抗棕榈腐烂病菌的杀菌剂和植物浸提物筛选

佘德松，冯福娟，陈志生

(丽水职业技术学院，浙江丽水 323000)

宛氏拟青霉Paecilomyces varioti Bainier属半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，拟青霉属，是由李文彪［1］首次报道的引起棕榈树 Trachycarpus fortunei腐烂病的一种真菌。为寻找防治由宛氏拟青霉引起的棕榈科园林植物腐烂病的有效药剂，探寻无污染、低毒、低残留的植物性杀菌剂，开展了本次药剂试验和抑菌植物物质的筛选。

1 材料与方法

1.1 材料 供试病原菌从采自浙江平阳金桂园林工程有限公司苗圃地的加拿利海枣Phoenix canariensis心腐病的受害心叶分离纯化获得。

供试杀菌剂有25%咪鲜胺水乳剂(EW)，2 000，2 500，3 000倍液，扬州市苏灵农药化工有限公司;50%多菌灵可湿性粉剂(WP)，500，800，1 000倍液，江苏东进农药化工有限公司;80%代森锰锌WP，800，1 000，1 200 倍液，西安近代农药科技股份有限公司;12.5%腈菌唑乳油(EC)，4 000，5 000，6 000倍液，镇江农药厂有限公司;20%嘧霉胺 WP，600，800，1 000倍液，连云港市金囤农化有限公司。

供试植物有构树Broussonetia papyrifera、云南黄馨 Jasminum mesnyi、雪松 Cedrus deodara、杜鹃Rhododendron simsli、马尾松 Pinus massoniana、玉兰Magnolia denudate、火炬松 Pinus taeda、南天竹Nandina domestica、八角金盘Fatsia japonica、夹竹桃Nerium oleander、洒金叶珊瑚 Aucuba japonica var.variegata、侧柏 Platycladus orientalis、小檗 Berberis thunbergii的根，香樟 Cinnamomum camphora、火炬松、香椿 Toona sinensis、柏木 Cupressus funebris、银杏Ginkgo biloba的树皮，无刺枸骨Ilex Corunta var fortunei、香樟的果实(采自丽水职业技术学院校园)，白花蒿Artemisia lactiflora的全草、草决明Catsia tora的果实、异叶茴芹Pimpinella div^ersifolia的全草及根、千里光Senecio scandens的地上部分、苦参Sophora flavescens的根、白花前胡 Peucedanum praeruptorum的根、何首乌Polygonum multiflorum的藤茎和根、大血藤Sargentodoxa cuneata的藤茎、元胡 Corydalis turtschaninovii的块茎、半夏Rhizoma pinelliae的根等(药材购买于丽水老百姓大药房)。

1.2 杀菌剂抑菌试验 采用滤纸片法［2］。将显微镜高倍镜下每个视野含宛氏拟青霉分生孢子30～40个的孢子悬浮液1 mL倒入10 mL的PDA培养基，立即摇匀，制成平板。再将直径1 cm的滤纸片在配好的药液中浸泡1 min取出，放入平板培养基上，每皿5片。将处理好的培养皿倒置于28℃霉菌箱中培养48 h。测量抑菌圈直径的大小，以抑菌圈2个垂直直径的平均值作为抑菌圈大小的指标。

悬滴法［3］:将宛氏拟青霉菌制成无菌水及各种药剂浓度的孢子悬浮液，以显微镜高倍镜下观察每个视野有30～40个孢子为度。在凹玻片的凹陷处周围涂上凡士林，在盖玻片上加一滴孢子悬浮液，将盖玻片翻转盖在凹玻片的凹陷处。每种处理重复5次。将处理好的凹玻片放在28℃霉菌培养箱中培养48 h，统计孢子萌发情况。

1.3 抗宛氏拟青霉植物浸提物的筛选

1.3.1 植物浸提物的制备 用无水乙醇与水2种液体进行浸提。将材料洗净，果实捣碎，植物根、皮用整枝剪剪成片状或小段。将处理好的每种材料分为2份，分别置于锥形瓶内，一份材料加入水，一份加入无水乙醇。水提的先将锥形瓶放入100℃水浴2 h，再放置过夜，第2天将植物材料滤出，剩下的浸提液用水浴加热至浸膏状。用无水乙醇提取的只需静置过夜，在第2天滤出植物材料后用水浴加热至浸膏状［4］。

