高效液相色谱法测定白芍总苷中芍药苷含量

纪 佳

郑州人民医院药剂科，河南郑州 450053

为更好的在实践中对白芍中的芍药苷含量进行测定，本研究利用高效液相色谱法对白芍总苷胶囊中的芍药苷的具体含量进行检测，并同时对高效液相色谱法对白芍总苷中芍药苷测定的精密度和重复性以及稳定性方面进行考察，分析可行性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 实验仪器 高效液相色谱仪系统主要包括：脱气机（G1379），四 原 泵（G1311A）、进 样 器（G1313A）、柱 温 箱（G1316A）、色谱工作站（Echrom 98），分析天平（92SM），超声仪（5150A）。

1.1.2 实验室试药 白芍总苷原料药（浙江立华110736）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所091102）；水（双蒸水）；乙腈（色谱纯）；磷酸（分析纯）；其他试剂（全部为分析纯）。

1.2 实验方法

1.2.1 对照品溶液制备方法 精密称取芍药苷对照品22.2 mg，置于10 m L容量瓶中，然后加入适量的甲醇溶液将其进行溶解，再继续加甲醇将其稀释至刻度线，摇匀后就制成芍药苷对照品实验的储备液。再进行精密移取芍药苷对照品的储备液1 mL，放置到10 mL量瓶中，再加甲醇溶液稀释至刻度线，即得芍药苷的对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液制备方法 精密称取白芍总苷样品20 mg，置于10 mL容量瓶中，加适量甲醇超声溶解，放至室温后用甲醇定容至刻度，摇匀后就制成白芍总皂苷供试品的储备液，再进行精密移取白芍总皂苷供试品的储备液1 mL放置到5 mL容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后使用0.45 μm滤膜进行过滤，即得供试品溶液。

1.2.3 色谱条件设定[1]色谱柱（SB—C18250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相（乙腈—0.015%磷酸）；流速（1.0 mL/min）；柱温（30℃）；梯度洗脱程序为：8%乙腈0 min—12%乙腈5 min—20%乙腈20 min—20%乙腈25 min—45%乙腈35 min—45%乙腈40 min。

1.2.4 线性关系的考察 分别精密吸取芍药苷的对照品溶液0.04、0.2、0.8、1.0、1.5、1.8 m L 各自放置在 2 m L 量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后依次进样5 μL，记录色谱图，以其色谱的峰面积做为纵坐标（Y），以芍药苷对照品溶液的进样质量浓度做为横坐标（X），进行线性回归[2]。

1.2.5 精密度的考察 精密吸取芍药苷对照品溶液5μL，在“色谱条件设定”下，重复进样6次，记录所测量色谱的峰面积。1.2.6 稳定性的考察 分别精密吸取一批白芍总苷供试品溶液 5 μL，分别在 0、1、2、4、6、12、24 h 时进样测定，记录所测得的色谱峰面积[3]。

1.2.7 重复性的考察 分别称取同一批次白芍总苷样品6份，按照“供试品溶液制备方法”项下的方法制备6份白芍总苷供试品溶液，按“色谱条件设定”下分别进样5 μL进行测量，记录峰面积。

1.2.8 加样回收率的考察 称取白芍总苷样品5份各10 mg，分别精密加入一定量的芍药苷，制备供试品溶液，取各溶液5 μL进样，在“色谱条件设定”项下分别测定芍药苷峰面积，记录色谱图，计算回收率。

1.2.9 样品测定 称取白芍总苷20 mg 3份，按“供试品溶液制备方法” 项下方法进行制备，分别进样测定芍药苷的峰面积，按照所求的的标准曲线计算样品中所含芍药苷的质量分数，取3次计算的平均值。

2 结果

2.1 线性关系

得出芍药苷的回归方程为：Y＝6.523 2X-0.821 69 （r=0.999 9），线性范围是4.43~198.90μg/mL。

2.2 精密度

得出芍药苷峰面积的相对标准偏差RSD为1.41%。实验结果表明，使用高效色相色谱法对白芍苷的含量进行检测具有良好的精密度。

2.3 稳定性

得出芍药苷的峰面积相对标准偏差RSD是1.36%，结果显示在白芍供试品溶液制备24 h内进行芍药苷的含量测定，其实验结果均比较稳定。

2.4 重复性

得出6次芍药苷的质量分数的相对标准偏差RSD是1.72%。实验结果说明使用高效液相色谱法对白芍总苷中芍药苷的含量进行检测重复性良好。

2.5 回收率

得出芍药苷的平均回收率是102.3%，相对标准偏差RSD是0.78%。实验结果说明使用高效液相色谱法对白芍总苷中芍药苷的含量进行检测加样回收率良好。

2.6 芍药苷的含量

白芍总苷样品中芍药苷的平均质量分数为368.12 mg/g，相对标准偏差RSD是1.72%。

3 讨论

白芍总苷为从白芍的饮片中提取出的总苷，按照白芍的干燥品进行计算，质量合格的白芍其芍药苷的含量应少于40.0%[4]。对白芍进行生化提取后，从白芍干燥根中可提取芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷、芍药花苷、苯甲酰芍药苷等诸多具有一定生理功效的苷类混合物，这些苷类统称为白芍总苷。而芍药苷是白芍最为重要的一种苷类成分，其在白芍总苷中的含量约在 90% 左右。本研究进行高效液相色谱法对白芍总苷中的芍药苷含量进行测定，所使用的稀释溶剂为甲醇，实验证明纯品的甲醇作为溶剂，所制得的溶液比较澄清，可有效免于过滤，同时实验中采取梯度洗脱的方式，明显的缩短了进行芍药苷含量测定的分析时间。综上所述，本研究建立的应用高效液相色谱法对白芍总苷中芍药苷的含量进行检测，其检测方法简单、方便、准确性好，同时实验稳定性和重复性也比较好，在对白芍总苷中芍药苷的含量测定上，具有良好的应用价值。

[1] 张家富，孟楣，邢安之.HPLC法测定白芍不同饮片中芍药苷的含量[J].安徽医药，2005，9（8）：588-589.

[2] 王巧，刘荣霞，毕开顺，等.HPLC法测定白芍总苷胶囊中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷[J].中草药，2005，36（11）：1630-1632.

[3] 郑军献，胡轶娟，魏克民，等.白芍提取物中芍药苷及总皂苷的含量测定[J].中国中医药科技，2011，18（4）：326-327.

[4] 饶毅，夏川川，周海滨，等.高效液相色谱法测定白芍总苷的不确定度分析[J].中国实验方剂学杂志，2011，（19）：89-93.