用HPLC法测定盐酸阿罗洛尔片的含量

苏玉怀，闻 俊，石 宽，裘戈彬，4，洪战英＊

［1.第二军医大学药学院药物分析学教研室，上海市药物（中药）代谢产物研究重点实验室，上海200433；2.解放军66051部队卫生队，保定072150；3.解放军95890部队卫生队，武汉434000；4.第二军医大学研究生管理大队，上海200433］

盐酸阿罗洛尔（arotinolol hydrochloride，商品名Almarl）是日本住友制药株式会社开发的新型α，β受体阻断剂。该药对β受体的阻断作用无选择性，对α1受体有微弱的阻断作用，对β与α受体的作用强度为8∶1，因此被划分为第4代β受体阻断剂。临床主要用于治疗原发性轻、中度高血压，对肾功能无不利影响，对心、脑、肾有保护作用，同时也可以用于治疗心绞痛和原发性震颤［1］。本研究建立了HPLC法用于测定盐酸阿罗洛尔片的含量，方法准确、简便、重复性好，适用于其含量测定。

1 仪器和试药

1.1 仪器 HPLC仪包括LC－10ATVP溶剂输送泵、SPD－10A紫外检测器、手动进样阀（日本岛津公司）；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息研究所）；HA－202M电子天平（日本A＆D公司）。

1.2 药品和试剂 盐酸阿罗洛尔对照品（含量100.3%，批号100203）和盐酸阿罗洛尔片（10mg／片，批号2010－A008、2010－1139C、2010－1143C）由日本住友制药（苏州）有限公司提供；甲醇、磷酸（色谱纯，美国Tedia公司）；氨水（分析纯，上海振兴化工厂）；浓盐酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；水为去离子水（由第二军医大学药学院自制）。

2 方法和结果

2.1 溶液的制备 （1）对照品溶液 精密称取盐酸阿罗洛尔对照品10.30mg置于10ml量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度，得对照品储备液。取适量对照品储备液，用甲醇∶0.3%氨水（45∶55，氨水用磷酸调节pH至6.0，作为流动相）稀释成浓度为41.20μg／ml的对照品溶液。（2）供试品溶液 取本品10片，置于500ml量瓶中。取浓盐酸适量，加水稀释至0.01mol／L，取50ml加入上述500ml量瓶中，振摇使片剂完全崩解后，加适量甲醇超声20min，使盐酸阿罗洛尔溶出，放冷后加甲醇稀释至刻度。精密量取溶出液2ml，置于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。（3）阴性对照溶液 制备不含盐酸阿罗洛尔的空白片剂，按供试品溶液制备方法操作，得到阴性对照溶液。

2.2 色谱条件和系统适用性实验 色谱柱：Ultimate C18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶0.3%氨水（45∶55，氨水用磷酸调节pH至6.0）；检测波长315nm；流速为1.0ml／min；柱温为室温；进样量20μl。在该色谱条件下取盐酸阿罗洛尔阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液进样测定，得到色谱图见图1。由图1可见，盐酸阿罗洛尔的保留时间约为5.6min，理论塔板数＞5 000，片剂中辅料对盐酸阿罗洛尔的含量测定无干扰。取41.20μg／ml的盐酸阿罗洛尔对照品溶液连续进样6次，记录峰面积，计算得到RSD为0.96%，表明该色谱条件的系统适用性良好。

2.3 标准曲线的制备 精密吸取2.1项下的对照品储备液适量，用流动相稀释得到系列浓度为10.30、20.60、41.20、61.80、82.40和103.0μg／ml的对照品溶液，各取20μl进样，测定峰面积。以盐酸阿罗洛尔的浓度（c）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标做线性回归，得到线性方程为：A＝1.39× 104c－5.28×104（r＝0.999 9），表明盐酸阿罗洛尔在10.30～103.0μg／ml范围内线性关系良好。

2.4 重复性实验 取批号为2010－A008的盐酸阿罗洛尔片，按2.1（2）项方法制备供试品溶液6份，进样，测定峰面积并计算含量，盐酸阿罗洛尔的平均含量为标示量的98.0%，RSD为1.1%（n＝6）。

