药物流产后孕妇血浆中米非司酮浓度的监测Δ

车 敏，林 敏，黄以兰，刘琼珊，王 梅（福建省人口和计划生育科学技术研究所，福州 350011）

米非司酮（Mifepristone）配伍米索前列醇终止早孕已为临床广泛应用[1]，同时也是计划生育工作中一项简单、有效的措施。由于其方法成功率高，具简便、隐私性的特点，也常被一些育龄妇女用来作为私自终止妊娠的手段。采用高效液相色谱（HPLC）法检测米非司酮的血药浓度[2，3]，以及考察米非司酮的人体药动学均有文献报道[4]，但尚未见妊娠妇女药物流产后体内米非司酮血药浓度监测的相关文献报道。本试验建立的以正己烷与二氯甲烷萃取血浆中米非司酮的HPLC法，具有操作简单、灵敏度高、实用性强等特点，适合基层计划生育部门监测妊娠流产后孕妇血浆中米非司酮的浓度情况。

1 材料

1.1 仪器

1100 Series高效液相色谱仪，配置G1314A可变波长检测器（美国Agilent公司）；XW-80A涡旋混合仪（上海沪西厂）；J2-21高速冷冻离心机（美国Beckman公司）；Sartorius电子天平（德国Sartorius公司）；KL512型氮吹仪（北京康林科技有限责任公司）。

1.2 试药

米非司酮（Mifepristone，规格:每片25 mg，批号:43101104）、米索前列醇（Misoprostol，规格:每片0.2 mg，批号:43100204）均为北京紫竹药业股份有限公司提供；米非司酮标准品（浙江仙居制药厂，纯度:99.8%）。甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷为色谱纯，试验用水为去离子水。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS（250 mm× 4.6 mm，5µm）；预柱:Hypersil ODS（1.0 mm×4 mm，5 µm）；流动相:甲醇-乙睛-水（42∶28∶30）；流速:1.0 mL·min－1；紫外检测波长:302 nm。

2.2 标准贮备液的配置

准确称取米非司酮标准品适量，以甲醇溶解定容制成50 mg·L－1的米非司酮标准贮备液。临用时以甲醇稀释成所需的系列标准溶液。

2.3 血浆样品的处理

冷冻血浆在室温下融化，涡旋混匀。取1.0 mL至离心管中，加入正己烷和二氯甲烷（7∶4）的混合液5 mL，振荡，离心。吸取上清液，下层重复处理，合并上清液，用氮气流吹干，残渣加100 μL甲醇溶解，50 μL进样。

2.4 受试者的选择及试验方案

本所计划生育门诊进行药物流产的健康孕妇28例，年龄22～35岁，无肝、肾、血液方面疾病，无应用甾体避孕药及宫内节育器既史往，月经规则，停经＜49 d，经妊娠试验、妇科检查和B超确诊为早孕者，经阴道超声证实为正常妊娠。签署知情同意书，自愿接受试验且同意接受观察者，应便于随访。受试者口服米非司酮，早8点服2片，晚8点服1片，连服2 d，第3天早晨8点顿服米索前列醇3片，服药前后禁食1 h。在服用米索前列醇6 h后，未见完整胎囊排出者行人工刮宫。所有受试者均在服药前和胎囊排出后24、48、72 h时抽取静脉血5 mL于肝素抗凝管中，静置离心后分离血浆，冷冻保存待分析。

3 结果

3.1 专属性试验

本试验条件下，空白血浆、米非司酮标准品血浆以及药物流产后血浆样品经HPLC法分析，色谱图见图1。由图1可见，米非司酮峰形良好，保留时间为9.901 min，血浆中的杂质及米非司酮代谢产物均对其无干扰。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

3.2 线性关系及检测限考察

精密吸取米非司酮标准贮备液适量，加入空白血浆1.0 mL，配制成浓度为5 000、2 000、1 000、500、100、50、20 μg·L－1的系列标准血浆溶液。按“2.3”项下方法处理并测定，记录色谱。以样品的色谱峰面积为定量依据，以待测样品峰面积（A）为纵坐标，样品浓度（c）为横坐标，采用加权最小二乘法进行线性回归计算（权重系数为1/c2），求得线性回归方程为A＝6.067 3+0.558 2c（r＝0.998 3）。结果表明，米非司酮血药浓度在20～5 000 μg·L－1范围内线性关系良好。血浆中米非司酮的最低检测限为10.0 μg·L－1（S/N＝3）。