1.3.2 抑菌试验 将显微镜高倍镜下每个视野含宛氏拟青霉分生孢子30～40个的孢子悬浮液1 mL均匀展布于平板培养基上，用接种针钩取浸膏状的浸提物5点(呈梅花状)接入培养基，放入28℃培养箱内倒置培养。每种浸提物设置5个培养皿，用无菌水作对照。3 d后观察，测量抑菌圈的大小。

1.3.3 南天竹根浸提物抑菌作用测定 将宛氏拟青霉菌落置于含有南天竹根浸提物的培养基上，观察病菌生长情况。将不能在培养基上生长的菌块移接到无浸提液的正常培养基上，继续观察病菌生长情况。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂抑菌试验的结果 用滤纸片法测定药剂对宛氏拟青霉的菌丝抑制结果见表1。

从表1看出:5种药剂中对宛氏拟青霉的菌丝生长都有较好的抑制效果。12.5%腈菌唑EC效果最好，EC50为0.1819 mg/L;其次为25%咪鲜胺EW，EC50为0.9281 mg/L;第3为20%嘧霉胺WP，EC50为2.6230 mg/L;第4为50%多菌灵 WP，EC50为4.0569 mg/L，最差为80%代森锰锌WP，EC50为6.6600 mg/L。

用悬滴法测定5种农药对孢子萌发的抑制结果见表1。

从表1也可以看出，这5种药剂对宛氏拟青霉孢子的萌发都有一定的抑制效果。抑制孢子能力由强到弱依次为12.5%腈菌唑EC、25%咪鲜胺EW、50%多菌灵WP、20%嘧霉胺WP、80%代森锰锌WP，其 EC50依次为 0.540 6，0.910 1，1.354 2，3.193 1，5.950 2 mg/L。

2.2 抗宛氏拟青霉植物浸提物筛选结果 抑菌试验表明:构树、云南黄馨、雪松、杜鹃、马尾松、玉兰、火炬松、八角金盘、夹竹桃、洒金叶珊瑚、侧柏的根，香樟、火炬松、香椿、柏木、银杏的树皮，香樟、无刺枸骨的果实，白花蒿、百路通、千里光、前胡、叶交藤、红藤、元胡、何首乌、半夏的浸提物的抑菌圈直径与对照组的无菌水抑菌圈的大小没有明显区别，均为0，说明这些植物材料的醇提物和水提物均对宛氏拟青霉没有抑制作用。南天竹、小檗根的醇提物和水提物、苦参的醇提物、决明子的水提物对宛氏拟青霉具有较明显的抑菌作用，抑菌圈直径分别为1.93和1.53，1.63 和 1.77，1.02，1.90 cm。

表1 5种杀菌剂对拟青霉孢子萌发的毒力测定结果

2.3 南天竹根浸提物的抑菌作用 接种于加有南天竹根浸提物的培养基上的宛氏拟青霉菌落一直到第9天仍未见扩大，而对照3 d后整个培养基长满菌落。

把在南天竹根浸提物培养基上不能正常生长的菌落转接到正常的培养基上后，仍能正常生长，这表明南天竹根浸提物能有效抑制宛氏拟青霉的正常生长，但不能杀死。

3 小结与讨论

5种杀菌剂抑制宛氏拟青霉菌落生长和孢子萌发的试验均表明:12.5%腈菌唑EC、25%咪鲜胺EW、20%嘧霉胺WP、50%多菌灵WP、80%代森锰锌WP均有明显的抑制作用。抑制菌丝生长和抑制孢子萌发的EC50最低的是12.5%腈菌唑EC，分别为0.181 9，0.540 6 mg/L，最高的是80%代森锰锌WP，分别为6.660 0，5.950 2 mg/L。因此，生产上5种杀菌剂都可以作为防治由宛氏拟青霉引起的棕榈科植物腐烂病的防治药剂。

在所试验的31种植物及中药材中只有苦参的醇提物、小檗根及南天竹根的醇提和水提物、决明子的水提物对宛氏拟青霉有明显的抑制作用，其余的植物材料没有抑菌效果。南天竹根浸提物仅具有抑制作用，并不能杀死该菌。苦参、小檗根、南天竹根、决明子所含的抑菌有效成分有待进一步探明。

［1］ 李文彪，叶栎，周宁一．棕榈腐烂病的研究［J］．浙江林学院学报，1988，5(1):8 －15．

［2］ 丁爱云．植物保护学实验［M］．北京:高等教育出版社，2004:83．

［3］ 方中达．植病研究方法［M］．3版．北京:农业出版社，1998:152．

［4］ 苏学友，李疆，师光禄，等．核桃青皮提取物对6种植物病原真菌的抑菌活性研究［J］．北京农学院学报，2008，23(1):42－44．