IL-6、CRP和CD11b在新生儿败血症早期诊断中的临床价值

2012-05-08黄正国谢忠罗黄旭峰金飞燕邵成良

河北医科大学学报 2012年10期

关键词：败血症孵育白细胞

黄正国，谢忠罗，黄旭峰，何炜，金飞燕，邵成良

（浙江省富阳市人民医院儿科，浙江富阳311400）

IL-6、CRP和CD11b在新生儿败血症早期诊断中的临床价值

黄正国，谢忠罗，黄旭峰，何炜，金飞燕，邵成良

（浙江省富阳市人民医院儿科，浙江富阳311400）

目的探讨白细胞介素-6（inter1eukin-6，IL-6）、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）和中性粒细胞黏附分子（CD11b）联合检测在新生儿败血症早期中的临床诊断价值。方法回顾性分析2010年1—8月出生的新生儿196例，其中败血症36例，无感染（未患败血症）160例。分别检测败血症和无感染新生儿血清中IL-6、CRP和CD11b表达水平，并做比较分析。再比较2010年9月—2011年9月293例新生儿采用白细胞计数、血清细菌检查和IL-6、CRP和CD11b联合诊断方法的阳性检出率。结果败血症组婴儿血清中IL-6平均表达量为（72.9±12.3）μg/L，显著高于未感染组（P＜0.05）；CRP的平均表达量为（24.3±4.7）mg/L，显著高于未感染组（P＜0.05）；CD11b平均荧光强度为340±127，显著低于未感染组（P＜0.05）。白细胞计数和血清细菌联合检查阳性率亦为11.60%，而IL-6、CRP和CD11b联合检查阳性率亦为11.60%。结论IL-6、CRP和CD11b联合检测具有快速（48h内）诊断败血症的潜在临床价值。

出血性败血症；白细胞；新生儿

败血症是一种多发于新生儿的常见疾病，新生儿因免疫力低下而易感染细菌，细菌感染后会在新生儿血液中繁殖并分泌出造成新生儿全身性感染的毒素［1］。新生儿一旦患病后，会引发呼吸窘迫、心率增快、低血压、低血糖、体温波动大、腹泻、睡眠不稳、黄疸等症状，同时能明显看到新生儿脐带炎和新生儿肺炎症状［2-4］。目前新生儿败血症的诊断方法有周围白血细胞计数、体外培养、酶联免疫和涂片筛查细菌等［4-6］。外周血细胞计数特异性差，体外培养假阳性率高且检测周期长，涂片筛查细菌存在操作误差。我们以多年的新生儿败血症诊断经验，总结了白细胞介素-6（inter1eukin-6，IL-6）、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）和中性粒细胞黏附分子（CD11b）联合诊断方法，并且将这种方法与传统的白细胞计数和涂片筛查细菌的检出率做比较，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2010年1—8月在我院出生的新生儿196例，其中诊断为新生儿败血症（败血证组）36例，新生儿败血症发生率为18.37%，正常新生儿（未感染组）160例。败血症组36例，男性19例，女性17例，均在48h内诊断结果败血症。未感染组160例，男性84例，女性76例。同时抽取2010 年9月—2011年9月接受检查的293例新生儿，分别使用白细胞计数、细菌检查和IL-6、CRP和CD11b联合检查。

1.2 纳入标准和排除标准：纳入标准如下。①新生儿败血症诊断符合败血症临床诊断标准，即血清分离后在培养基上可长出致病菌，使用此条件培养其他血清，若能培养出致病菌，则可诊断为新生儿败血症；②诊断时采集的血清应为出生后48h内采集的血清。排除标准如下。①母体内母婴感染造成的婴儿感染；②非感染性的呼吸窘迫、心率增快、低血压、低血糖、体温波动大、腹泻、睡眠不稳、黄疸等；③正常新生儿无任何细菌感染等。

1.3 酶联免疫检测

1.3.1 血清采集：在新生儿出生后48h内静脉采集2mL静脉血，操作过程严格无菌操作，采集血清先37℃水浴锅水浴，然后2 500r/min离心10min，分离后的血清中的一部分用于进行败血症筛查的无菌培养。

