亚综合征抑郁外周血胰岛素样生长因子1受体基因表达研究☆

易正辉 李则挚 张晨 洪武 苑成梅 汪作为吴志国 卢卫红 禹顺英 方贻儒

亚综合征抑郁 （subsyndromal symptomatic depression，SSD）是一种亚临床状态，指患者同时有2个及2个以上的抑郁症状但少于5个，病程至少2周，却并不符合抑郁症（major de⁃pressive disorder，MDD） 及心境恶劣障碍 （dysthymic disorder，DD）的诊断标准［1］。目前尚缺乏有关SSD的病因遗传学研究，本课题组前期的全基因组外周血基因表达谱芯片分析显示，胰岛素样生长因子1受体 （insulin⁃like growth factor 1 receptor，IGF1R）基因在SSD中表达下降［2］。IGF1R是具有促进细胞增殖、分化等多种生物活性的生长因子受体，其与精神疾病的关系已引起研究者的关注［3］，但其与抑郁障碍的关系如何，目前尚无相关的报道。故本研究应用实时定量逆转录－聚合酶链反应法（RT⁃qPCR），进一步验证亚综合征抑郁症患者IGF1R基因外周血的差异表达情况。

1 对象与方法

1.1 研究对象 来自2007年12月至2009年4月期间在上海市心理咨询中心门诊就诊的亚综合征抑郁患者。纳入标准：①同时满足《诊断与统计手册》第4版修订版（Diagnostic and Statistical Manual， Fourth Edition， Text Revision，DSM⁃Ⅳ⁃TR）有关抑郁障碍诊断标准中的2条或2条以上但少于5条的抑郁症状，大部分或全部时间存在；②病程至少2周；③罹患者社会功能受损，但不符合轻性抑郁（minor depressive disorder，MinDD）、复发性短暂性抑郁（recurrent brief depression，RBD）和心境恶劣障碍（dysthmic disorder，DD）的诊断标准；④年龄18～60岁；⑤汉族；⑥未服用过任何抗抑郁药及抗精神病药物。排除标准：①DSM-Ⅳ其他精神疾病及抑郁症病史；②脑器质性疾病、较严重的心脑血管疾病及肝肾等重大疾病史；③妊娠期及产后1年。共入组47例，男10例，女37例；年龄 19 ～ 60 岁，平均（36.2 ± 5.8）岁；病程 0.5 ～ 9.0 个月，中位数 5.2个月；汉密尔顿抑郁量表 （Hamilton Depression Scale， HAMD17）评分（13.1 ± 1.7）分。

正常对照组来自我院及其他医院的职工及家属、研究生和进修医生。年龄18～60岁；汉族；HAMD17评分 ＜7分；排除既往及访谈时存在的各类精神疾病、脑器质性疾病、较严重的心脑血管疾病及肝肾功能异常等重大疾病史、物质滥用等及精神疾病家族史。共入组52名，男12名，女40名；年龄18～ 60 岁，平均（35.9 ± 7.9）岁。患者组和对照组之间性别与年龄的差异均无统计学意义（P＞0.05）。

该研究通过上海交通大学医学院附属精神卫生中心伦理委员会批准；所有受试者均已签署知情同意书。

1.2 临床资料评估 采用DSM-Ⅳ-TR轴Ⅰ障碍定式临床检查 患 者 版 （Structured Clinical Interview for DSM-IV-TR Axis I Disorders-Patient Edition，SCID-I／P）进行入组访谈，符合入组标准者采用HAMD17评定临床症状。量表评定者为2名高年资医生，一致性检验的Kappa值为0.87。

1.3 总RNA的提取及逆转录合成cDNA 清晨空腹抽取肘静脉血5 mL（抽血前1天忌食高油脂食物），2%的乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，应用总 RNA 提取试剂盒（Trizol Reagent）（Invitrogen Inc，Carlsbad，CA）2 h内提取外周血总 RNA， 使用 752紫外光栅分光光度计测定每个样本中总RNA的纯度。使用逆转录试剂盒（Omniscript Reverse Transcription Reagents）（Qiagen，Chatsworth CA）和随机引物（Promega CA）合成第 1链 cDNA，同时使用RNA酶抑制剂（TOYOBO，Japan）防止RNA降解。

