带菌育苗基质对西瓜细菌性果斑病发生的影响和药剂筛选研究

牛庆伟　孔秋生　黄远　别之龙

摘 要： 西瓜细菌性果斑病（BFB）是西瓜上的毁灭性病害，研究其侵染途径及防治方法对于西瓜生产具有重要意义。本研究通过对育苗基质人工接种西瓜细菌性果斑病菌，发现基质带菌能够导致西瓜幼苗BFB的发生。通过室内试验评估了可杀得叁仟、加瑞农、加收米、注射用硫酸链霉素、90% 新植霉素5种药剂对西瓜细菌性果斑病菌的抑菌和杀菌效果，发现 90% 新植霉素（100、200、300 mg·L-1）对西瓜细菌性果斑病菌有较强的抑制效果，加瑞农（600、800倍液）处理细菌5 h，对西瓜细菌性果斑病菌的室内杀灭效果达到100%。在此基础上，研究在基质带菌量为109 cfu·kg-1的情况下，不同药剂消毒育苗基质对西瓜幼苗细菌性果斑病的防治效果。结果表明，每1 m3基质喷淋100 kg药剂，播种后的第15天，加瑞农600倍液和加收米400倍液对西瓜幼苗细菌性果斑病的防效分别达到 46.4% 和30.4%。

关键词： 药剂； 西瓜； 育苗基质； 细菌性果斑病

西瓜细菌性果斑病（Bacterial Fruit Blotch）又称细菌性斑点病、西瓜水渍病、果实腐斑病等，病原菌是燕麦嗜酸菌西瓜亚种（Acidovorax avenae subsp. citrulli）。该病最早于1969年由Crall和Schenck[1]在美国佛罗里达州发现，我国1985年发现并开始报道瓜类细菌性果斑病的发生和危害[2-4]。该病是典型的由种子带菌引起的传染性病害，是我国规定的检疫性病害之一。在田间，该病菌可为害果实、叶片和嫩茎，引起果实腐烂变褐，嫩茎、叶腐烂，幼苗坍塌死亡，为害严重[5]。

细菌性果斑病是目前西瓜育苗中一种新的毁灭性病害。部分育苗场育苗时，因为该病的侵染造成死苗，损失在80% 以上[6]。由于病菌主要通过种子传播[7-8]，病瓜种子带菌率较高[9]，病原菌从被感染的种子传播到幼苗的几率很高[8]。育苗前选用健康种子或对种子进行防病处理是控制西瓜细菌性果斑病传播的主要途径。西瓜细菌性果斑病初侵染源除了种子之外，还有土壤、病残体、其他杂草和寄主[10]。由于目前西瓜集约化嫁接育苗生产中主要采用基质育苗，育苗基质是否能传播西瓜细菌性果斑病，以及采用何种药剂具有较好的防效是西瓜育苗生产中亟待解决的问题。本研究旨在分析带菌育苗基质与西瓜幼苗果斑病之间的关系，并筛选适合对育苗基质进行喷淋消毒的药剂，探讨科学合理的育苗基质消毒技术，以期为西瓜健康种苗的生产提供技术支撑。

1 材料和方法

1.1 供试材料

供试西瓜种子为早佳（84-24，由新疆明鑫科鸿农业科技有限责任公司提供）。西瓜果斑病菌株为pslbtw20，由中国农业科学院植物保护研究所赵廷昌先生惠赠。供试培养基为KBA培养基（硫酸镁1.5 g、磷酸氢二钾1.5 g、琼脂20 g、甘油10 g、蛋白胨20 g、蒸馏水1 000 mL、pH值7.0～7.2）。育苗基质为V（草炭） ∶ V（珍珠岩）=2 ∶ 1。药剂为可杀得叁仟（美国杜邦公司生产）、加瑞农（北兴化学工业株式会社生产）、加收米（北兴化学工业株式会社生产）、注射用硫酸链霉素（华北制药股份有限公司生产）、90% 新植霉素（石家庄曙光制药厂生产）。试验于2011年8月18日至11月1日在华中农业大学校内进行。

