建湖地区仔猪黄、白痢病原菌的分离和药敏试验

陈广仁 刘金彪

1.江苏省建湖县上冈镇畜牧兽医站，江苏建湖224733；2.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009

仔猪黄、白痢是由致病性大肠杆菌（E T E C）引起的常见仔猪急性传染病，1～3周龄哺乳仔猪最易感，发病急、传播快、死亡率高，是困扰养猪生产的疑难病症。黄、白痢发病猪以腹泻为主要特征，粪便呈黄色、乳白色或灰白色浆状稀便，内含凝乳小片，有特殊腥臭味；临床表现为食欲下降，被毛粗乱，消瘦，眼球下陷，四肢无力；剖检病变为脱水严重，肠粘膜呈急性卡他性炎症变化，肠壁变薄、松弛，肠系膜淋巴结轻度肿胀、有弥漫性出血点，以十二指肠处最为严重。

仔猪发生黄痢时，常波及整窝仔猪，病死率高达90%以上；发生白痢时，整窝仔猪发病率可达30%～80%［1］。仔猪黄、白痢在一些规模化养猪场经常发生，严重威胁着养猪业的健康发展。

1 材料与方法

1.1 材 料

试验用试剂均购自上海国药集团化学试剂有限公司；生化培养基由扬州大学兽医学院动物传染病学实验室提供；庆大霉素、丁胺卡那、环丙沙星、多粘菌素B、氯霉素、强力霉素等14种药敏纸片，均购自杭州天和生物有限公司。

1.2 病料采集和处理

2011年8月下旬，笔者在建湖某猪场临诊时发现疑似仔猪黄、白痢的病例。从每窝中选择典型的发病仔猪，用棉拭子从腹泻仔猪的直肠内采集粪便，并采集病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结，记为同一个编号，所采集病料的编号依次为E 81、E 82、E 83、E 84和E 85；然后将棉拭子（需折去多余的棉棒）和其他病料分别放入装有保存液的不同塑料离心管内并盖紧，做好标记（主要包括日期和编号，应与登记表一致）后立即放入装有冰袋的泡沫箱内，备用。

1.3 培养基制备

麦康凯琼脂培养基的制备：取蛋白胨20.0g、乳糖10.0g、氯化钠5.0g、牛胆盐5.0g、中性红25.0 m g、琼脂粉20.0g，加蒸馏水至1000m L，调节p H值至7.2；L B液体培养基的制备：取胰蛋白胨1.0 g、酵母提取物0.5g、氯化钠1.0g，加蒸馏水至100 m L，调节p H值至7.2；L B固体培养基的制备：取胰蛋白胨1.0g、酵母提取物0.5g、氯化钠1.0g、琼脂粉1.5g，加蒸馏水至100m L，调节p H值至7.2；普通肉汤培养基的制备：取牛肉浸膏5.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、磷酸氢二钾0.5g，加蒸馏水至1000m L，调节p H值至7.2。

1.4 细菌分离

无菌取1.2采集的病料于麦康凯琼脂平板上分区划线，在37℃有氧条件下培养24h；然后挑取单菌落进行纯培养。

1.5 生化反应试验

取经分离纯化的菌株按常规方法［2］进行生化试定试验。

1.6 药敏试验

药敏试验按陆承平［3］主编的《兽医微生物学》的圆纸片扩散法操作。取经分离纯化的单菌落接种于5m L的普通肉汤内，37℃培养16～18h；用L B液体培养基调制菌悬液，使其达到0.5麦氏比浊管的浊度（在625n m波长处吸光度为0.09～0.10）；用灭菌棉拭子蘸取稀释后的菌液，均匀涂布在L B固体培养基平板上，静置5m i n；待平板表面水分吸收后，用眼科镊按无菌操作要求分别将庆大霉素、丁胺卡那、环丙沙星、多粘菌素B、氯霉素、强力霉素等14种药敏纸片贴至培养基表面，并用镊子尖轻压纸片使其与培养基贴牢，要求纸片间距离≥24mm、纸片与培养皿边缘距离≥15mm，且每种药物需贴2个纸片；37℃培养24h后观察结果，用游标卡尺量取抑菌圈直径，并计算其平均值。药敏试验判断标准，见表1。

表1 药敏试验判断标准

2 结果与分析

2.1 细菌分离结果

在麦康凯琼脂培养基上生长出大量中等大小、圆形、湿润、光滑的粉红色菌落，按常规方法［4］进行革兰氏染色，显微镜下观察可见散在排列、红色、两端钝圆、无荚膜的短杆状革兰氏阴性菌。

2.2 生化反应试验结果

分离株E 81、E 82、E 83、E 84和E 85的生化试验结果相同，如表2所示。

表2 分离菌株的生化试验结果

以上结果符合埃希氏大肠杆菌生化特性，可基本确定此次分离到的菌株均为大肠杆菌。

2.3 药敏试验结果

各分离株的药敏试验结果，如表3所示。

由表3可知，大肠杆菌分离株对丁胺卡那、头孢曲松和多粘菌素B高度敏感，对庆大霉素、呋喃妥因和链霉素有不同程度敏感，而对其余8种抗菌药物耐药。

表3 5株分离株对14种药物的敏感性 mm

3 讨 论

药敏试验结果表明，临床上分离到的5株大肠杆菌对环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、四环素、强力霉素、氨苄青霉素、磺胺甲基异恶唑和复方新诺明8种抗菌药物耐药，可见临床上大肠杆菌的耐药情况十分严重。而分离株表现出对头孢曲松、丁胺卡那和多粘菌素B高度敏感，说明此类药物可作为该发病猪场以及建湖地区的首选抗菌药物；其中多粘菌素B虽为常见药物，但在临床上使用频率不高，使得大肠杆菌对此类药物尚保持较好的敏感性。以上研究表明，大肠杆菌对药物的耐药性具有极其复杂的特征，因此在临床上为了减少耐药菌株的出现，应采用联合用药和轮换用药的方式，避免长期使用同种抗菌药物或小剂量用药，以免产生大量耐药菌株。

大肠秆菌是条件性致病菌，当环境条件改变或机体抵抗力降低时，很容易引起动物发病。大肠杆菌在自然界的普遍存在决定了本病难以根除，因此猪场在发生仔猪黄、白痢时，一定不要盲目加大药物的使用剂量或一次使用多种药物，而要根据本场仔猪发病特点以及药敏试验结果，选择适合本场的敏感药物。同时，要保持猪舍清洁卫生，合理使用疫苗和微生态制剂，并进行科学的饲养管理。

［1］ 蔡宝祥.家畜传染病学［M］.第3版.北京：中国农业出版社，2000.

［2］ 廖延雄.兽医微生物实验诊断手册［M］.北京：中国农业大学出版社，1995.

［3］ 陆承平.兽医微生物学［M］.第3版.北京：中国农业出版社，2001.

［4］ 武三孝.仔猪水肿病大肠杆菌的分离鉴定及复制的研究［J］.畜牧与兽医，1992（2）：59.