将试管苗从培养瓶中取出，洗去根部附着的培养基，再用 500 mg/L的海藻素快速浸沾后，栽入育苗盘中，基质为河沙+园田土+草炭土（基质经55%敌克松可湿性粉剂配制的0.1%水溶液加恶霉灵稀释1 000∶1 500倍喷施消毒）。移栽成活后，当苗长至15～20 cm时，即可转入营养钵中定植。

2 结果与分析

2.1 树莓诱导培养基筛选

经21～28 d培养后，树莓不同品种在同一培养基上的培养效果明显不同，同一品种在不同培养基上的表现也不同。通过表1可以看出：外植体在以MS为基本培养基附加BA 1.0 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L上的诱导率达78.3%～84.4%（平均82.0%），效果均好于其他激素配比的培养基。

表1 各品种外植体在不同培养基上的诱导效果

2.2 继代增殖培养

继代增殖培养40 d后，调查新生芽数，计算增殖系数。红树莓的继代周期为6周，以此计算，则全年的增殖次数为6.5次，平均每次的增殖倍数为3.6倍，每株无菌苗年增殖倍数为23.4倍。

BA浓度不仅对试管苗的增殖有很大影响，对苗的生长状态作用也很大。一般来说BA浓度较高时，试管苗的生长状态变弱，叶柄较长，叶片相对瘦小，有的组培苗会出现玻璃化现象。而BA相对较低时，苗生长状态较好，不同品种对BA的适应性不同。由表2可知，海尔特兹、秋红增殖最适培养基为BA 0.5 mg/L，托拉米增殖最适培养基为BA 0.8 mg/L。

表2 组培苗在不同激素水平配比培养基上的增殖效果

2.3 试管苗生根培养

试验品种为海尔特兹，由表3可知，生根培养基不加IBA时，试管苗生根率仅为55.4%，根短且长的慢。当IBA为0.2～0.3 mg/L时，生根率提高到82.3%～97.3%，每株根数3～6条，根长0.43～0.87 cm，根系坚韧匀称，质量较好。当IBA浓度增大到0.5 mg/L时，生根率下降到63.6%，每株根数1～3条，根长0.10～0.58 cm，试管苗基部为愈伤组织，难以栽植成活。因此，合适的IBA浓度为0.3 mg/L。

表3 IBA对树莓品种海尔特兹试管苗生根培养效果的影响

2.4 试管苗瓶外生根

2.4.1 海藻素对不同品种生根的影响。由表4可知，在一定范围内，随着海藻素浓度的升高，3个品种的生根率和每株根数均呈先升高后下降的趋势，当海藻素浓度为500 mg/L时，海尔特兹、秋红和托拉米成活率、生根率、每株根数、均达最高，极显著高于其他3个浓度和对照。

2.4.2 不同生根诱导物瓶外生根效果。海尔特兹幼苗速蘸IBA、NAA和海藻素，其中海藻素浓度500 mg/L时，幼苗成活率和生根率最高，且生根速度快，栽植8 d时即可生根。海尔特兹幼苗浸泡IBA和NAA时，随浓度的升高，伤害率逐渐增大，成活率和生根率逐渐降低。而海藻素浸泡幼苗无伤害，浓度为500 mg/L时效果最好，幼苗成活率和生根率较IBA高41.1～78.6个百分点，较NAA高56.4～88.0个百分点，生根率较IBA高 16.9～30.3个百分点，较NAA高18.8～31.2个百分点，且可提高植株生长势（见表5）。

2.4.3 培育基质的筛选。托拉米在4种基质中的生根率分别为河沙91.2%、河沙+园田土82.0%、河沙+草炭土94.7%，河沙+园田土+草炭土为89.7%，每株根数分别为 31.8、27.4、34.1 和 30.1 条。以河沙+草炭土=1∶1作为培育基质时托拉米的生根率和每株根数最高，基质为河沙+草炭时既保水又透气，管理方便易行，为树莓生根驯化最佳培育基质（见表6）。

表4 海藻素对不同品种生根影响

2.5 移栽炼苗

栽苗采用扎孔定植法。深度0.5 cm，封严根际，随栽随浇水，栽后在植株上方覆盖薄膜保湿，上遮盖75%～80%遮阳网。一般在定植后7～10 d全天盖膜、遮阳。温度控制在13～23℃，若温度≥25℃时一侧揭膜放风；空气相对湿度保持50%～70%，5～7 d时喷杀菌药，此时小苗长出新根；移栽10～15 d，新叶生长，新生根形成根群，此间温度保持13～23℃，湿度≤50%，所盖薄膜可两侧揭开，定时放风，并增加光照，光强时仍须遮阳。此阶段开始浇施营养液，4～5 d一次，EC 1.0～1.3 ms/cm，可采取水肥交替，7 d喷一次保护性药剂；移栽15～30 d时地上植株生长，温度保持13～25℃，湿度≤50%，去掉薄膜及遮阳网，全光照；而后水肥4～5 d一次，营养液EC 1.3～1.5 ms/cm。当植株生长健壮，新叶3～5片且叶浓绿，高度1.0～1.5 cm，根群形成数量20～30条，长度1～2 cm时,开始移植到小营养钵中。30 d后调查移栽成活率(见表7)。

表6 不同基质生根情况

表7 移栽炼苗成活率

2.6 定植

当苗高长至10～20 cm时，即可转入营养钵中定植，基质用田园土∶草炭＝（2～3）∶1，按干鸡粪10 kg/m2混拌均匀，然后药剂消毒（防治土传病害的药剂）采取分层喷施法，并覆盖薄膜闷3～7 d即可。再用6 cm×6 cm营养钵装基质，摆成宽20个钵、长南北适宜的钵床，将钵浇透水，稍干后定植，将驯化好的穴盘苗取出，随栽随取，采取扎孔定植，深0.5 cm，必须将根系顺于基质并封严根迹，浇透水，控制温度13～25℃，空气相对湿度≤60%，全光照管理。一般4～6 d浇1次水。每7～10 d浇EC值1.5～1.8全元素营养液。7 d后调查成活率为99%以上。

3 小结

最佳诱导培养基MS+BA1.0 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA0.1 mg/L；最佳增殖培养基MS+BA0.5 mg/L+GA30.5mg/L+IBA 0.1mg/L；最佳的生根培养基为1/2MS+IBA0.3 mg/L。瓶外生根海藻素最佳浓度500 mg/L，平均成活率98.2%，生根率94.3%，根数51.3条。驯化基质河沙∶草炭土=1∶1最好。

[1]毕海林,徐中志.红宝玉树莓组织培养和快速繁殖技术研究[J].现化农业科技,2007(4):5-6.

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