1.2 试验方法

1.2.1 药剂的室内抑菌和杀菌试验 抑菌作用采用纸碟法进行测定[11]，杀菌效果测定按照赵廷昌等的方法进行[12]。

1.2.2 带菌育苗基质与西瓜幼苗细菌性果斑病间的关系试验 细菌性果斑病菌的接种参考秦芳玲等[13]解磷细菌的接种方法并进行改进。采用KBA液体培养基对西瓜细菌性果斑病菌进行培养（28 ℃，220 r·min-1），当菌液浓度OD600值达到0.3～0.4（浓度约为108 cfu·mL-1）时，用无菌水分别稀释成107、106、105 cfu·mL-1；然后把各浓度水平的细菌悬浮液接种到育苗基质，1 kg基质拌600 mL菌液，即基质的带菌量分别约为109、108、107 cfu·kg-1，以不接菌为对照。然后播种已经催芽的早佳种子，4次重复，完全随机排列，每个重复50株，每天统计西瓜幼苗发病率，15 d后称量各处理西瓜苗地上部鲜质量并计算病害等级。

1.2.3 药剂消毒带菌基质对西瓜苗期细菌性果斑病的防治效果试验 按照1.2.2的结果，选取109 cfu·kg-1为育苗基质的接菌量。将西瓜细菌性果斑病菌接种到育苗基质后，药剂喷淋基质并混合均匀，药剂用量为100 kg·m-3基质[14]。供试药剂及浓度为：加收米400倍液、加瑞农600倍液、90% 新植霉素300 mg·L-1、注射用硫酸链霉素300 mg·L-1和可杀得叁仟1 500倍液，以不消毒为空白对照，共6个处理。完全随机排列，重复4次，每个重复50株。试验采用 50孔穴盘，每个穴盘容纳约0.004 m3基质，药剂消毒处理后播种已经催芽的早佳种子，每天统计西瓜幼苗的发病率，15 d后称量各处理西瓜苗地上部鲜质量并计算病害等级。

1.2.4 幼苗生长环境条件 试验期间温室温度为20～30 ℃，平均相对空气湿度80%，无补光措施，早佳在温室中生长15 d。

1.2.5 病害等级分级和相对防效计算 病害等级的分级标准参考Bahar等[15]的方法：按照“处理地上部鲜质量/对照地上部平均鲜质量”的百分比把病害等级分为8个等级：0级，>90%；1级，76%～90%；2级，61%～75%；3级，46%～60%；4级，31%～45%；5级，16%～30%；6级，≤15%；7级，全部死苗。

防治效果的计算公式参考王钦英等[16]的方法：防治效果/%=（对照发病率-处理发病率）/对照发病率×100

1.2.6 数据分析 用SAS软件对数据进行方差分析和多重比较。对于发病率数据，用平方根反正弦转换后，再进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 5种药剂对西瓜细菌性果斑病菌的室内抑菌和杀灭效果

室内应用圆形滤纸法测定结果表明，加瑞农（600、800、1 000倍液）、加收米（400、600、800倍液）、可杀得叁仟（1 500倍液）、注射用硫酸链霉素（100、200、300 mg·L-1）对西瓜细菌性果斑病菌无抑菌作用。90% 新植霉素（100、200、300 mg·L-1）对西瓜细菌性果斑病菌有较好的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15.3、19.3、22.5 mm，浓度高抑菌效果显著。

表1试验结果显示，加瑞农、加收米、注射用硫酸链霉素、可杀得叁仟、90% 新植霉素对西瓜细菌性果斑病菌均有不同程度的杀灭效果。对西瓜细菌性果斑病菌的杀菌作用为100% 的供试药剂为加瑞农（600、800倍液）、注射用硫酸链霉素（200、300 mg·L-1）；杀灭效果为75% 的有新植霉素（200、300 mg·L-1）、加瑞农（1 000倍液）、注射用硫酸链霉素（100 mg·L-1）、可杀得叁仟（1 500倍液）；杀灭效果为 50% 的有加收米（400、600倍液）；杀灭效果为25% 的有加收米（800倍液）。