图1 盐酸阿罗洛尔的HPLC谱图

2.5 稳定性实验 在供试品溶液配制后的8h内，每隔2h测定1次，记录盐酸阿罗洛尔峰面积，求得RSD＝1.4%（n＝5），表明供试品溶液在配制后8h内稳定。

2.6 加样回收率实验 取3个500ml量瓶，每个量瓶中分别加入5片盐酸阿罗洛尔片，以及对照品30.30、50.10和70.20mg，按照2.1（2）项方法制备成低、中、高浓度分别为31.72、39.64、47.68μg／ml的供试品溶液各3份，分别测定其峰面积，以外标法计算加样回收率。结果测得低、中、高浓度盐酸阿罗洛尔的平均加样回收率分别为（100.5±1.8）%、（99.2±2.1）%和（99.7±2.8）%（n＝3），表明该方法的准确度符合要求。

2.7 样品含量测定 取2.1项下浓度为41.20μg／ml的盐酸阿罗洛尔对照品溶液作为质控样品。取批号为2010－A008、2010－1139C和2010－1143C的盐酸阿罗洛尔片各10片，分别按照2.1（2）方法制备供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，进样测定，按外标法以峰面积计算含量。结果3批样品中盐酸阿罗洛尔的含量分别为标示量的98.4%、99.7%、98.7%，RSD分别为1.3%、0.9%、1.0%（n＝5）。

3 讨 论

3.1 色谱条件的选择 目前关于盐酸阿罗洛尔含量测定的HPLC法报道较少，文献［2］以甲醇∶磷酸铵缓冲液（pH值为6.5）70∶30作为流动相，选择254nm为检测波长，在40℃柱温下对盐酸阿罗洛尔进行分离测定。作者对盐酸阿罗洛尔对照品溶液做紫外光谱扫描，发现其在225、266和315nm处均有吸收峰，其中315nm处的吸光系数较大，因此本研究选择315nm作为检测波长，提高检测灵敏度，并且在室温下进行色谱分离，避免了长时间的高柱温对色谱柱的损害［2，3］。

作者在预实验中发现，流动相中甲醇和氨水的比例，以及氨水溶液的pH值对盐酸阿罗洛尔的峰形和保留时间影响较大。随着氨水溶液pH值增大，盐酸阿罗洛尔峰保留行为增强，且色谱峰发生拖尾。这可能是由于流动相碱性增大使得阿罗洛尔呈分子状态，增加了其在色谱柱上的保留性，同时碱性基团与未封尾的硅醇基作用造成了拖尾现象。为了得到对称峰形与适合的保留时间，最终确定氨水溶液pH值为6.0，选定流动相组成为甲醇∶0.3%氨水（用磷酸调pH为6.0）＝45∶55。

3.2 供试品溶液制备方法 盐酸阿罗洛尔为小剂量糖衣片剂，标示量＜25mg／片，片型小，且包衣与药芯片粘连在一起，不易除去。去糖衣容易造成糖衣的残留或药芯片残缺损失，影响测定准确性。因此本研究参考文献［2］的方法，直接将盐酸阿罗洛尔片用0.01mol／L盐酸溶液崩解后再行测定，不影响取样均匀性，并且由色谱图可见片剂中辅料对盐酸阿罗洛尔的含量测定无干扰。为了保证取样具有代表性，且测定结果真实、可靠，对标示量＜25mg／片的片剂，一般要求取样10片进行测定。本研究选择10片样品用于制备供试品溶液。

［1］ 吴 海，尹瑞兴.新型β受体阻滞剂——阿罗洛尔［J］.医学综述，2001，7（3）：182－183.

Wu Hai，Yin RuiXing.A newβadrenoceptor blocker－arotinolol［J］.Med Recap，2001，7（3）：182－183.In Chinese.

［2］ 廖洪娟.HPLC法测定盐酸阿罗洛尔片的含量［J］.海峡药学，2008，20（10）：61－63.

Liao HongJuan.Determination of hydrochloride acid arotinolol by HPLC［J］.Strait Pharm J，2008，20（10）：61－63.In Chinese with English abstract.

［3］ 胡 琴，常建元.盐酸阿罗洛尔含量测定方法研究［J］.中国药品标准，2006，7（2）：62－63.

Hu Qin，Chang JianYuan.Study of assay of arotinolol hydrochloride［J］.Drug Stand China，2006，7（2）：62－63.In Chinese with English abstract.