不同浓度CPPU对欧亚旋覆花愈伤组织诱导的影响

周红菊

摘要：以欧亚旋覆花（Inula britannica L.）无菌苗为材料，研究了不同浓度调吡脲（ＣＰＰＵ）对其叶片、根愈伤组织诱导的影响。结果显示，ＣＰＰＵ的浓度为０．１０ ｍｇ／Ｌ时，叶片的愈伤组织诱导率为８２．９％，且诱导出的愈伤组织生长好。ＣＰＰＵ的浓度为０．５０ ｍｇ／Ｌ时，根的愈伤组织诱导率最高，达１００．０％，愈伤组织生长最好，呈浅黄绿色，部分带有红色斑点，质地疏松，具光泽。

关键词：调吡脲（CPPU）；欧亚旋覆花（Inula britannica L.）；愈伤组织诱导

中图分类号：Ｑ９４９．７８３．５；Ｑ８１３．１＋２ 文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）06－1268-02

Influence of CPPU Concentration on Callus Induction of Inula britannica

ＺＨＯＵ Ｈｏｎｇ－ｊü

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｅｎｇｓｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈｅｎｇｓｈｕｉ ０５３０００，Hebei，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｒｏｏｔ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｂｒｉｔａｎｎｉｃａ Ｌ． ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＣＰＰＵ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｌｅａｆ ｗａｓ ａｓ ｈｉｇｈ ａｓ ８２．９％ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＰＰＵ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ０．１０ ｍｇ／Ｌ； ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｗｅｌｌ． Ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｏｏｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｐ ｔｏ １００％ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０．５０ ｍｇ／Ｌ ＣＰＰＵ； ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｌｉｇｈｔ Ｋｅｌｌｙ， ｌｏｏｓｅ ａｎｄ ｇｌｏｓｓｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＣＰＰＵ； Ｉｎｕｌａ ｂｒｉｔａｎｎｉｃａ Ｌ．； ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ

歐亚旋覆花（Inula britannica L.）是菊科多年生草本植物，是一种中草药，含多种生物活性成分。其含有的乙酰大花旋覆花内酯具有和紫杉醇相似或更强的抗癌活性，可作为一种有效的天然化学防癌剂和治疗药物［１］，但其活性成分在原植物中的含量极低且不稳定，产自山西的欧亚旋覆花中乙酰大花旋覆花内酯的含量为０．５８％，而产于河北的则为０．３４％［２］。持续地从野生欧亚旋覆花中提取有效活性成分势必会破坏生物多样性和生态系统的平衡。采用植物组织培养的方法使得该类活性成分的获取在人为可控及可持续生产的条件下进行，具有广阔的应用前景。

调吡脲（ＣＰＰＵ）是一种人工合成的吡啶取代脲类的细胞分裂素，具有诱导愈伤组织生长，促进芽的发育、种子的萌发，保绿和延缓衰老等显著的生理活性［３］。ＣＰＰＵ诱导细胞分裂和促进器官发生的活性远远高于一般嘌呤类细胞分裂素的活性［４］。低浓度的ＣＰＰＵ能促进草莓愈伤组织分化［５］、香蕉不定芽增殖［６］等。

以欧亚旋覆花无菌苗为材料，研究不同浓度CPPU对其叶片、根愈伤组织诱导的影响，为其愈伤组织的培养提供理论依据。

１材料与方法

１．１材料

欧亚旋覆花无菌苗由河北医科大学组织培养室培养所得。

１．２方法

切取欧亚旋覆花无菌苗的根和叶片作为外植体，接种到附加不同浓度ＣＰＰＵ（０、０．０５、 ０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／Ｌ）、６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上，黑暗培养，诱导温度为（２３±１）℃，４０ ｄ后统计愈伤组织诱导率和观察愈伤组织生长状况，每个处理接种３５个外植体， ３次重复。研究不同浓度ＣＰＰＵ对欧亚旋覆花愈伤组织的诱导情况。