2.2 带菌育苗基质与西瓜幼苗细菌性果斑病间的关系

播种后第15天，不同基质带菌量（109、108、107 cfu·kg-1）下西瓜幼苗细菌性果斑病的病害等级分别为5、2和0.75，处理间存在显著差异。不同基质带菌量下幼苗细菌性果斑病发病率随时间的延长而增加（图1）。随着基质带菌量的增加，幼苗细菌性果斑病发病率逐渐增加。播种后第6天，西瓜幼苗子叶开始出现水渍状病斑。播种后第10 天，不同基质带菌量下幼苗细菌性果斑病发病率分别为71.5%、30.5% 和6.5%。基质带菌量为109 cfu·kg-1时，播种后病情发展迅速，到第15 天时，幼苗细菌性果斑病发病率达到97%。

2.3 不同药剂喷淋带菌基质对西瓜幼苗细菌性果斑病的防治效果

在基质带菌量为109 cfu·kg-1的情况下，采用不同药剂喷淋带菌基质后幼苗细菌性果斑病发病率随时间的变化见图2。采用90% 新植霉素、注射用硫酸链霉素和可杀得叁仟分别喷淋带菌基质，播种后15 d，幼苗细菌性果斑病发病率与对照无显著差异；用加瑞农600倍液和加收米400倍液处理后幼苗细菌性果斑病发病率显著低于对照。加瑞农600倍液和加收米400倍液2种处理相比，播种后11 d内，幼苗细菌性果斑病的发病率无显著差异，播种后11～15 d，加瑞农600倍液的防治效果优于加收米400倍液。播种后第15天，不同药剂喷淋带菌基质对西瓜幼苗细菌性果斑病的防治效果见表2。在基质未消毒处理（带菌量109 cfu·kg-1）的情况下，幼苗细菌性果斑病发病率97%，病害等级为5；加瑞农600倍液消毒基质后幼苗细菌性果斑病发病率为52%，病害等级为1.75，防效达46.4%；加收米400倍液消毒基质后幼苗细菌性果斑病发病率为67.5%，病害等级为2.5，防效达30.4%，其他药剂基本无效。

3 讨 论

本试验结果表明，带菌育苗基质能够作为初侵染源，从而使西瓜幼苗发生细菌性果斑病，而且基质带菌量越多，西瓜幼苗发病越严重，表明基质带菌也是西瓜感染细菌性果斑病的重要途径。在细菌性果斑病发生的育苗区，即使对新购买的育苗基质进行消毒处理也是非常必要的。

比较药剂室内抑菌和杀菌试验结果，发现5种药剂对细菌性果斑病菌均有一定的杀灭效果，但是仅90% 新植霉素具有抑菌作用，其他4种药剂均无抑菌作用，这可能与药剂在培养基上的扩散性有关，如果仅使用抑菌圈法筛选药剂，可能会漏选药剂。本试验结果发现，不同药剂处理的室内结果与田间结果存在不一致的问题，如加收米400倍液在室内的杀菌效果仅达到50%，但是在田间的防效达到了30.4%，相反，在室内杀菌效果优于加收米的可杀得叁仟、注射用硫酸链霉素和90% 新植霉素，在带菌基质的消毒处理中却几乎没有防效，具体原因尚待进一步研究。

本试验研究了高剂量带菌基质（带菌量为109 cfu·kg-1）条件下不同药剂处理的效果，结果发现加瑞农600倍液和加收米400倍液具有一定的防治效果，考虑到育苗工厂中通过基质高剂量带菌的情况很少，多数情况下可能是低剂量带菌，因此上述2种药剂可以作为基质消毒的推荐药剂。

4 结 论

本试验结果表明，通过育苗基质带菌是西瓜感染细菌性果斑病的重要途径，当基质带菌量 107～109 cfu·kg-1时，随着基质带菌量的增大，西瓜发生细菌性果斑病的程度越重。室内抑菌试验表明，90% 新植霉素（100、200、300 mg·L-1）对西瓜细菌性果斑病菌有较好的抑制效果；加瑞农（600、800倍液）处理西瓜细菌性果斑病菌5 h，对西瓜细菌性果斑病菌的室内杀灭效果达到100%。在基质带菌量为109 cfu·kg-1的情况下，加瑞农600倍液和加收米400倍液喷淋消毒基质具有减轻西瓜幼苗细菌性果斑病的作用，其防治效果分别为46.4% 和30.4%，加瑞农600倍液处理的效果最佳。

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