醒神健脑颗粒对血管性痴呆大鼠的作用研究

郭闫葵 贾 敏 张晓燕 高 琛

（山东省济南市中医医院，山东 济南 250012）

随着年龄的增加，血管性痴呆的患病率逐年增长，国内调查显示：60岁以上老人的血管性痴呆的患病率为32.4/10万，给个人和社会带来巨大的负担。笔者以中医药理论为基础，结合多年临床经验，认为血管性痴呆的病位在脑，肾虚为本，痰浊瘀血蕴积，化热生风，酿生浊毒为本病发病过程中的基本环节。因此，本研究提出了补肾泻浊法作为治疗的基本法则，观察醒神健脑颗粒对血管性痴呆的防治作用。

1 材料与方法

1.1 动物 Wistar大鼠由山东中医药大学动物中心提供，动物合格证：鲁动字200500201。

1.2 药物 醒神健脑颗粒由济南市中医医院提供，每克相当于含生药2.1 g，使用前用生理盐水适当稀释。实验动物所用醒神健脑颗粒按高、低剂量分别配成 20%、10%（4、2 g/kg）药液，分别相当于临床人用剂量的10、5倍，于4℃储藏备用。实验用阳性对照药石杉碱甲，河南太龙药业股份有限公司生产，产品批号20090205，50 mg/片。实验动物用药剂量为15.0 mg/kg，相当于临床人用剂量的5倍。

1.3 试剂及仪器 UV2100紫外、可见光分光光度计，上海尤尼卡公司。LDZ4-0.8医用低速离心机，北京医用离心机厂。FA1104型电子分析天平，上海天平仪器厂。WKY型移液器，上海荣泰生化工程有限公司。XZC－5A小鼠跳台仪，山东省医学科学院设备站。实验用超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）药盒，南京建成公司提供。盐酸肾上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司0708051。戊巴比妥钠，上海化学试剂公司进口分装。氨基乙酸，湖南洞庭制药厂，990526.伊文思兰，Fluka进口。

1.4 模型制备 健康大鼠50只，随机均匀分为5组。分别是空白对照组和模型对照组 （灌胃生理盐水）、醒神健脑高剂量组（灌胃醒神健脑液4 g/kg）、醒神健脑低剂量组（灌胃醒神健脑液2 g/kg）、石杉碱甲组（灌胃石杉碱甲15.0 mg/kg）。每日1次，连续5 d。末次给药后1 h进行实验。除空白对照组外，其余各组称体质量后，腹腔注射戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉，仰卧固定，解剖颈部；分离左颈总动脉，穿线结扎近心端，远心端插入头皮针并固定。通过头皮针缓慢注入氨基乙酸肾上腺素混合液（每毫升含氨基乙酸75 mg，肾上腺素37.5 mg）0.2 mL，以诱发脑血管内多发性脑血栓形成（空白对照组不注射）。4min后注入1.5%伊文思兰0.2mL。8 min后处死动物，取左侧大脑半球，称质量。

1.5 标本采集与检测 （1）抗血栓实验：大鼠取适量脑组织用丙酮匀浆，匀浆室温下静置2 h，3000 r/min离心10 min，上清液于分光光度计620 nm测OD值（该值高低代表脑内血栓形成的多少）。（2）生化指标：测定多发性脑栓塞模型大鼠脑组织SOD、MDA含量。（3）组织形态学观测:将处死大鼠部分脑组织常规固定，石蜡包埋，HE染色，进行病理学光镜检查。

1.6 统计学处理 应用SPSS11.0统计软件。计量资料以（±s）表示，比较组间差异。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 醒神健脑颗粒抗血栓作用 见表1。结果显示两种剂量的醒神健脑颗粒及石杉碱甲均可显著减少脑内血栓形成，明显减少伊文思兰在脑内的储留量（P＜0.05），大剂量的醒神健脑颗粒作用更加突出。

表1 各组大鼠在体脑血栓比较（±s）

表1 各组大鼠在体脑血栓比较（±s）

与模型对照组比较，*P＜0.05。下同。

组 别空白对照组n 10光密度值0.0131±0.0032模型对照组 10 0.4380±0.0651醒神健脑高剂量组 10 0.1724±0.0354醒神健脑低剂量组 10 0.1198±0.0291石杉碱甲组 10 0.1390±0.0117

2.2 醒神健脑颗粒神经生化学指标的影响 见表2。醒神健脑高、低剂量组SOD含量均高于模型对照组（P＜0.05），醒神液高剂量组MDA含量高于醒神液低剂量组和石杉碱甲组 （P＜0.05）。

