胆管癌相关分子及其标记物研究进展

张大辉， 程树杰

(河北大学附属医院， 河北 保定 071000)

胆管癌是胆管上皮细胞的恶性肿瘤，近年来其发病率有上升趋势［1］。目前对于胆管癌的病因研究显示，溃疡性结肠炎、肝胆管结石、胆总管囊肿及慢性肝炎病毒感染等因素为胆管癌的高危因素，但具体病原仍然不明［2］。随着分子生物学的发展以及对胆管癌的发生、发展及浸润转移机制进行深入的研究，人们对胆管癌分子及其标记物的认识也有了很大进步。本文分别以蛋白类标记物、癌基因及抑癌基因、其他对近年来胆管癌分子及其标记物研究进展进行综述。

1 蛋白类标志物

1.1 Tenascin蛋白:Tenascin蛋白为细胞外基质中一种高分子糖蛋白，在成熟组织中Tenascin蛋白不表达或仅有少量表达［3］。众多研究显示，Tenascin蛋白在多种恶性肿瘤组织中呈现出强表达，并且Tenascin蛋白的表达水平与恶性肿瘤的病理分级以及血管生成有密切的关系［4］。王林等［5］采用免疫组化方法检测胆管癌组织和正常胆管组织的Tenascin蛋白含量，结果显示，Tenascin蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为81.8%，但是在正常胆管组织中Tenascin蛋白的阳性表达率为0。Tenascin蛋白在病理分级I级、II级和III级的阳性率分别为71.4%、82.4%和88.9%，但是差异无统计学意义(P＞0.05)。因此，Tenascin蛋白可以作为胆管癌的肿瘤标志应用于临床诊断，但Tenascin蛋白的表达与胆管癌的病理分级无关。

1.2 Fasin蛋白:Fascin蛋白为一种细胞骨架蛋白，其与细胞的运动、粘附以及细胞间的信息交流中发挥重要的作用［6］。Okada等［7］研究了肝外胆管癌组织中Fascin蛋白的表达，发现Fascin蛋白在正常胆管上皮的阳性表达率为0，而在胆管癌组织中表达上调，Fascin蛋白表达上调与性别、临床分期、静脉浸润有关，胆管癌组织边缘Fascin蛋白的表达高于其它区域，提示Fascin蛋白的高表达可能与肝外胆管癌高侵袭性有关。Iguchi等［8］对肝内胆管癌组织中Fascin蛋白的表达进行研究，发现Fascin蛋白在良性病变的胆管组织不表达或低表达，但是在肝内胆管癌组织中的阳性表达率高达66.7%，差异具有统计学意义(P＜0.01)，Fascin蛋白的高表达与胆管癌的恶性程度及病人的预后存在相关性。Wonll等［9］应用免疫组化对胆管癌患者胆管癌组织中的Fascin蛋白进行测量，结果阳性表达率为56.0%，其中28.4%呈强表达，27.6%呈弱表达，Fascin蛋白的表达与组织学分级、TNM分期、淋巴浸润、静脉浸润、邻近器官浸润有关;而与性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、区域淋巴结转移无关，并发现Fascin蛋白在肝内与肝外胆管癌的表达对患者预后有所不同，Fascin蛋白在肝内胆管癌和肝外胆管过度表达对患者不同。

1.3 Survivin蛋白:Survivin蛋白属凋亡抑制蛋白家族新成员，是具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双功能蛋白。Survivin蛋白在正常组织中不表达或低表达，而在多数恶性肿瘤组织中广泛表达。冯超等［10］应用免疫组织化学技术检测Survivin蛋白在胆管癌、胆管癌旁组织和正常胆管组织中的表达以探讨Survivin蛋白在胆管癌中的表达情况及其与胆管癌发生发展的关系。结果显示，胆管癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率为69.4%，而在癌旁胆管组织和正常胆管组织中未检测到Survivin蛋白的表达，差异具有统计学意义(P＜0.01)。但是相关性分析显示，Survivin蛋白的表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、分化及是否转移无关。刘三光等［11］研究发现，胆管癌中Survivin蛋白的阳性表达率为79.2%，而在癌旁胆管组织Survivin蛋白的阳性表达率6.7%，差异具有统计学意义(P＜0.01)，Survivin蛋白表达与患者的年龄、性别、肿瘤的原发部位、大体形态、组织学类型、分化程度、浸润深度、以及是否伴淋巴结转移等均无明显相关性。以上研究均显示出Survivin蛋白可以作为胆管癌的肿瘤标志应用于临床诊断。

