甘蓝型油菜与菘蓝原生质体融合及植株再生体系的研究

杜雪竹 李再云

摘要：以甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）和菘蓝（Ｉｓａｔｉｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉａ）叶片为材料提取原生质体，采用ＰＥＧ—高钙高ｐＨ法融合亲本原生质体，采用固液双层培养法诱导愈伤组织的形成。研究适宜原生质体分离的酶种类及浓度，并考察了激素种类和用量对愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明，５ ｍｇ／Ｌ纤维素酶＋３ ｍｇ／Ｌ离析酶适合甘蓝型油菜和菘蓝的酶解。各培养基中适宜的激素浓度分别为，诱导培养基ＰｅｌｌＢ １．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．25 ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ；增殖培养基ＰｅｌｌＣ ２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ；分化培养基ＰｅｌｌＥ ２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．０２ ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ。获得了１５株再生植株，杂种幼苗叶片均呈深绿色，叶表面覆有厚的蜡质，叶片肥厚，植株在成熟期时株高比甘蓝型油菜矮，开花较晚，雄蕊发育不完全，杂种体细胞染色体数目为４８～６６。

关键词：甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）；菘蓝（Ｉｓａｔｉｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉａ）；原生质体融合；植株再生