一例体细胞克隆水牛脂肪及皮肤的组织结构观察

王晓丽 周石琼 李波 魏晓瑞 崔奎青 石德顺

摘要：应用光镜及ＨＥ染色等技术对体细胞克隆水牛的脂肪和皮肤组织及其细胞类型和形态进行了详细的观察，旨在为以后体细胞克隆牛的研究提供一定的理论依据，结果表明，脂肪组织外周有疏松结缔组织包裹，脂肪小叶不明显；皮肤由表皮和真皮构成，借助皮下组织与深部的肌肉相连，局部表皮有脱落，皮肤上有毛囊分布。

关键词：水牛；体细胞克隆；脂肪；皮肤

中图分类号：Ｑ８１３；Ｓ８２３．８＋３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）06－1193-02

Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆａｔ ａｎｄ Ｓｋｉｎ ｉｎ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｎｕｃｌｅａｒ

Ｔｒａｎｓｆｅｒｅｄ Ｂｕｆｆａｌｏ

ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｌｉ１，ＺＨＯＵ Ｓｈｉ－ｑｉｏｎｇ１，ＬＩ Ｂｏ２，ＷＥＩ Ｘｉａｏ－ｒｕｉ１，ＣＵＩ Ｋｕｉ－ｑｉｎｇ１，ＳＨＩ Ｄｅ－ｓｈｕｎ１

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００５ ，Ｃｈｉｎａ；

２． Ａｑｕａｔｉｃ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｕｒｅａｕ， Ｊｉｎｘｉｕ Ｙａｏ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｃｏｕｎｔｙ，Ｌａｉｂｉｎ ５４５７００，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｕｆｆａｌｏ， ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ ａｎｄ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒｅｄ ｂｕｆｆａｌｏ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ａｎａｔｏｍｙ， ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｕｆｆａｌｏ ｗｅｒｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｌｏｏｓｅ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｆａｔ ｌｏｂｕｌｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｏｂｖｉｏｕｓ； Tｈｅ ｓｋｉｎ ｗａｓ ｃｏｍｐｏｓｅｄ of ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ａｎｄ ｄｅｒｍｉｓ， ａｎｄ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｓ． Ｐａｒｔ ｏｆ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｗａｓ ａｂｓｃｉｓｓｉｏｎ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｕｆｆａｌｏ； ｓｏｍａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ； ｆａｔ； ｓｋｉｎ

自從１９９７年体细胞克隆羊“多莉”出世以来，体细胞克隆动物已成为当前科学研究的热点之一。目前已成功克隆出了牛、羊、猪、兔等动物［１－４］。我国研究人员也在动物体细胞克隆方面进行了大量的研究。其中广西大学动物繁殖研究所就先后成功地获得了体细胞克隆水牛和体细胞克隆黄牛［５］。

本试验对出生后不幸夭折的体细胞克隆水牛进行剖检，发现小牛犊的皮肤表面无毛附着，局部皮肤脱落；脂肪组织呈黄蜡样干酪状，手捏无油性，对所取皮肤和脂肪组织进行固定，通过光镜及ＨＥ染色等技术对体细胞克隆水牛皮肤及脂肪组织结构进行了观察分析，为以后体细胞克隆水牛的研究提供必要的理论支撑。

１材料与方法

脂肪及皮肤组织取材于广西大学动物繁殖研究所的体细胞克隆水牛。此克隆水牛出生时死亡，对其进行解剖，取皮肤和脂肪组织，然后用７５％的酒精固定，经脱水、透明、石蜡包埋后切片（厚度７ μｍ），再ＨＥ染色［６］，在光镜下观察、显微摄影。

２结果与分析

２．１脂肪组织

解剖后发现，体细胞克隆水牛体内脂肪组织呈黄蜡样干酪状，手捏无油性，质感呈干肉状。经ＨＥ染色后，低倍镜下观察发现，脂肪组织外周有疏松结缔组织包裹，脂肪小叶不明显（图１）。

