UV法测定川楝子不同炮制品中总萜和东莨菪内酯的含量*

郑蓓蓓，窦志英

UV法测定川楝子不同炮制品中总萜和东莨菪内酯的含量*

郑蓓蓓，窦志英

[目的]考察不同炮制方法对川楝子中有效成分的影响，为以后炮制工艺的优化提供指导。[方法]以总萜和东莨菪内酯含量为指标，采用紫外分光光度法，分别来考察不同炮制方法对川楝子中有效成分的影响。[结果]各炮制品所含总萜含量与生品比较呈下降趋势；而东莨菪内酯含量与生品比较有上升的趋势。[结论]本实验以总萜和东莨菪内酯含量作为川楝子饮片品质优劣的评定，对川楝子生品及不同工艺炮制品进行比较，在其生产与确保用药安全方面都具有实际意义。

川楝子；总萜；东莨菪内酯

川楝子为楝科植物川楝（Melia toosendan Sieb．et Zucc．）的果实[1]，性味苦，寒，有小毒，归肝、小肠、膀胱经，具有舒肝、行气止痛、驱虫的作用。临床多用于胸胁、脘腹胀痛，疝痛，虫积腹痛等症[2]。川楝子生品有小毒，炮制以后能降低毒性，增强理气止痛作用[3]，所以常炮制后用药。川楝子的化学成分及其药理作用研究较少，有效成分不明。三萜类为川楝子的主要成分，东莨菪内酯为香豆素类化合物，是最新从川楝子中分离得到的活性成分。为了更有效的控制川楝子饮片质量，使炮制工艺稳定可控，本研究以总萜、东莨菪内酯含量考察了川楝子的炮制工艺，研究川楝子炮制前后有效成分含量的变化。

1 仪器与试药

SP-2102UV型UV可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；食用醋；盐；水为超纯水；乙腈为色谱纯；其余所有试剂为分析纯。川楝素对照品购于成都曼思特生物科技有限公司（批号58812-37-6）；东莨菪内酯对照品购于中国药品生物制品检定所（批号110768-200504）；川楝子购于天津市中药饮片厂。

2 方法与结果

2.1 川楝子炮制品的制备 炒焦川楝子：取净川楝子，置热锅中，用中火炒至表面焦黄色，断面色加深为度，取出，放凉。醋炙川楝子：取净川楝子加20%醋拌润，待醋液吸尽后，文火炒干。盐炙川楝子：取净川楝子与盐水拌匀，稍闷，待盐水吸尽后，文火炒干。每100 kg川楝子用食盐2 kg。

2.2 总萜含量测定

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取川楝素对照品1.05 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，配制成0.105 mg/mL的川楝素对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的配制 精密称取样品粉末（过40目筛）1 g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，回流提取30 min，滤过，重复提取3次，合并滤液蒸干，甲醇复溶至10 mL的容量瓶中。

2.2.3 测定波长的选择 取川楝素对照品溶液加显色剂后（同测定方法项下方法），进行光谱扫描，结果表明在535 nm处有最大吸收，多次重复，峰形一致，且阴性对照无干扰，故选择535 nm为样品的测定波长。

2.2.4 测定方法 香草醛-冰醋酸显色法：精密吸取供试品溶液1 mL，稀释100倍至磨口具塞试管中，水浴加热挥干溶剂，加5%香草醛冰醋酸溶液（需新鲜配置）0.2 mL，高氯酸0.8 mL，于60℃恒温水浴15 min，立即取出置冰水浴内冷却，加冰醋酸5.0 mL摇匀，以相应试剂为空白，紫外分光光度仪535 nm处测定吸光度，计算总萜含量。

2.2.5 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液 0.1、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL，分别置具塞试管中，按“供试品溶液的配制”下依法显色操作，以试剂为空白进行校正，在535 nm处测定吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，得Y赞＝2．673 1X＋0．006 5，r＝0．999 7（n＝6），线性范围在0.010 5～0.157 5 mg，呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度实验 精密吸取供试品溶液，连续测定6次，RSD为0.083%，该方法的精密度良好。

2.2.7 重现性实验 取同一批次样品6份，依法平行测定6次，结果RSD为2.741%。

2.2.8 稳定性实验 取同一显色后的样品，每隔0.5 h测定1次，共测6次，结果在3 h内，RSD为1.425%，其吸收度值基本稳定。

2.2.9 回收率实验 精密称取已知含量（3．42%）的川楝子粉末0.5 g，然后分别精密加入川楝素对照品溶液（0．105 mg/mL），按“供试品溶液的配制”项下方法制备供试品溶液，依法操作测定吸光度，计算，结果表明，本方法回收率良好。见表1。

表1 回收率测定结果

2.3 东莨菪内酯含量测定

2.3.1 对照品溶液的配制 精密称取东莨菪内酯对照品10.8 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，配制成0.216 mg/mL的东莨菪内酯对照品溶液。2.3.2 供试品溶液的配制 精密称取样品粉末（过40目筛）1 g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，在一定条件下回流提取30 min，滤过，重复提取3次，合并滤液蒸干，甲醇溶解定容至10 mL的容量瓶中，摇匀，即得。

