不同方法测定牛奶中环丙沙星的残留

2012-04-29刘佳穆,谭艾娟,吕世明,金志强

天津农业科学 2012年2期

关键词：牛奶

刘佳穆,谭艾娟,吕世明,金志强

摘要：采用微生物法、酶联免疫法、高效液相色谱法同时测定鲜奶中环丙沙星的残留，结果表明：微生物法适合牛奶收储时抗菌药物残留的初筛；酶联免疫法能够较精确地测定奶中环丙沙星的残留，但其费用昂贵，高效液相法适合质监部门和大型企业应用。

关键词：牛奶；高效液相法；微生物法；酶联免疫法；残留检测

中图分类号：S859.79+6文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.02.009

Detection of Ciprofloxacin Residue in Milk with Different Methods

LIU Jia-mu 1，TAN Ai-juan1， LV Shi-ming2，JIN Zhi-qiang3

(1. College of Life Sciences, Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025,China;2. College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang，Guizhou 550025, China；3. Agriculture Committee of Guiyang City, Guiyang ，Guizhou 550081，China）

Ａｂｓｔｒａｃｔ: The ciprofloxacin residues in milk were simultaneous determined with the microbial test method, Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The result showed that the microbial test method was suitable for primary screening detection of antibacterial residues in the process of milk collection. The ciprofloxacin residue in milk was determined accurately by the method of ELISA, and the cost of ELISA test was more expensive. The method of HPLC for testing ciprofloxacin residue in milk was accurate and quick, it was suitable for applying in qualitative inspect branch and large enterprise.

Key words: milk; HPLC；the microbial test method；enzyme immunoassay ; residue detection

牛奶是人们尤其是婴幼儿的主要食品，牛奶中残留抗菌药物会危害饮用者的健康[1-2]。近年来，抗菌药物越来越广泛地用于牛奶生产，如广谱的氟喹诺酮类，高效、价廉的青霉素被广泛用于奶牛疾病和乳房炎的防治[3-4]，因此，牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。本研究应用3种不同方法测定了贵阳市市售鲜奶中环丙沙星的残留。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1鲜奶样品贵阳市市售生鲜乳24份。菌株：嗜热乳酸链球菌（沈阳森科生物医药有限公司）。

1.1.2药品色谱级甲醇、色谱级乙腈（天津康巢科技公司），氟罗沙星标准品、环丙沙星标准品（纯度大于98%，上海盛思生化科技有限公司），环丙沙星检测试剂盒（美国，R&D Systems公司）；2，3，5一氯化三苯四氮唑（TTC）、氯化铜、稀硫酸、酸化乙腈等均为分析纯试剂。

1.1.3仪器Waters600高效液相仪和2876紫外检测器（美国waters公司），高速离心机（北京医用离心机厂），板式酶标仪（北京市新风技术有限公司）。

1.2方法

1.2.1微生物法（TTC法）检测牛奶中抗生素残留[3-4]嗜热乳酸链球菌液准备：活化好的嗜热乳酸链球菌接种于已灭菌的脱脂牛奶中，培养15 h，再用灭菌脱脂乳以1∶10的比例稀释菌液，备用。

抗菌药物残留的测定：取5 mL生鲜牛奶，巴氏灭菌，冷却至37 ℃，加入1 mL菌液，37 ℃水浴2 h，加入TTC试剂100 μL，37 ℃水浴30 min，记录结果。结果判定：样品颜色变红为阴性；不变红为阳性。

1.2.2酶联免疫法检测牛奶中环丙沙星的含量[7]

（1）样品前处理。准确量取5 mL牛奶，4 000 r·min-1离心，弃上层脂肪，待用。

（2）标准曲线制备。精确配制80，40，20，10，

5，2.5 μg·mL-1的环丙沙星标准品，按照试剂盒说明书进行测定，以OD值为横坐标，浓度为纵坐标作标准曲线。

（3）样品奶中环丙沙星测定。按照检测试剂盒说明书测定环丙沙星的含量。

1.2.3高效液相法检测牛奶中环丙沙星含量样品前处理：取2 mL牛奶于50 mL离心管中，加入10 mL 0.1 mol·L-1的磷酸盐缓冲液，漩涡混合2 min，超声30 s，振荡5 min，4 000 r·min-1离心10 min，抽取沉淀和乳脂之间的液体，待用，过C18小柱，用5 mL水和0.5 mL甲醇淋洗，再用流动相1 mL洗脱，经0.45 μm滤膜过滤后上机测定。

色谱条件：流动相0.05 mol·L-1磷酸缓冲液-乙腈（80∶20），波长260 nm，流动相流速0.8 mL·min-1，进样量20 μL，柱温25 ℃。

2结果与分析

经TTC法检测，在24个样品中，只有1个样品颜色未发生变化，阳性率4.2%。酶联免疫法检测出24个样品中15个样品含有环丙沙星，其阳性率62.50%。高效液相检测的标准曲线为：y=30 2 16x+147，R=0.999 9，回收率大于86.9%，检出率与酶联免疫法一致，详见表1。

结果表明，TTC法简单经济，但只能判定奶中抗菌药物是否超过残留限量，不能确定抗菌药物的种类和含量，适合牛奶收储时抗菌药物残留的初筛；高效液相法和酶联免疫法能够进行精确的定量，其中酶联免疫法可以快速检测奶中环丙沙星的残留并得出较准确结果，但其费用昂贵，不适合大规模检测；高效液相法操作快，检测结果不仅可以定性，还可以得出准确含量，但是设备昂贵，只能为质监部门和大型企业采用。

3讨论

随机采取的24份生鲜奶中，环丙沙星的检出率为62.50%（16/24），16个阳性样品中，只有一份奶样的环丙沙星残留超标（189.3 ng·mL-1）,其余15份样品的含量均低于国家规定的100 ng·mL-1的残留限量。根据TTC法的检测结果，贵阳市市售生鲜奶中抗生素残留的阳性率为4.2%，与国内其它城市的检测结果相比处于中等偏下的水平[8-11]；目前我国牛奶中抗生素残留的情况并不乐观，有关部门应加强管理，规范企业行为，建立乳制品市场准入制度[12]，并对牛奶中抗生素残留进行有效监测和监控，以保证人们饮用牛奶的卫生和安全[13]。

参考文献：

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