景天三七对多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

2012-02-28张彦霞续雪红乔海霞张玉妥

河北北方学院学报（自然科学版） 2012年4期

张彦霞，续雪红，乔海霞，张玉妥

（1．河北北方学院微生物研究所，河北张家口075000；2．天津市河东区向阳楼街社区卫生服务中心，天津300000）

景天三七又名土三七，为景天科植物景天三七（Sedum aizoon L．）的全草。是一种药食两用的植物，味甘、微酸、性平、无毒，有凉血止血、散瘀、消炎、安神、镇痛等作用［1－2］。土三七的营养及药用价值较为广泛，应用于衄血、咳血、吐血、尿血、子宫出血及外伤和内脏出血、血小板减少性紫癜、白血病等症［1］。该药含有没食子酸（gallic acid）和谷甾醇等成分。据文献报道［2］没食子酸具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤作用。

随着广谱抗菌药物的大量应用，铜绿假单胞菌的感染和耐药性日趋严重，特别是多重耐药铜绿假单胞菌在临床上引起的感染，治疗非常棘手且死亡率高，因此迫切需要研制一种能够抑制多重耐药铜绿假单胞菌的新型制剂。前期的实验及有关报道均表明景天三七对铜绿假单胞菌有抑制作用且抑菌作用较强［3］，进一步研究了景天三七醇提物和水提物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌作用，为开发中草药抗菌制剂提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 一般资料

1．1．1 仪器 721分光光度计；培养箱；无菌超净工作台；高压蒸汽灭菌器；分析天平。

1．1．2 试药景天三七：由河北北方学院中医系鉴定。

1．1．3 菌种铜绿假单胞菌标准菌株购自北京生物制品检定所；临床菌株来自河北北方学院第一附属医院微生物科。

1．1．4 培养基

1．1．4．1 液体培养基：Mueller－Hinton （MH）肉汤。

1．1．4．2 固体培养基：Mueller－Hinton （MH）琼脂。

1．2 方法

1．2．1 景天三七水煎剂及醇提物的制备参照陈奇的方法［4］进行，景天三七水煎剂及醇提物均浓缩成含生药1 g·m L－1的药液，灭菌后备用。

1．2．2 菌液的制备

1．2．2．1 0．5麦氏比浊管配制操作参考医学微生物学实验指导［5］。

1．2．2．2 菌液制备将实验所用20株菌的培养物（菌落）用无菌生理盐水制成菌液，浓度相当于0．5麦氏比浊，比浊液相当于5× （107～108CFU·m L－1）。

1．2．3 抑菌实验方法稀释法：取无菌小试管5支作为一组，第一管加无菌肉汤0．4 m L其余各管加肉汤0．5 m L，再依次加药液，第一管和第二管加药液0．5 m L，从第二管开始倍比稀释。然后第二至第五支试管各加肉汤0．4 m L，同样方法制备20组试管。每组试管土三七醇提物和水煎剂的最终稀释度依次为：0．5 g·m L－1、0．25 g·m L－1、0．125 g·m L－1、0．0625 g·m L－1、0．03125 g·m L－1。实验时将20株实验菌液分别加入20组含药液培养基的试管中，每管0．1 m L菌液，同时设培养基、药液和菌液对照管。所有试管放置温箱内37℃，培养24 h后观察结果，在对照管符合要求的情况下，将各实验管的培养物接种至相应培养基的琼脂平板上，确定是否有细菌生长。37℃，24 h观察结果，以琼脂平板上完全无细菌生长的药物最高稀释度为最低抑菌浓度（MIC）。