GAL4/UAS系统在果蝇Tisll基因RNA干扰中的应用

刘勇　张梅超　韦有恒　马维骏

生物体癌症发生、免疫反应与生长发育中，许多关键基因的mRNA具有不稳定性，这些基因的表达除了受到转录和翻译水平的调控外，更多的受到转录后水平的调控，在哺乳动物基因的转录后调控中起重要作用的是一种被称为Triste－traprolin(TTP)的蛋白，它具有两个保守的CCCH锌指结构，通过该结构TTP蛋白能够结合到靶基因mRNA的富含AU的元件(AU rich element，ARE)并介导它们的快速降解，Tisll是TTP在果蝇中的同源物，在果蝇细胞中Tisll蛋白参与调节mRNA的稳定性，果蝇的系统简单、遗传背景清楚、易于饲养和操作，是研究Tisll功能的良好模式生物，研究基因功能的经典方法是观察检测该基因缺失或者表达降低后引起的生理生化反应，但是目前还没有现成的Tisll基因缺失的果蝇，因此，获得Tisll基因缺失的果蝇尤为重要，通常利用P因子的不精确剪切制备基因敲除的果蝇，但是此方法具有周期长、工作量较大、基因敲除的特异性不强、基因敲除的效应不可调节等不利因素，而利用GAL4／UAS系统能够快速、方便地获得可调控的RNA干扰果蝇，GALA／UAS系统是一种二元转基因系统，在这个系统中组成型或者调节型启动子驱动表达的GAL4蛋白能够特异结合到UAS序列上，激活UAS下游外源序列的表达，这类系统的最大优点是能够构建大的转基因库，研究者能够根据各自的研究目的，从UAS库中选取合适的针对靶基因的品系与符合研究要求的GAL4品系杂交，方便地获得所需的转基因果蝇，囚此，我们从库中选择含Tisll干扰序列的UAS品系，将其分别与肌动蛋白启动子驱动或热激蛋白启动子驱动的GALA品系杂交来获得Tisll基因干扰的果蝇。