２结果与分析

２．１不同浓度ＣＰＰＵ对叶片愈伤组织诱导的影响

表１表明，ＣＰＰＵ对欧亚旋覆花叶片愈伤组织诱导率及愈伤组织诱导出后生长有一定的作用，从愈伤组织诱导率来看，在不同浓度的ＣＰＰＵ中，以０．１０ ｍｇ／Ｌ的愈伤组织诱导率最高，为８２．９％，低浓度和高浓度的ＣＰＰＵ均导致愈伤组织诱导率降低， ＣＰＰＵ浓度为１．００ ｍｇ／Ｌ时已完全抑制外植体产生愈伤组织。从愈伤组织生长情况来看，ＣＰＰＵ浓度为０．１０ ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织生长较好，其他浓度下，愈伤组织生长一般。从出芽状况上看，不添加ＣＰＰＵ时，叶脉处有腋芽生成，且生长健壮，ＣＰＰＵ浓度为０．０５ ｍｇ／Ｌ时叶脉处有叶芽生成，但生长较弱，ＣＰＰＵ的浓度大于０．１０ ｍｇ／Ｌ时，叶脉处无叶芽生成。结合愈伤组织诱导率及愈伤组织诱出后生长情况来看，各浓度ＣＰＰＵ对叶片诱导愈伤组织情况的综合排名为Ｃ２＞Ｃ０＞Ｃ１＞Ｃ３＞Ｃ４（Ｃ０代表不添加ＣＰＰＵ，Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４依次代表添加０．０５、０．１０、０．５０、１．００ ｍｇ／Ｌ ＣＰＰＵ，下同）。

２．２不同浓度ＣＰＰＵ对根愈伤组织诱导的影响

表２表明，ＣＰＰＵ对欧亚旋覆花根愈伤组织有较强的诱导作用，愈伤组织诱导率随激素浓度的不同差异较大，在不同浓度的ＣＰＰＵ中，以０．０５和０．５０ ｍｇ／Ｌ的愈伤组织诱导率最高，为１００．０％，ＣＰＰＵ浓度为１．００ ｍｇ／Ｌ时，完全抑制了外植体产生愈伤组织。从愈伤组织生长情况来看， ＣＰＰＵ浓度为０．５０ ｍｇ／Ｌ时所诱导的愈伤组织生长最好，呈浅黄绿色，部分带有红色斑点，质地疏松，具光泽。结合愈伤组织诱导率及愈伤组织诱导出后生长发育情况来看，各浓度ＣＰＰＵ对根诱导愈伤组织情况的综合排名Ｃ３＞Ｃ１＞Ｃ０＞Ｃ２＞Ｃ４。

３讨论

药用植物的有效成分往往是次生代谢产物，大量的研究表明，一些植物的细胞培养物可以产生次生代谢产物。到目前为止，中国科学人员已经建立了三七、人参、紫草、甘草、红豆杉、丹参等十几种药用植物细胞的液体培养系统，经过培养基和培养条件的筛选已使部分药用植物的有效成分含量达到或超过了原植株。

目前已报道的欧亚旋覆花的研究主要集中在其活性成分的药理作用、提取和结构鉴定等方面，未见其植物组织培养和活性成分生物合成方面的报道。本试验研究了不同浓度ＣＰＰＵ对愈伤组织诱导的影响，为欧亚旋覆花愈伤组织的培养提供理论依据，为其有效成分的生物合成研究奠定了基础。

参考文献：

［１］ ＨＯ Ｃ Ｔ，ＲＡＦＩ Ｍ，ＤＩＰＡＯＬＡ Ｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ． Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｕｓｉｎｇ １－Ｏ－Ａｃｅｔｙｌｂｒｉｔａｎｎｉｌａｔｏｎｅ ｏｒ １，６－Ｏ，Ｏ－Ｄｉａｃｅｔｙｌｂｒｉｔａｎｎｉｌａｔｏｎｅ［Ｐ］． ＵＳＡ：ＵＳ６６２７６２３Ｂ２，２００３－０９－３０．

［２］ 王维娜，王云志，张嫡群．旋覆花１－Ｏ－Ａｃｅｔｙｌｂｒｉｔａｎｎｉｌａｃｔｏｎｅ ＲＰ－ＨＰＬＣ含量测定方法的研究［Ｊ］．药物分析杂志，２００５，２５（２）：２０５－２０７．

［３］ 李颖华，宁聪梅． 新型植物生长调节剂调吡脲［Ｊ］． 农药，１９９４， ３３（４）：１８－１９．

［４］ 高金山，边庆华，张永忠，等． 细胞分裂素ＣＰＰＵ的研究进展［Ｊ］． 农药，２００６，４５（３）：１５１－１５４．

［５］ 吴伟民，陈晓强，陈秀兰，等． ＣＰＰＵ对草莓花药愈伤组织诱导和分化的影响［Ｊ］． 中国南方果树，１９９９，２８（２）：３６－３７．

［６］ 罗富英，张伟国，黄麒参． ＣＰＰＵ对香蕉不定芽增殖的影响［Ｊ］． 中国种业，２００６（２）：３２－３３．