2 癌基因及抑癌基因

2.1 Ras癌基因:Ras癌基因为目前广泛研究的癌基因之一，在多种恶性肿瘤中均显示出Ras基因的点突变。Ras癌基因家族包括 H－ras、K－ras和 N－ras，分别位于人类的第11、12和1号染色体。Ras癌基因编码21 000蛋白质，与G蛋白有关，并且具有GTP酶的活性。Ras基因产物可受自发性或化学性致癌的单点突变而激活，导致产生表型的恶性表现。Matsubara等［12］用PCR－SSCP法研究胰胆管异常汇合患者癌性上皮细胞及非癌性胆管上皮细胞中K－ras基因点突变，发现癌性上皮细胞K－ras基因点突变率为80%，而增生上皮和化生上皮突变率分别为58%及48%，差异具有统计学意义(P＜0.01)。Ras癌基因突变部分为第12密码子，Lee等［13］的研究结果与上述结果一致，提示K－ras基因点突变在胆管癌形成过程中起重要作用。

2.2 C－myc癌基因:C－myc癌基因编码的产物为P62核内蛋白，可导致细胞无限分裂，使细胞向恶性转化。在胆管癌组织中P62的阳性表达率较高。Voravud N等［14］报道胆管癌组织中P62的阳性表达率为94%，并且染色强度和阳性表达率与细胞分化程度密切相关。李灼日等［15］研究结果表明，胆管癌组织中C－myc阳性率为87.23%，其中高分化腺癌的阳性表达率为100%，低分化腺癌的阳性表达率为60.00%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。此外，正常胆管组织、胆管扩张症胆管组织、癌旁胆管组织的C－myc阳性表达率与胆管癌组织比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。C－myc的阳性表达率与胆管癌的组织学分级有关，组织学分级I级胆管癌组织中C－myc的阳性表达率为100%，显著高于II级、III级胆管癌组织，组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。无转移胆管癌组C－myc阳性表达率显著高于有转移组的阳性率高，组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。提示C－myc的表达与胆管癌细胞分化程度、组织学分级和有无肿瘤转移等生物学特性相关。

2.3 p53抑癌基因:p53抑癌基因是迄今为止人类肿瘤研究中研究最为广泛的基因，几乎涉及到50%的恶性肿瘤［16］。野生型p53基因为抗癌基因，而突变型p53基因在机体内发挥着癌基因的作用。正常人体中野生型p53基因代谢很不稳定并且细胞含量低，而突变型p53基因稳定并且可以在细胞核内积聚，因此可以检测到突变型p53基因。突变型p53基因的检测可以很好地反映 p53 基因突变情况［17］。Itoi等［18］别用PCR－SSCP和免疫组化的方法检测胆道癌症中p53的变异。结果显示，突变型p53基因在胆管癌和胆囊癌分别为33.3% 和42.9%，60%的标本可以检测到p53基因的过度表达，但是在良性胆道疾病均未检测到突变型p53基因。Kang等［19］用PCR法检测到肝内胆管癌组织中p53基因的突变率为30%，用免疫生化法检测到肝内胆管癌组织中p53基因过度表达为25%。因此，p53基因在肝内胆管癌的发生、发展和生长方式等方面起到重要作用。

2.4 p27基因:p27基因为重要的抑癌基因，其表达水平降低导致其对CDK或cyclin/CDK复合物活性的抑制效应，使CDK的活化效应递增，驱动细胞周期的运行，从而使细胞增殖与分裂过快、过多乃至肿瘤形成［20］。Michelangelo［21］对手术切除的肝内胆管癌、肝门部胆管癌以及周围肝内胆管癌的p27基因进行检测，发现肝门部胆管癌的p27基因的阳性表达率为59.1%，而外周性肝内胆管癌p27基因的阳性表达率则为88%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。李铸等［22］采用免疫组化方法测定肝门部胆管癌以及正常胆管组织中p27基因的表达情况以探讨p27基因在肝门部胆管癌的表达及临床意义。p27基因在肝门部胆管癌的阳性表达率为77.2%，以低表达为主。p27基因的表达与肿瘤的分化、淋巴转移及神经浸润显著相关(P＜0.05)。p27基因高、低及阴性表达组的平均生存时间有显著差异(P＜0.05)。因此，胆管癌中p27的表达是反映肝门部胆管癌生物学行为，在肝内胆管癌的发生、发展和生长方式等方面起到重要作用。