3.3 回收率试验

配制含米非司酮低、中、高质量浓度分别为50、500、2 000 μg·L－1的标准血浆溶液，按“2.3”项下方法操作及分析，将峰面积值代入标准曲线计算实测浓度，以实测量与加入量之比求算回收率，结果分别为（98.23±2.77）%、（102.25±3.46）%和（95.69±3.10）%。

3.4 精密度试验

配制含米非司酮低、中、高质量浓度分别为50、500、2 000 μg·L－1的标准血浆溶液，按“2.3”项下方法操作，每种浓度各做5份样品。将峰面积值代入标准曲线计算浓度，并求得日内和日间RSD，结果见表1。

表1 精密度及回收率试验结果（n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（n＝5）

3.5 受试者血药浓度监测

受试者在胎囊排出后24、48、72 h时，所监测到的血浆中米非司酮浓度分别为（606.68±123.61）、（243.86±50.16）、（92.70±34.21）μg·L－1，药-时曲线见图2。服用米非司酮药物流产前受试孕妇血浆中均未监测到米非司酮。

图2 受试者胎囊排除后血浆中米非司酮药-时曲线Fig 2 Plasma concentration-time curves of mifepristone in subject after discharging pregnant sac

4 讨论

关于米非司酮的血药浓度测定，国内文献报道较多；血浆药物萃取方法大都采用乙醚萃取、水层低温冻结的方法[4]，操作具有一定的危险性和局限性。本试验选择正己烷和二氯甲烷的混合液萃取血浆中的米非司酮，方法简便、迅速，定量分析线性关系良好，并能获得较高的提取率。试验过程选择色谱级的正己烷和二氯甲烷，可使得样品峰干净无干扰。本研究建立的血浆中测定米非司酮的检测方法，可监测到正常早孕妇女使用药物流产，在胎囊排出72 h后血浆中米非司酮的量（（92.70±34.21）μg·L－1）。该方法专属性好，适合基层计划生育部门对非法使用米非司酮药物流产后血浆中药物浓度的监测。

在给予相同剂量米非司酮的前提下，代谢情况不同的早孕妇女可能会表现出不同的抗早孕效果。可能是由于血中的α-酸性糖蛋白水平的个体差异所引起的。因为米非司酮进入体内后大部分与α-酸性糖蛋白结合，在体内重新分布或存储于组织中，或释放游离的米非司酮。只有游离的米非司酮才通过细胞膜发挥生物效应，因而显示有明显的个体间药效学和血药浓度差异[5]。

临床上终止妊娠首选米非司酮配伍米索前列醇法。由于受到传统的重男轻女思想的影响以及性别鉴定技术的不断提高，非法进行胎儿性别鉴定、滥用米非司酮类药物及人为造成点滴出血流产现象、胎死腹中等情况要求流产、引产的事件时有发生，也给计划生育执法工作造成困难。本研究拟建立一种较简便、安全的血样提取方法和HPLC条件，对基层计划生育工作中一些疑似使用米非司酮成分的孕产妇要求终止妊娠或生产死胎的情况，对其血样进行色谱判断、定性分析，提供科学的诊断依据。

[1]宋淑华.米非司酮在妇产科的应用[J].天津中医学院学报，2005，24（3）:175.

[2]高 晨，赵志刚，王 越，等.晚期妊娠引产产妇及其新生儿血浆中的米非司酮浓度测定[J].药物分析杂志，2000，20（20）:119.

[3]Stith C，Hussian MD.Determination of mifepristone levels in wild canid serum using liquid chromatography[J].J Chromatography B，2003，794（1）:9.

[4]韦 阳，张美云，王恪申，等.中国健康女性口服低剂量米非司酮片剂的人体药代动力学[J].中国临床药理学杂志，2003，19（6）:431.

[5]邵庆翔，桑国卫，姜丽霞，等.抗孕激素米非司酮及其代谢产物的临床药代动力学[J].中国临床药理学杂志，1993，9（3）:149.