ATDC在胃癌中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

汪伟民* 蔡炜龙 潘 杰 许洪宝

浙江省湖州市中心医院普外科（313000）

胃癌为最常见的恶性肿瘤之一，根据全球癌症统计资料，2008年胃癌新发病例数和死亡病例数分别占癌症总体新发病例数和死亡病例数的8%和10%，70%以上的新发病例和死亡病例出现于发展中国家[1]。胃癌的发生、发展是一个多因素参与的多步骤过程，幽门螺杆菌（H.pylori）感染与胃癌发生密切相关目前已成为共识[2]。ATDC基因（ataxia-telangiectasia group D complementing gene）又名 TRIM29（tripartite motif-containing 29），定位于染色体11q22-23，编码由588个氨基酸构成的蛋白质。ATDC蛋白的氨基酸序列中含有多个锌指基序和一个亮氨酸拉链基序，使之可形成同源或异源二聚体。ATDC在正常成体组织中表达于胎盘、前列腺和胸腺，在胚胎组织中表达于外胚层[3]，具有促进细胞增殖和抑制电离辐射敏感性的功能。Kosaka等[4]的研究发现胃癌组织中ATDC表达较正常胃黏膜显著增高，其高表达可作为胃癌淋巴结转移的标记。关于胃癌组织中ATDC表达与H.pylori感染的关系，目前尚未见文献报道。本研究通过检测胃癌组织中的ATDC表达并分析其表达与胃癌临床病理特征和患者H.pylori感染状态的关系，旨在进一步明确ATDC在胃癌中的作用，并初步探讨ATDC与H.pylori相关胃癌的关系，以期为胃癌的有效防治提供新的思路。

材料与方法

一、标本获取

选取2008年6月～2010年5月于浙江省湖州市中心医院行胃癌根治术的72例胃癌患者的癌组织和相应癌旁非癌组织（距胃灶边缘3～5 cm）石蜡包埋标本，所有标本均经HE染色病理检查明确诊断，按美国癌症联合会（AJCC）标准对胃癌行组织学分级。入选患者男38例，女34例，年龄32～76岁，平均（54.6±16.6）岁。所有患者均未接受过H.pylori根除治疗，术前未接受过放化疗。经13C-尿素呼气试验（13C-UBT）判定 H.pylori感染情况，H.pylori阴性28例，阳性44例，阳性率为61.1%。

二、ATDC免疫组化染色

以免疫组化SP法检测胃癌组织和相应癌旁组织中的ATDC表达和分布。兔抗人TRIM29多克隆抗体为Abcam plc.产品，即用型兔SP免疫组化检测试剂盒（含生物素标记羊抗兔IgG和HRP标记链霉卵白素工作液）为北京中杉金桥生物技术有限公司产品，操作按试剂盒说明书进行。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知ATDC染色阳性切片作为阳性对照。

结果判定：ATDC免疫反应阳性物质定位于细胞质。随机选取10个200倍视野，每视野计数400个细胞。阳性细胞比例：无，0分；<30%，1分；30%～60%，2分；≥60%，3分。阳性染色强度：无，0分；弱，1分；一般，2分；强，3分。总分为两组分值之和：0 分，阴性（－）；1～2 分，弱阳性（±）；3～4 分，阳性（+）；5～6 分，强阳性（++）。 阳性和强阳性判定为ATDC表达阳性。

三、统计学分析

应用SPSS 16.0统计软件，组间率的比较采用χ2检验，组间等级资料的比较采用Wilcoxon检验或Kruskal-Wallis H检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、胃癌和相应癌旁组织ATDC表达比较

72例胃癌组织中，ATDC阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达例数分别为5、12、40、15例，阳性表达率为76.4%（55/72），其表达定位于肿瘤细胞质；相应癌旁组织ATDC阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达例数分别为 50、20、2、0例， 阳性表达率为 2.8%（2/72），其表达定位于细胞质（见图1）。胃癌组织ATDC阳性表达率明显高于相应癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）。

二、ATDC表达与胃癌临床病理特征和患者H.pylori感染状态的关系

图1 ATDC在胃癌和相应癌旁组织中的表达（免疫组化SP法，×200）

中低分化、伴转移（包括淋巴结转移和远处转移）、伴H.pylori感染的胃癌患者，胃癌组织ATDC阳性表达率和表达强度分别明显高于高分化、不伴转移、不伴 H.pylori感染的胃癌患者，差异均有统计学意义；不同性别组间ATDC表达则无明显差异（见表1）。表明ATDC表达与胃癌组织学分级、转移以及患者的H.pylori感染状态相关，而与患者性别无关。

表1 ATDC表达与胃癌临床病理特征和患者H.pylori感染状态的关系

讨 论

胃癌是严重威胁人类健康的消化系统恶性肿瘤之一，其早期诊断和治疗一直是相关领域的研究热点。已知H.pylori是人类胃癌的Ⅰ类致癌原，因此寻找H.pylori相关胃癌的分子标记物对胃癌的有效防治具有重要意义。

