正交法优选乳香最佳烘制工艺的研究

胡素连，蒋孟良，陈卫红，蒋晓煌

（1.湖南省宁乡县人民医院药剂科，湖南 长沙 410600； 2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；

3.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005）

乳香来源于橄榄科植物卡氏乳香树Boswelliacarterii Birdw.或鲍达乳香树Boswelliabhaw－dajianaBirdw.及野乳香树 Bneglecta M.Moore皮部渗出的或经刀割渗出的树脂[1]。乳香具有活血止痛、消肿生肌的功效，常用于跌打损伤、瘀滞疼痛、疮疡痈肿、瘀血阻滞所致的心腹疼痛、瘕积聚、风湿痹痛等病证[2]。乳香去油炮制方法各地不同，有锅炒去油法、瓦片加热去油法、灯心炒去油法等。为了使乳香的炮制方法统一、更科学，炮制工艺条件参数更加量化、可控，炮制程度（火候）更加客观、便于推广，在得知烘制法炮制乳香效果更好[3]的基础上，以刺激性成分和兔眼充血、水肿为评价指标，对其烘制法的工艺条件进行优化研究，现报道如下。

1 仪器与试药

AR1140型电子分析天平（感量0.1 mg，奥豪斯国际贸易＜上海＞有限公司）；D2F－6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；SHB－Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城工贸有限公司）；SP－6890型气相色谱仪（鲁南瑞虹化工仪器有限公司）；E－2型迅达旋流燃气灶（湖南迅达集团有限公司）；FW 100型高速高能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；DK－S22型恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）。乳香购于长沙市药材公司，经湖南省药品检验所方石林主任药师鉴定为橄榄科植物卡氏乳香树Boswellia carterii Birdw.皮部渗出的树脂。生理盐水（自制）、苦味酸、硫化钠等均为化学纯。

2 方法与结果

2.1 因素水平的确定

为了优选烘制法的最佳工艺条件，拟用L9（34）正交表进行试验。根据预试验结果与文献资料[4]，影响乳香炮制的因素主要有温度（因素A）、时间（因素B）、放置厚度（因素C）以及药材大小（直径，因素D）。因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.2 不同烘制法对挥发性成分的影响

2.2.1 气相色谱条件

色谱柱：PEG－20M（兰州物理化学研究所），弹性石英毛细管柱（30m×0.32mm，0.5μm）；柱前压：0.5MPa；柱温：120℃（1min），以4℃/min速率升温至160℃，保持1min，以4℃/min速率升温至200℃；流速：160 mL/min；气化室温：220℃；分流比：100∶1；进样量：1μL。

2.2.2 影响试验

称取乳香50 g，按表2各试验号的组合条件置真空干燥箱中进行烘制，并用真空泵将烘制过程中挥发出来的挥发油抽入到装有10mL乙醇的抽滤瓶中，每隔15min抽1次，每次2min，待烘制结束，将抽滤瓶中的溶液倾入10mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀，按气相色谱条件进行测定。结果见表2。

表2 L9（34）正交试验表及试验结果（n=9）

2.3 刺激性试验[5]

2.3.1 药物制备

将正交试验9个试验号所得的烘制法乳香及生品，粉碎过筛，称取2.5 g，置锥形瓶中，加10mL蒸馏水，放置电热恒温水浴锅内60℃保温2h，再超声30min，最后置离心管内，用离心沉淀器离心10 min（2 000 r/min），使乳香混悬液分层，取上清液，配制成含10％乳香、0.9％氯化钠的溶液，用于刺激性试验。

2.3.2 刺激性试验

取健康（动物的两眼正常者）大白兔27只，体重1.5～2.5 kg，雌雄兼取，随机分为9组，每组3只。用兔箱固定，轻轻拉开下眼睑，使其离开眼球后，将生理盐水和乳香炮制品各2滴分别滴入家兔的左、右眼结膜囊中，两眼滴入量应相等，然后轻合眼睑1～2 s，以防止供试品流出，影响试验结果。观察给药后30，60，90，120min时结膜有无充血、水肿、畏光和流泪等刺激反应，将各组4个时间段产生与未产生充血、水肿的动物只数合并。结果见表2。

表3 全概率评分值及极差分析

2.4 数据处理

将表2数据按照文献方法进行数据处理[6]，4个指标均是越大越好，在不考虑权重的情况下，全概率积分等于4个全概率评分之和，结果见表3。将表3数据进行方差分析，结果见表4。直观分析表明，其最佳组合为A2B3C1D1，各因素影响顺序为B＞A＞D＞C。方差分析表明，A，B两因素具有显著性差异（P＜0.05），C，D两因素无显著性差异。可见，乳香最佳烘制工艺为120℃烘制2h，放置1 cm厚，饮片直径0.5 cm。因此工艺在正交表中可以找到，即试验号6，其全概率积分值最大，说明优化工艺可行，也不需要做验证试验。

表4 方差分析表

3 讨论

生乳香具有刺激性，炮制后刺激性降低，主要是因为挥发性成分具有刺激性[7]，故对乳香不同烘制工艺条件收集的挥发性成分，用气相色谱法进行分离，以峰的个数和总峰面积为评价指标，基本上可以反映其刺激性成分的多少及性质。另外，为了比较不同炮制方法对乳香刺激性降低的程度，采用家兔眼结膜刺激性为评价指标进行刺激性试验。该试验为研究药物刺激性的常规试验，基本上可以反映其刺激性的强弱。

由于时间与条件有限，加之乳香成分复杂，未用乳香单体成分进行主要峰的标定，不能确定各峰属于哪种成分，但由于本试验只初步分析不同炮制方法所挥发出来的挥发油种类（峰个数）多少，故以上情况不影响试验结果。关于气相色谱图中各峰是何种成分，是否为刺激性成分以及刺激性到底有多大，有待今后参照文献[8－10]用气相色谱－质谱联用分析，或对不同峰进行分离，再进行刺激性试验，以找出刺激性成分及刺激性大小。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：附录23.

[2]崔树德.中药大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1988：440.

[3]蒋世银，叶桂存.中药乳香炮制工艺改进[J].时珍国医国药，2006，17（6）：1 006.

[4]沈道修，任晓英，胡月红，等.乳香炮制方法的研究[J].中成药研究，1983（7）：12－13.

[5]苗明三.试验动物和动物试验技术[M].北京：中国中医药出版社，1997：133－134.

[6]李 静，周孟辉，蒋晓煌，等.多指标评分正交试验法优选砂烫骨碎补的炮制工艺[J].湖南中医药大学学报，2009，29（4）：34－36.

[7]钱百炎.乳香炮制方法及成分分析的探讨[J].中成药研究，1982，4（12）：15－16.

[8]夏华玲，赵新杰.乳香挥发油化学成分的GC－MS分析[J].中草药，2003，34（2）：119－121.

[9]王 勇，潘国梁，陈 彦，等.4种方法提取乳香化学成分及其GC－MS研究[J].中国药学杂志，2005，40（14）：1 054－1 056.

[10]刘洪玲.乳香挥发油化学成分的气相色谱－质谱分析[J].时珍国医国药，2009，20（2）：370－371.