全自动血型及配血分析系统在血型鉴定中的应用

(昆明医科大学第一附属医院，昆明 650032)

ABO、RhD血型的鉴定是确保临床输血安全的重要环节，以往使用的鉴定方法是经典试管法，结果可靠，但因手工加试剂操作步骤多，难以规范化，鉴定过程中增加了人为错误的概率，不适用于批量标本的处理。近年来微柱凝胶技术做为一种新兴的血型血清学技术应用于ABO、RhD血型抗原鉴定，反应结果可靠，特异性强。特别是在引入全自动加样、离心判读结果后，实现了血型鉴定的自动化、标准化、信息化，可用于大批量标本的常规检测，节省人力，消除了人为因素对检测结果的影响［1］。2011年7～12月，我们采用美国强生Ortho Autouve Innova全自动血型及配血分析系统(以下简称强生Autouve)(仪器法)和试管法分别检测患者血型，并对检测结果进行了分析。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 本组9 350例份标本均为患者首次入院第1份备血标本。采用EDTA-K2抗凝真空无菌采血管，采集外周静脉血3 mL，3 h内进行检测。

1.2 仪器与试剂 强生Autouve，KA-2200型血型血清学多用离心机(日本久保田公司);ABO-Rh正反定型检测玻璃微珠卡(美国强生公司)。单克隆抗A、抗B标准血清(长春博讯生物技术有限责任公司);IgM单克隆抗D血清(上海血液生物医药有限公司);3% ～5%标准红细胞(参考强生ABO-Rh正反定型试剂卡使用说明书，由本实验室自制)。

1.3 方法 分别采用仪器法和试管法进行血型检测。①仪器法:应用强生Autouve系统对9 350例份血样按照仪器操作规范进行全自动加样，进行ABO正反定型及RhD血型检测，使用系统进行血型卡离心，结果判断与信息保存。对于自动判读结果中提示可能有亚型存在或正反定型不一致的标本用传统试管法做进一步确证实验。结合临床病史、用药史、输血史等为血型鉴定提供依据。②试管法:按《输血技术手册》［2］中的具体步骤操作。RhD阴性确证及 ABO 亚型鉴定均按文献［3，4］方法操作。

2 结果

仪器法和试管法共检出A型2 982例、B型2 545例、O型2 823例、AB型1 000例，一次性判断准确率分别为 99.71%(9 313/9 350)、100.00%;共检出Rh(D)阴性48例，阴性率为0.51%，一次性判断准确率分别为 99.74%(9316/9350)、100.00%。两种方法血型检测准确率差异无统计学意义(P均＞0.05)。仪器法中出现的正反定型不一致的37例用试管法做进一步确证实验，其中18例为新生儿血液标本，自身血型抗体未产生或抗原较弱引起;6例因疾病或药物治疗造成抗原抗体效价过低影响反定型结果;4例因血标本抗凝不完全，纤维蛋白干扰导致假凝集;5例存在严重冷凝集。发现疑似亚型标本4例，经吸收放散等试验后确证定型［5］。

3 讨论

血型是人体血液中的一种遗传性状，红细胞、白细胞和血小板各有复杂的血型系统。临床输血中血型鉴定错误会造成严重的输血反应。因此，血型鉴定的准确性是临床安全输血最关键的一步。在血型鉴定方面，微柱凝胶技术为一种新兴技术［6］，其准确、简便且易于标准化。本研究中采用的全自动血型及配血分析系统中的玻璃微珠间隙，只允许单个红细胞通过，从而达到分离红细胞的目的。抗原抗体反应后阳性反应凝集的红细胞位于玻璃微珠上端，阴性反应的游离红细胞通过离心作用沉降至反应柱底部，最后通过成像系统拍照判定反应强度［7，8］。

本研究采用强生Autouve对9 350例份血标本进行ABO、RhD血型检测，一次性判断准确率分别为99.71%、99.74%，与试管法的100%差异无统计学意义。对仪器法检测呈正反不符的37例份标本进一步鉴定发现，24例是少数新生儿、老年及某些恶性疾病患者因抗原、抗体较弱，细胞凝集现象减弱所致。此类标本仅用试管法肉眼不易观察到，需用显微镜观察。对于这种情况，仪器法相对于试管法更易于检出弱抗原、弱抗体［9，10］。而且，使用仪器法更有利于ABO血型亚型的发现。许多亚型红细胞在与标准血清反应呈现混合视野，即在一个反应体系中同时出现凝集细胞群和游离细胞，而在传统试管中难以实现。本研究中已有4例采用仪器法检测的样本经进一步确证为A3亚型、A2BX、CisAB型。说明仪器法较常规试管法更为灵敏，能捕捉到十分微弱的抗原抗体反应，便于对可疑标本进一步确证定型或采用基因分子水平检测以提高ABO血型系统亚型和变异型的检出。

强生Antove系统的优点还在于其能将所有样本、血型卡、试剂、稀释液和测试细胞均用条码识别进入主数据库，实现了血型鉴定过程中加样、离心、结果判读、保存与查询全过程的自动化、标准化［11，12］，在节省人力的同时最大限度地减少了工作人员之间的操作差异和人为失误对检测结果的影响。同时实验结果通过系统照相后进行储存，通过系统软件可进行快速检索和查询，实现了数据管理的标准化和信息化，为实验责任倒查和医疗举证提供了技术支持。值得注意的是，我们在工作实践中也发现该系统存在一些不足之处:每日仪器维护初始化时间过长;系统对标本抗凝要求较高，若血液中有纤维蛋白和细胞凝块、离心不彻底、红细胞配制浓度太高或太低时，易引起卡式仪器的假阳性或假阴性。

综上所述，全自动血型及配血分析系统是一种安全灵敏的血型鉴定技术，易于检出弱抗原、弱抗体及发现ABO亚型，最大限度消除了人为因素对检测结果的影响，使检测结果便于保存、查询，适于批量操作，对提高血型鉴定检验质量发挥了明显的促进作用，有望在临床上得到进一步推广应用。

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