ATDC又名TRIM29，属于TRIM蛋白家族，其特征性结构为含有三个锌结合域（R、B1、B2）和一个卷曲螺旋区域（CC），ATDC 含有 B1、B2和 CC。TRIM蛋白家族为RING型E3泛素连接酶亚家族之一，其成员参与了发育、细胞生长等多种生物学过程以及一些人类疾病如HIV感染和恶性肿瘤的发生。研究显示ATDC在肺癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、胃癌、胰腺癌中呈高表达，在黑素瘤、乳腺癌、头颈部癌、前列腺癌中呈低表达[3～6]。

Kosaka等[4]以实时RT-PCR和免疫组化技术检测了124例胃癌患者的ATDC mRNA和蛋白表达，发现胃癌组织中的ATDC mRNA表达水平是相应非癌组织的3.07倍，胃癌组织中ATDC阳性染色定位于肿瘤细胞质，基质细胞和正常上皮细胞中未见ATDC表达；ATDC mRNA表达与胃癌的大小、组织学分级、浸润深度和淋巴结转移相关；多变量logistic回归模型显示ATDC mRNA高表达可作为胃癌淋巴结转移的独立预测因素；此外，ATDC mRNA高表达尚与预后不良相关。Wang等[6]的研究显示，ATDC在正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织中基本不表达，在绝大多数侵袭性胰腺癌以及胰腺癌前病变中呈高表达，具有加速癌细胞增殖，促进肿瘤生长和转移的作用。

本研究以免疫组化方法检测ATDC在胃癌组织和相应癌旁组织中的表达，发现ATDC在胃癌组织中的阳性表达率显著高于相应癌旁组织（76.4%对2.8%），且胃癌组织中的ATDC表达与胃癌组织学分级和转移相关，表明ATDC可能参与了胃癌的发生、发展。

Wnt/β-catenin信号通路为常见肿瘤信号通路，大量研究[7～10]显示该信号通路障碍为胃癌发生、发展的机制之一。关于胰腺肿瘤中ATDC表达的研究[6]显示，胰腺癌组织中的ATDC表达与β-catenin水平升高相关，进一步探讨其机制，发现ATDC可与 Dvl-2蛋白（Wnt/β-catenin信号通路 Axin/Gsk-3β/APC降解复合体中Gsk-3β的负调控因子）结合并稳定其表达，从而使β-catenin从降解复合体中释放以稳定其表达，进而激活下游由β-catenin/TCF/LEF调节的靶基因转录，表明ATDC系通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥致胰腺癌作用。关于卵巢癌组织中ATDC与β-catenin关系的研究[11]亦表明β-catenin可能是ATDC参与卵巢癌发生、发展的效应蛋白。由此推测ATDC在胃癌发生、发展中的作用亦可能是通过调节Wnt/β-catenin信号通路实现的，具体机制有待进一步研究。

此外，有研究[12]发现ATDC可与乙酰转移酶蛋白Tip60结合，ATDC过表达促进Tip60降解并改变其细胞内分布，使Tip60对p53的乙酰化作用降低，导致细胞生长和转化活性增强。另有研究[13]发现，ATDC可通过与p53结合阻止其进入细胞核，从而抑制p53的核活性以及由p53调节的基因如p21、NOXA表达，促进细胞增殖。上述机制可用于解释ATDC对肿瘤细胞的促增殖作用。因此ATDC参与胃癌的发生、发展还可能与p53信号通路有关。

本研究还发现伴H.pylori感染的胃癌患者胃癌组织ATDC阳性表达率和表达强度显著高于不伴H.pylori感染的胃癌患者。本组胃癌患者系以13C-UBT判定H.pylori感染情况。鉴于胃癌患者的胃内环境已不适合 H.pylori生存，13C-UBT并不能准确反映胃癌患者的H.pylori感染状态，因此根据上述结果仅能推测ATDC与H.pylori相关胃癌之间可能存在一定联系。至于ATDC是否参与了H.pylori相关胃癌的发生机制，抑或ATDC与H.pylori系通过不同机制，在胃癌发生、发展的不同阶段起不同作用，以及两者是否具有协同致癌作用，均有待进一步研究。H.pylori感染可激活胃上皮细胞中的转录因子 NF-κB，NF-κB信号通路在H.pylori相关胃黏膜炎症中起关键作用[14,15]，亦为胃癌发生的重要路径之一[10]。ATDC参与胃癌的发生、发展是否与NF-κB信号通路有关，有待进一步研究。

综上所述，ATDC在胃癌组织中的表达显著高于相应癌旁组织，并与胃癌组织学分级和转移相关，提示其可能参与了胃癌的发生、发展；而伴H.pylori感染的胃癌患者胃癌组织ATDC表达显著高于不伴 H.pylori感染的胃癌患者，则提示ATDC可能与H.pylori相关胃癌有一定联系。因此，ATDC有望成为新的胃癌分子标记物，为胃癌的早期诊断、预后判断和基因治疗研究提供新的靶点。

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