1.4 IGF1R基因表达水平检测 使用TaqMan MGB探针法在384孔ABI Prism 7900序列检测系统 （Applied Biosystems，CA）上进行荧光实时定量PCR扩增，分析IGF1R基因表达水平。为控制不同样本间的基因表达水平的差异，使用管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶 （glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）（Applied Biosystems，CA，USA）作为内对照基因，来标化目的基因的表达水平 （以GAPDH作为内对照基因，计算IGF1R基因mRNA相对定量即2-ΔCT）。每个样本的IGF1R基因和内对照GAPDH基因均重复3次。每个荧光实时定量PCR扩 增 体 系 共 10 μL：TaqMan Universal PCR Mastermix 4.0 μL，TaqMan MGB 探针 ＋ 引物 0.4 μL，RNase-free H2O 5.35 μL， cDNA 模板 0.25 μL。 荧光实时定量 PCR 扩增条件：50℃ 2 min，95℃10 min；然后 95℃ 15 s，59℃ 1 min，共 50个循环。采用比较循环数（Cycle threshold，CT）的方法进行相对 定 量［4］，使 用 软 件 SDS version 2.2 软 件 （applied biosystems）进行数据处理。

1.5 统计学方法使用 SPSS 17.0进行统计分析。2组的IGF1R基因表达量经One-sample Kolmogorov-Smirnov Test检验符合正态分布，故采用独立样本t检验进行组间的比较。检验水准 α 为 0.05，双侧检验。

1.6结果SSD组IGF1R基因 mRNA相对表达水平为（0.21± 0.11），正常对照组（0.56 ± 0.37），两组相比差异有统计学意义（t＝ 39.54，P ＜ 0.01）。SSD 组 IGF1R 基因 mRNA 表达水平比正常对照组降低 17.63%。Pearson相关分析显示，SSD组IGF1R基因mRNA表达水平（2-ΔCT）与患者HAMD17评分的相关无统计学意义（r＝ －0.29，P ＞ 0.05）。

2 讨论

由于SSD可严重影响个体心理社会功能而受到人们的重视［5］，目前该综合征的病因仍不清楚，本研究在前期基因表达芯片的基础上进一步验证亚综合征抑郁症患者IGF1R基因外周血的差异表达情况。本研究发现SSD患者外周血IGF1R基因表达显著低于健康对照，提示IGF1R表达量的下降在SSD的病理生理机制中可能起到重要作用。

目前IGF1R与SSD有关的机制尚不清楚。IGF1R可影响神经损伤后的神经保护作用，神经再生，髓鞘、突触和树突生长等［3］，而抑郁障碍发生的机制可能与神经细胞的生存、生长、分化和凋亡调控功能的失调和突触可翅性的异常有关，目前已有研究发现SSD患者存在有另外一个调节神经生长的因子BDNF的低水平表达［2］，因此我们认为有调节神经生长作用的IGF1R也可能与SSD有关。

另外本研究结果显示IGF1R外周血的表达量与HAMD17评分没有相关性，提示其在外周血的表达量的多少并不能反映SSD的症状严重程度，可能与研究样本量相对偏少有关，也可能与HAMD17量表并不适合评定SSD人群有关。

［1］Forsell Y.A three-year follow-up of major depression， dysthymia， minor depression and subsyndromal depression： result from a population-based study［J］.Depress Anxiety， 2007，24（1）：62－65.

［2］李则挚，禹顺英，洪武，等.外周血白细胞脑源性神经营养因子基因表达与亚综合征抑郁的关系［J］.中华精神科杂志，2011，44（1）：3－6.

［3］Gunnell D， Lewis S， Wilkinson J， et al.IGF1， growth pathway polymorphisms and schizophrenia： a pooling study［J］.Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet， 2007，144B （1）：117－120.

［4］李则挚，张晨，洪武，等.亚综合征抑郁B细胞淋巴瘤白血病－2基因表达研究［J］.中国神经精神疾病杂志，2011，37（5）：307－309.

［5］Judd LL， Rapaport MH， Paulus MP， et al.Subsyndromal symptomatic depression： a new mood disorder?［J］.J Clin Psychiatry， 1994，55（Suppl）：18－28.