高倍镜下，脂肪组织由大量脂肪细胞聚集而成，细胞表面有少量致密而纤细的纤维成分，基质含量极少。在脂肪组织内的疏松结缔组织较少，有小血管存在。脂肪细胞较大且边缘不规则，呈球形、卵圆形或多角形。细胞核不可见，细胞内的脂滴呈现大空泡形（图２）。

２．２皮肤

解剖后发现，体细胞克隆水牛皮肤呈棕黑色，表面无毛附着，局部皮肤脱落。

ＨＥ染色后，低倍镜下发现，皮肤由表皮和真皮构成，借助皮下组织与深部的肌肉相连，局部表皮有脱落，皮肤上有毛囊分布（图３）。

高倍镜下，表皮由复层扁平上皮构成，未发现角化层，基底层附着于基膜上，由一层矮柱状的基底细胞组成。胞质内因有丰富的游离核糖体而呈嗜碱性，故染色较深；表皮局部与真皮层脱离。真皮位于表皮下方，分层不明显。在真皮下方为皮下组织，由疏松结缔组织和脂肪组织构成。毛囊周围未发现典型结构的皮脂腺和汗腺（图４）。

３小结与讨论

本研究发现，体细胞克隆水牛体内脂肪组织外周有疏松结缔组织包裹，脂肪小叶不明显；脂肪组织由大量脂肪细胞聚集而成，细胞表面包绕着少量致密而纤细的网状纤维，基质含量极少。在脂肪组织内的疏松结缔组织较少，有小血管存在。脂肪细胞较大且边缘不规则，呈球形、卵圆形或多角形。细胞核不可见，细胞内的脂滴呈现大空泡形，这是由于在ＨＥ染色切片中脂滴被溶解的缘故。

皮肤由表皮和真皮组成，借助皮下组织与深部组织相连，毛、趾甲、皮脂腺、汗腺等是皮肤衍生物。在皮肤中还含有感受各种刺激的感受器，如毛、皮脂腺和汗腺等，具有感觉、调节体温、分泌、排泄废物以及储藏营养物质的作用［７，8］。表皮由基底至表面一般可分为五层，即基底层、棘细胞层、颗粒层、透明层和角质层。本研究发现，体细胞克隆水牛皮肤由表皮和真皮构成，借助皮下组织与深部的肌肉相连，局部表皮有脱落，皮肤上有毛囊分布；表皮由复层扁平上皮构成，未发现角化层，真皮位于表皮下方，分层不明显。在真皮下方为皮下组织，由疏松结缔组织和脂肪组织构成。毛囊周围未发现典型结构的皮脂腺和汗腺。

参考文献：

［１］ 谭景和．动物克隆技术研究的历史、现状与展望［Ｊ］．动物医学进展，２００３，２４（２）：１－６．

［２］ 龚国春，戴蕴平，李宁． 利用体细胞核移植技术生产转基因牛［Ｊ］．科学通报，２００３，１２（４８）：２５２８－２５３３．

［３］ 李光华，叶绍辉． 动物体细胞克隆技术的研究进展［Ｊ］． 家畜生态学报，２００６，２７（４）：１－５．

［４］ 戴蕴平，连正兴，朱化彬，等．中国红系冀南黄牛的克隆及其繁殖性能［Ｊ］．科学通讯，２００５，５０（２４）：２７６３－２７６８．

［５］ 陆凤花．世界首例成活的体细胞克隆水牛在广西大学诞生［Ｊ］．广西农业生物科学，２００５，２４（１）：５．

［６］ 芮菊生．组织切片技术［Ｍ］．北京：人民教育出版社，１９８０．

［7］ 沈霞芬．家畜组织学与胚胎学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２０００．

［8］ 李晓霞，孙宏夫．高原紫外线对人体表皮朗格罕细胞影响的免疫组化研究［Ｊ］．高原医学杂志，１９９６，６（２）：１２－１5．