1.3.2 实验步骤：采用双抗体夹心方法进行检测，其中IL-6酶联免疫吸附测定试剂盒购于北京冬歌生物科技有限公司），CRP酶联免疫吸附测定试剂盒购于上海研生实业有限公司。按照操作手册，每孔加入标准品20μL（复孔），另外设置样品孔，分别进行一定比例稀释。设置空白孔和对照孔。按照操作手册设置的孵育方法进行一定时间孵育。使用ELx50TM系列自动洗板机对每个板进行清洗，使用试剂盒自带的清洗液进行清洗或使用PBST（含0.05%Tween 20）进行清洗，共清洗4遍。再加入HRP标记的二抗（3种试剂盒二抗均为抗IL-6、CRP和CD11b），所有的二抗孵育条件均为37°，孵育1h。孵育结束后，使用ELx50TM系列自动洗板机清洗酶标版5次。然后加入DAB显色液，使用2mo1/L H2SO4终止反应。

1.3.3 读数和数据处理：在450nm处读取数据，并且绘制标准曲线。其中IL-6标准曲线为线性回归曲线，CRP标准曲线为二项回归曲线。再根据标准曲线方程和样品孔度数计算样品孔中IL-6、CRP的表达量，再根据稀释倍数计算原血清中IL-6、 CRP的表达量。

1.4 流式细胞仪（美国BD公司）检测中性粒细胞膜CD11b表达：分离新生儿血清中的外周血单核细胞，使用鼠抗人CD11b和PE标记的豚鼠抗IgG1 Fc段的单抗。在避光条件下使用1∶500稀释鼠抗人CD11b抗体孵育外周单核细胞20min，然后用PBST（含0.05%Tween20）清洗2次后再使用PE标记的二抗继续孵育1h，再用PBST清洗3次，最终细胞用2%多聚甲醛固定，且用PBS调节细胞浓度为1 000个/μL。检测上样量为10μL，上机检测参数设定为固定值，压力为600mV，电子补偿（FL1，0.5%；FL2，31.6%）。使用自带软件分析样品测量样品的平均荧光强度。

1.5 白细胞计数检查：所有新生儿均在清晨空腹后抽取静脉血，做白细胞计数检查。采用全自动Ce11 Dyn 3700SL血细胞分析仪分析外周血中白细胞计数和中性粒细胞比值。其中白细胞计数（4.0～10.0）×109/L为正常值，中性粒细胞比值（30～70）%为正常。白细胞计数或中性粒细胞比值超过这个范围，说明机体有病原体严重感染。

1.6 血清细菌检查：按照参考文献［7］进行分离细菌，并从菌落特点和生化观察筛选到的细菌是否为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄菌、克雷伯杆菌及B组链球菌感染所致。

1.7 统计学方法：应用SPSS12.0软件进行数据分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 败血症组和未感染组IL-6、CRP和CD11b表达量：败血症组婴儿血清中IL-6平均表达量为（72.9±12.3）μg/L，显著高于未感染组（P＜0.05）；CRP平均表达量为（24.3±4.7）mg/L，显著高于未感染组（P＜0.05）；CD11b平均荧光强度为340±127，显著低于未感染组（P＜0.05）。说明IL-6、CRP和CD11b具有作为败血症诊断标志物的可能。见表1。

表1 败血症组和未感染组IL-6、CRP和CD11b表达量比较（±s）

组别例数IL-6 （ρ/μg·L-1）CRP （ρ/mg·L-1）CD11b平均荧光强度败血症组3672.9±12.324.3±4.7340±127未感染组16034.2±9.46.1±1.41 035±276 t 2.708.4616.34 P 0.0210.0120.014

2.2 2010年9月—2011年9月新生儿白细胞计数检测结果：白细胞计数检测是败血症传统诊断方法之一。为探讨IL-6、CRP和CD11b用于败血症临床诊断的标志物作用，我们选取了白细胞计数检测作为阳性对照。结果显示，白细胞计数超标（＞10× 109/L）34例（占受检例数的11.60%），中性粒细胞比值异常32例（占受检例数的10.92%）。

2.3 2010年9月—2011年9月血清细菌检查结果：血清细菌检查为败血症另一传统诊断方法。所有败血症患儿均感染了大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄菌、克雷伯杆菌或B族链球菌感染，且均为单一均感染，无重复菌感染。败血症细菌感染者34例，占受检例数的11.60%。见表2。

