小半夏加茯苓汤及其拆方中多糖的含量比较△

李 力 彭小冰 何前松 冯 泳 林 杉

(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)

小半夏加茯苓汤(Xiaobanxia－Fuling Decoction，XBFD)由半夏、生姜、茯苓三味药组成，主治停饮呕吐，心下痞闷，头眩心悸。现代研究［1］表明小半夏加茯苓汤含有许多化学成分［2］，如挥发油、生物碱、多糖等;同时研究［3、5］还表明原方中茯苓含有的主要成分多糖具有许多生物活性(如提高免疫功能、抗肿瘤、抗病毒作用等)。本文研究复方及其拆方中多糖含量的变化，采用苯酚－硫酸法测定多糖的含量，结果表明复方中的多糖含量是最高的，为研究小半夏加茯苓汤止呕物质基础提供一定的科学依据。

1 仪器及试剂

1.1 试剂：葡萄糖对照品(天津市科密欧化学试剂开发中心)，苯酚、浓硫酸均为分析纯。

1.2 仪器：紫外分光光度计;AB2655电子天平(十万分之一);DK－98－1型水浴锅;100g手摇式高速中药粉碎机(DTT－100);HS10260D型超声清洗机。

2 方法及结果

2.1 对照品溶液的配制：精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg加水溶解并定容至100ml量瓶中，即得0.1mg.mL－1的葡萄糖对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备：取半夏0.6g生姜0.5g茯苓0.3g于具塞锥形瓶中，加入1mol.L－1NaoH 溶液30ml，超声提取30min，过滤，取续滤液2.0ml于50ml容量瓶，加水定容至刻度，从中取出0.2mL分别加入5%苯酚溶液1.0ml、加入浓硫酸 5.0ml，摇匀，备用。

2.3 确定最大吸收波长：取对照品溶液0.2mL，按2.2供试品溶液的制备的方法操作，以相应的试剂同法制作空白;另取制备好的供试品溶液0.2mL，用紫外－可见分光光度仪对对照品溶液和供试品溶液在270－700nm范围内进行扫描，结果在488nm波长处具有最大的吸收(见图1)。

图1 各溶液紫外波长扫描图谱

2.4 标准工作曲线的绘制：精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 和 0.8ml置于 10ml试管中，分别加水至0.8ml再分别加入5%苯酚溶液1.0ml，等充分混合后，加入浓硫酸5.0ml，再充分混合，放置50min，另取1ml水，以上述同样的方法操作，作空白对照液。在488nm波长处分别测定吸收度。以葡萄糖的浓度C为横坐标、吸收度A为纵坐标，求得标准曲线为：y=0.9561x+0.005(R=0.9997)。结果表明葡萄糖在 2.8571 ～11.4286?g.mL－1呈良好线性关系。

2.5 精密度试验：取标准对照液0.2mL，照2.2测定方法制备标准品供试液和空白对照液，在488nm波长处重复测定5次。其结果RSD为0.379%，表明仪器的精密度较好。

2.6 稳定性试验：精密量取对照品溶液0.2mL，在波长488nm处进行测定，并在室温下每隔10min测1次，连续测6次。结果表明溶液在1h内稳定，其RSD为0.064%。

2.7 重现性试验：称取样品6份，按照2.2供试品溶液的制备方法制备供试液并进行测定，结果多糖平均含量为12.2154g·g－1，RSD=2.151% ，表明样品的重现性良好。

2.8 加样回收试验：分别取样品9份，每份约0.7 g，精密称定，分别加入一定量的对照品，按照2.2供试品溶液测定方法样品处理方法处理并测定，结果平均回收率分别为99.89%、97.01%、102.46%;RSD 值依次为 1.280%、1.424%、1.170%。

表1 样品含量测定结果

2.9 样品测定：称取复方、半夏+生姜、茯苓+生姜、茯苓+半夏、半夏、茯苓各3份，精密称定，按2.2供试品制备的方法分别制备样品供试液及空白对照液，在488nm处测定吸光度，按照回归方程计算多糖含量，结果见表1。

3 讨论

研究发现［6］多糖类成分主要的药理作用为增强免疫，本文研究小半夏加茯苓汤复方及其拆方中多糖含量的变化，结果表明复方的多糖含量最高，之后依次为茯苓+半夏、茯苓、茯苓+生姜、半夏、半夏+生姜。从结果上看复方的多糖含量位居之首，而文献报道中［7］得知复方止呕作用最好，那多糖是否为止呕作用的有效成分之一或辅助成分、多糖是否只能辅助机体提高自身抵抗力还是既增强了免疫又对呕吐有直接或间接抑制作用还有待药效物质基础的研究考察，同时也为药效止呕作用的物质基础研究提供了参考。

在含量测定中没有做生姜的含量测定，是因为在确定最大吸收波长实验中已证明生姜中几乎不含糖，不影响复方总糖量。多糖的含量测定还有用多糖水解为还原糖的碘量法测定，但由于碘量法的操作麻烦，且结果一般不够理想，所以用比色法测定小半夏加茯苓汤的多糖含量，反应稳定，测定结果较好。苯酚－硫酸比色法是测定多糖含量较为经典有效的方法之一，如果时间允许，只要重复操作，减少操作误差，在稳定性，回收率等方面都具有明显的优越性。

［1］冯泳，何前松，时京珍，等.小半夏加茯苓汤的研究概况［J］.江苏中医药，2008，40(2)：84 －85.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2010：110.

［3］李 俊，韩向晖，李仲洪，等.茯苓多糖的提取及含量测定［J］.中国现代应用药学杂志，2000，2(1)：49 －50.

［4］翟伟宇.茯苓多糖的药效学研究［J］.齐齐哈尔医学院报，2005，8(26)：935.

［5］黄才欢，李炎，王秀芬.茯苓多糖的提取及其结构表征［J］.广州食品工业科技，2007，5(17)：13 －15.

［6］张璐，刘强.茯苓多糖制备工艺及药理作用研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2006.4(12)：62 －63.

［7］冯 泳，刘文，李江.小半夏加茯苓汤及其拆方止吐药效的对比性研究［J］.贵阳中医学院学报，2001，3(1)：54.