2.3 组织形态学观察 左侧海马区组织形态光镜检查结果示，空白对照组：海马组织结构正常，无充血、水肿现象。锥体细胞分层整齐排列。细胞形态正常，边界清晰；核仁、核膜清晰可见。细胞间质均匀，核周体与基质间未见明显间隙。模型对照组：海马组织细胞水肿明显，细胞带排列紊乱，细胞间隙明显增宽。大部分锥体细胞呈缺血改变，表现为胞体肿胀变形，细胞浆呈空泡状，胞核固缩，核仁、核膜模糊；细胞间质水肿明显。部分神经元坏死、破碎或消失。醒神健脑高剂量组：海马组织无明显水肿、充血；多数神经元结构较完整，形态相对正常；细胞及间质水肿程度轻；少量神经元变性坏死。醒神健脑低剂量组：海马组织无明显充血、水肿；锥体细胞层数有所减少，细胞间隙稍大，层次结构不清；但细胞带排列比较规整，细胞形态略不规则，多呈轻度缺血改变。少量神经元水肿、变性，细胞核固缩或消失。石杉碱甲组：海马组织轻度充血、水肿；可基本保持锥体细胞，但细胞形态欠规则，多部分细胞呈轻度缺血改变；细胞轻度固缩，核仁、核膜结构尚清晰；少量神经元变性坏死。见图1。

表2 各组大鼠脑内SOD、MDA含量比较（±s）

表2 各组大鼠脑内SOD、MDA含量比较（±s）

与醒神健脑高剂量组比较，△P＜0.05。

组 别空白对照组n 10 SOD（U/mL） MDA（mmol/mL）3.0210±0.9912 10.013±1.128模型对照组 10醒神健脑高剂量组 10 2.0098±0.0671 14.560±1.310 3.8841±0.1029* 9.301±0.731*醒神健脑低剂量组 103.3270±0.0563* 9.105±0.873*△石杉碱甲组 102.9983±0.0975* 9.016±0.904*△

图1 各组大鼠脑海马区组织细胞形态（HE染色，×400）

3 讨 论

大脑是氧需求量很高的组织器官，缺血再灌注后产生大量的自由基，可发挥强氧化作用，它可以与生物大分子，尤其是膜上的不饱和脂肪酸反应，形成脂质过氧化物，破坏生物膜系统［1］，对神经细胞有明显的毒性作用。SOD为机体直接清除自由基防止氧化损伤的重要酶类，其主要功能是将氧的单价还原产物O2－歧化成水，从而阻断脂质过氧化连锁反应，抑制脂褐素形成，保护细胞免受毒害作用［2］。研究表明，衰老动物体内有大量脂质过氧化产物，并伴有SOD的降低。脂质过氧化物的生成和沉积可以引起一系列的衰老症状，因此脂质过氧化物的含量是评价衰老的主要指标之一。MDA是脂质过氧化反应的最终产物，故MDA水平间接反映了组织中自由基含量及脂质过氧化程度。研究发现，脑缺血后脑组织中MDA及含水量明显增加，而抗氧化酶活性明显降低，意味着脑缺血后过多产生的自由基导致了缺血性脑损伤［3］。在中枢神经系统中，海马属边缘系统，是与学习记忆和情绪、行为功能密切相关的重要脑区，是对脑缺血最敏感的区域之一［4］。血管性痴呆智能衰退，与脑缺血造成海马损伤密切相关。研究发现，即使短暂的脑缺血也可造成海马CAI区锥体细胞延迟性神经元死亡［5］。

醒神健脑颗粒由何首乌、胆南星、女贞子、远志、赤芍、丹参、地龙等组成，具有补肾益精、活血化痰、开窍醒神之功效。本实验结果显示：一定剂量的醒神健脑颗粒可减少大鼠在体脑血栓形成；升高SOD活性，降低组织内MDA水平，体现其抗氧化、清除自由基的作用；同时对缺血缺氧状态下脑组织细胞、神经元呈现明显保护作用。

［1］龚秀云，吴晓光，高维娟，等.益肾降浊汤对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织抗氧化酶活力的干预效应［J］.中国临床康复，2006，10（19）：41-43.

［2］戴恩来，马鸿斌，欧秀梅，等.通络益智散对拟血管性痴呆大鼠AchE，MSA 和 SOD 的影响［J］.甘肃中医，2006，19（5）:38-40.

［3］王松林，王桂敏，杨霄鹏.首乌延寿丹对大鼠局灶性脑缺血的保护作用［J］.中国实用神经疾病杂志，2007，10（1）：33-34.

［4］赵卫国，吕素君.中医药治疗血管性痴呆作用机制的实验研究探讨［J］.实用中医内科杂志，2005，19（6）：504-506.

［5］赵建新，田元祥，李国明，等.脑缺血再灌注拟血管性痴呆小鼠皮层及海马细胞病理形态学动态观察［J］.中风与神经疾病杂志，2000，17（4）:200.