2.3.3 测定波长的选择 将东莨菪内酯对照品溶液于紫外分光光度计上于400～800 nm波长范围内扫描，结果分别在208、227、343 nm处有最大吸收，考虑到溶剂末端吸收的干扰，故选择343 nm为测定波长。

2.3.4 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液 0.1、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mL，分别置于 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，随行空白，在343 nm处测定吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，得Y赞=11.754X+0.008 4，r=0.999 5（n＝6），线性范围在 0.002 16～0.032 4 mg 呈良好的线性的关系。

2.3.5 精密度实验 精密吸取供试品溶液，连续测定6次，RSD为0.412%，方法的精密度良好。

2.3.6 重现性实验 取同一批次样品6份，依法平行测定6次，结果RSD为2.971%。

2.3.7 稳定性实验 取同一样品，每隔0.5 h测定1次，共测6次结果在3 h内，RSD为3.709%，其吸收度值基本稳定。

2.3.8 回收率实验 精密称取已知含量（0．577%）的川楝子粉末0.5 g，然后分别精密加入东莨菪内酯对照品溶液（0．216 mg/mL），按“供试品溶液的配制”项下方法制备供试品溶液，依法操作测定吸光度，计算，见表2。结果表明，本方法回收率良好。

表2 回收率测定结果

2.3.9 样品的含量测定 取各炮制品供试溶液，测定其含量，见表3。

表3 炮制品中总萜和东莨菪内酯的含量比较（n＝3）%

3 讨论

3.1 指标成分的选择 川楝子中的主要活性成分为四环三萜类化合物，且含量最高。东莨菪内酯为香豆素类化合物，是最新从川楝子中分离得到的活性成分，药效研究表明，该成分具有抗炎止痛作用，该成分含量的降低，将直接导致药效的降低。因此，本实验选择总萜和东莨菪内酯为指标成分分别来考察不同炮制方法对川楝子中有效成分的影响。

3.2 实验条件的考察 实验中分别考察了超声提取、加热回流、索氏提取3种方法的提取效果，以回流提取法的总萜和东莨菪内酯提取效率最高。而回流提取法中，又分别比较了不同的溶剂(水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等)、不同的提取时间、溶剂的不同体积倍量、提取次数等的提取效果，实验表明以25倍量的甲醇为提取溶剂，提取30 min，提取3次可将川楝子中的总萜和东莨菪内酯基本提取完全。

3.3 总萜含量测定 结果可知，总萜的含量顺序为：生品＞炒品＞盐炙品＞醋炙品，各炮制品中总萜含量均低于生品。醋炙品与盐炙品的总萜含量相对较低，与其炮制过程中，长时间闷润需较长时间受热以干燥，从而导致成分损失有关。由东莨菪内酯含量测定结果可知，东莨菪内酯的含量顺序为：炒品＞盐炙品＞生品＞醋炙品，炒品中东莨菪内酯含量与生品比较有显著性升高的变化，盐炙品与生品比较含量有升高趋势，但没有显著的变化，而醋炙品中东莨菪内酯的含量最低，可能的原因是在高温下，醋酸导致内酯开环，含量下降。

本实验以总萜和东莨菪内酯含量作为川楝子饮片品质优劣的评定，以川楝素的最大限量作为川楝子饮片的毒性指标，对川楝子生品及不同工艺炮制品进行比较，在其生产与确保用药安全方面都具有实际意义。

[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京：北京医药科技出版社，2010.

[2] Huang RC,Okamura H,Iwagawa T,et al.The stuctures of Azedanachirs,Limonol Antifeedamts from Chinese Melia azedanachLinn[J].BullChemSocJpn,1994,67(9):2468-2472.

[3] 叶定江.中药炮制学[M]．上海：上海科技出版社，1996：95.

Content determination of total terpene and scopoletin in different processed product of Fructus toosendan by UV method

ZHENG Bei-bei,DOU Zhi-ying
（Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the effect of different processing methods on the effective components in Fructus toosendan and provide a guidance for subsequent processing technology optimization.[Methods]Taking total terpene and scopoletin contents as the indexes and using ultraviolet spectrophotometry the effect of different processing methods on the effective components in Fructus toosendan was studied respectively.[Results]Compared with raw materials,the content of total terpene in processed products was decreased;while the content of scopoletin had a rising trend.[Conclusion]In this experiment,taking total terpene and scopoletin contents as the indexes of quality assessment in Fructus toosendan their contents were compared between raw materials and different processed product of Fructus toosendan.It has some practical significances in its production and can ensure the safety of medication.

fructus toosendan;total terpene;scopoletin

R285

A

1673－9043（2012）03－0160-03

国家自然科学基金资助项目（81073053）。

300193 天津中医药大学

郑蓓蓓（1985-），女，硕士研究生，研究方向为中药药物代谢研究。

*通讯作者：窦志英。

2012-04-24）