3 其它

3.1 MMP－9:基质金属蛋白酶(MMP)是一组能够降解细胞外基质蛋白的内肽酶的总称，与炎症、组织纤维化、新血管形成和肿瘤的侵袭转移等存在相关性。MMP－9与多种恶性肿瘤有着密切的联系，在恶性肿瘤的浸润、转移中发挥着重要作用［23］。汪正广等［24］对胆管癌组织进行MMP－9检测，胆管癌组织中MMP－9的表达显著高于正常胆管组织以及癌旁组织。相关性分析显示，MMP－9表达与性别、年龄、肿瘤部位及大小无关，但是与肿瘤的病理分级、TNM分期、浸润程度和远处转移及手术方式有关，MMP－9表达阳性的患者一年生存率明显低于阴性者。Jo等［25］用酶联免疫吸附法测量胆管癌组织和正常组织中MMP－9，结果显示胆管癌组织中的MMP－9在总蛋白中的浓度显著高于正常组织。杨定忠等［26］应用免疫组织化学法检测胆管癌中MMP－9的表达。结果显示，胆管癌组织中MMP－9的阳性表达率为76.4%，正常胆管组织为16.7%，差异具有统计学意义(P＜0.01)。在胆管癌组织中，在癌巢边缘或管腔近旁的阳性表达强度要高于其他区域。并且随胆管癌的病理学分级和临床分期增高，MMP－9表达有增高趋势，此外MMP－9阳性表达的胆管癌易发生淋巴结转移，影响患者预后。因此，MMP－9在胆管癌的发生、发展和生长方式等方面起到重要作用。

3.2 COX－2:环氧化酶－2(COX－2)是炎症过程中催化合成前列腺素的关键诱导酶之一，通过参与多种肿瘤的细胞增殖、抗凋亡和血管生成、降低细胞间的粘连度，与肿瘤的发生、发展和转移密切相关［27］。多项研究表明，COX－2在人的多种恶性肿瘤中呈现强表达，提示COX－2在恶性肿瘤的发生和发展中起着重要的作用［28］。郜朝霞等［29］采用免疫组化法检测胆管癌中COX－2的表达，研究发现，COX－2在胆管癌组织中的表达阳性率为81.40%，而在胆管结石组织中未见表达。在胆管癌高、中分化组的COX－2阳性表达率显著高于低分化组，转移阳性组COX－2阳性表达率也显著高于转移阴性组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。上述研究说明COX－2的高表达在胆管癌的发生、发展中也扮演重要作用。

3.3 VEGF:血管内皮生长因子(VEGF)是迄今发现的最重要的促血管生长因子，在多种肿瘤组织中均有较高水平的表达，与肿瘤的生长、转移关系密切。郜朝霞等［29］采用免疫组化法检测胆管癌组织的VEGF。研究结果显示，胆管癌组织中VEGF的阳性表达率为76.74%，胆管结石组为0，差异具有统计学意义(P＜0.05)。VEGF蛋白在胆管癌中高表达提示胆管癌形成过程中伴随VEGF的高分泌，VEGF与胆管癌的发生及生长有关。张萌等采用免疫组化法检测胆管癌组织中VEGF与VEGF－C蛋白的表达，以探讨VEGF与VEGF－C蛋白在胆管癌的表达及其与临床病理特征的关系。胆管癌VEGF和VEGF－C蛋白的表达率分别为65.3%和69.4%，并且VEGF和VEGF－C蛋白的高表达与胆管癌淋巴结转移及分化程度有关。因此，VEGF和VEGF－C蛋白的表达与胆管癌侵袭转移有关。

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