表2 2010年9月—2011年9月新生儿血清细菌检查结果（n=293，例数，%）

2.4 IL-6、CRP和CD11b联合检查与白细胞计数和血清细菌联合检查比较结果：白细胞计数和血清细菌联合检查阳性率为11.60%，而IL-6、CRP和CD11b联合检查阳性率亦为11.60%，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。说明IL-6、CRP和CD11b联合检查对于诊断败血症具有一定指导意义，且具有临床诊断败血症的潜在诊断意义。见表3。

表3 IL-6、CRP和CD11b联合检查与白细胞计数和血清细菌联合检查结果比较

3 讨论

败血症诊断是预防新生儿败血症的最有效方法，可以及时发现败血症并采取及时的治疗措施。但传统的白细胞计数一般是在感染后期才能有明显的数值异常结果，不适合早期诊断。血清细菌培养方法培养时间较长，出诊断结果较慢。因此，亟需开发一种更快速的诊断方法，关于免疫应答的细胞因子、受体或者相关标志物的研究是目前疾病诊断的热点研究课题。目前IL-6、CRP和CD11b在新生儿败血症诊断方面的临床报道有很多。IL-6是Treg免疫细胞分泌表达的，在细菌免疫早期即可表达。CRP是一种单核细胞和巨噬细胞在感染后分泌的炎症因子。CD11b的减少说明抗原递呈细胞被激活，这个过程是细菌早期免疫应答中快速响应的环节。3个因子涵盖了免疫应答识别、效应和调节3个方面，联合三者诊断结果的诊断方法将具有潜在的临床意义。欧少阳等［8］探讨了IL-6和CRP联合检测在新生儿败血症早期诊断中的意义，结果显示IL-6和CRP的敏感性分别为87%、60.8%，特异性分别为82.9%、88.6%。而陈小琴等［9］IL-6、CRP、PCT水平联合检测结果敏感性更高，较IL-6 和CRP联合效果更好。崔英波等［10］深入探讨了CD11b的作用，结果中性粒细胞的成熟和CD11b分子的减少是败血症患儿的特征现象，同时CD11表达下降还能体现感染严重程度。这些都为我们提供了研究思路。

本研究结果显示IL-6、CRP和CD11b 3个因子在败血症和非感染患儿体内的表达差异有统计学意义；传统白细胞计数和血清细菌培养联合检查，与IL-6、CRP和CD11b联合检测比较，其阳性率差异无统计学意义。因此，我们可以初步判断IL-6、CRP和CD11b联合检测具有快速（48h内）诊断败血症的潜在临床价值。

［1］何丽仪，刘明伟，廖珊，等.小儿败血症71例临床特点回顾性分析［J］.中国中西医结合儿科学，2011，3（5）：441-443.

［2］ NGUYEN HB，OH J，OTERO RM，et a1.Standardization of severe sepsis management：a survey of methodo1ogies in academic and community settings［J］.J Emerg Med，2010，38（2）：122-130.

［3］ HUGGAN PJ，WELLS JE，BROWNE M，et a1.Popu1ation-based epidemio1ogy of staphy1ococcus aureus b1oodstream infection in Canterbury，New Zea1and［J］.Intern Med J，2010，40（2）：117-125.

［4］肖甜甜，王欣宁，余加林.新生儿败血症非特异性指标的诊断价值评价［J］.儿科药学杂志，2010，16（3）：9-12.

［5］陈杏春.血培养对新生儿败血症的诊断价值［J］.广西医学，2010，32（8）：970-972.

［6］白朝辉，钱春红.败血症的诊断与治疗［J］.医学信息，2009，22（7）：1312.

［7］阮小虎，李红妮，邵金辉.新生儿血液细菌培养结果分析及质量控制［J］.航空航天医学杂志，2011，22（9）：1111-1112.

［8］欧少阳，谢秀峰，卢道奋.IL-6及CRP在早期诊断新生儿败血症中的临床研究［J］.基层医学论坛，2006，10（13）：592-593.

［9］陈小琴，陈云.血清IL-6、CRP、PCT水平对新生儿败血症的诊断价值［J］.山东医药，2009，49（47）：1-3.

［10］崔英波，杜立中，陈意振，等.中性粒细胞黏附分子CD11b表达对新生儿败血症早期诊断价值的研究［J］.中华儿科杂志，2003，41（5）：348-351.

（本文编辑：刘斯静）

R631.3

1007-3205（2012）10-1193-03

2012-02-21；

2012-03-26