气相色谱–质谱法测定当归粉、当归原药材中的邻苯二甲酸二丁酯

喻文娟，侯静文，朱邦尚

（上海交通大学分析测试中心，上海 200240）

气相色谱–质谱法测定当归粉、当归原药材中的邻苯二甲酸二丁酯

喻文娟，侯静文，朱邦尚

（上海交通大学分析测试中心，上海 200240）

建立了气相色谱-质谱法测定当归粉和当归原药材中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的方法。在国家标准的基础上，通过单因素试验，优化了提取方法和提取溶剂，确定了以正己烷为提取剂从水中液液萃取的方法。方法学试验结果表明，DBP浓度在0.01～1.00μg/m L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，线性相关系数r2=0.999 5，检出限为0.05 μg/g（全扫描），不同水平的加标回收率在90% ～ 100%之间，测定结果的相对标准偏差小于5%(n=3)。该方法适合当归粉和当归原药材中DBP的日常检测。

气相色谱法；质谱法；当归；邻苯二甲酸二丁酯

当归为伞形科植物，具有补血和血、调经止痛、润燥滑肠等功效，为妇科要药［1］。酞酸酯类化合物（PAEs）是一类塑料工业上应用广泛的增塑剂，大量研究证实，它对动物和人均有危害，能够致癌、致突变，具有生殖和发育毒性等［2,3］。2011年5月底发生的“塑化剂事件”，波及到我国大陆地区和美国、加拿大、菲律宾等国家，已成为国际食品安全事件。中国卫生部6 月1日紧急发布公告，将17 种PAEs类化合物列入黑名单，一时间有关食品中PAEs的检测技术研究成为食品安全监管部门和分析技术领域关注的热点［4］。然而，目前国家标准和行业标准中对于增塑剂的检测主要集中在食品［5］、塑料［6-9］、玩具［10，11］、纺织品［12，13］等领域，未有涉及到中药。

笔者对当归粉和当归原药材中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）进行了测定，优化了前处理条件，并进行了方法学试验。增塑剂的常用提取剂是正己烷、氯仿、乙酸乙酯，采用的方法则包括震荡提取、超声提取、微波萃取、索氏萃取、液液萃取等。通过单因素试验首先考察了溶剂浸提、超声提取和液液萃取3种方法的提取效率，再用选定方法考察了正己烷、氯仿、乙酸乙酯3种溶剂的效率；同时还进行了线性、灵敏度、回收率和精密度等方法学考察，建立了一种GC-MS法测定当归粉和当归原药材中DBP含量的快速、简便、可靠的方法，可用于日常的检测工作中。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

质谱仪：TurboMass 型，美国Perkin Elmer公司；

旋涡混合器：VORTEX-5型，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；

超声波清洗机：KQ-500DE型，昆山市超声仪器有限公司；

离心机：TDL80-2B型，上海安亭科学仪器厂；

超 纯 水 机：M illi-Q Advantage A10型，美 国M illipore公司；

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）标准品：编号C16171000，纯度不低于99%，上海安谱科学仪器有限公司；

正己烷、氯仿、乙酸乙酯：色谱纯；

步骤4：列车处理接收到信息，识别周围的列车，判定自身是否处于危险状态，如果不处于危险状态，则判定周期是否结束；如果周期未结束，则判定本周期中本车是否已经发送过信息；如果发送过信息，列车则将失败计数清零并继续接收信息，否则计算列车的优先级并判断是否为高优先级。如果列车是高优先级，则在下一个DZ到来时直接竞争资源。接着判定是否正处在限制竞争时期，如果不处于限制竞争时期或者限制时间已经结束，则开始下一个DZ的流程。如果周期结束，则进入下一个周期。

实验用水：超纯水；

当归原材料（剪碎至0.25 cm×0.25 cm以下）及当归粉均由某厂家提供，冰箱中于4℃冷藏保存。

1.2 溶液配制

DBP标准储备液：准确称取100.0mg DBP标准品，全部转入10m L容量瓶中，以正己烷定容至刻度，得DBP含量为10.00mg/m L的溶液；准确量取此溶液25.00μL，至预先加入少量正己烷的25 m L容量瓶中，以正己烷定容至刻度，得DBP含量为 10.00μg/m L 的标准储备液。

1.3 样品处理

（1）浸提

称取约0.5 g试样，置于10m L玻璃离心管中，加入4 m L正己烷，密闭浸提12 h后，上机分析（如溶液浑浊可先离心再进样）。

（2）超声提取

称取约0.5 g试样，置于10m L玻璃离心管中，加入4 m L正己烷，室温超声提取30m in，上机分析（如溶液浑浊可先离心再进样）。

（3）液液萃取

称取约0.5 g试样，置于10mL玻璃离心管中，加入4 mL水，室温超声提取30min。再加入2 mL正己烷，旋涡混合1 min进行液液萃取，以4 000r/min离心10min，使溶液分层，将上层己烷转移至另一玻璃离心管中，加入2 m L正己烷，按上述步骤重复提取一次。合并两次正己烷溶液，上机分析。

1.4 GC-MS 条件

色谱柱：DB-5MS柱（30m×0.25 mm，0.25 μm）；进样温度：280℃；进样量：1 μL；分流比：无分流；载气：氦气（99.999%）,流量为1 m L/m in；柱温：120℃保持4 m in，以15℃/m in升至210℃，以3℃/m in升至240℃，以20℃/m in升至300℃，保持7 m in；接口温度：260℃；离子源温度：200℃；电离方式：EI+，70eV；光电倍增管电压：450V；扫描方式：全扫描；质量范围：33～500u；定量离子：m/z 149；溶剂延迟：4 m in；NIST98谱库定性。

2 结果与讨论

2.1 前处理条件的优化

（1）3种提取方法的比较

分别称取9份相同质量的当归原药材和当归粉，用1.3中的3种方法进行处理（己烷作提取剂），每种方法平行3次，以DBP碎片离子149的平均峰面积作为考察依据，对这3种方法的提取效果进行比较。结果显示，对于当归粉，液液萃取的提取效果最佳，其次为浸提，最后为超声提取，并选择液液萃取法；对于当归原药材，浸提和液液萃取的提取效果相当，而超声提取的效果较差，实验选择液液萃取法。

（2）3种提取溶剂的比较

增塑剂常用萃取溶剂有正己烷、氯仿、乙酸乙酯。分别称取9份相同质量的当归原药材和当归粉，按照1.3（3）的处理条件，分别选用正己烷、氯仿和乙酸乙酯作提取剂，每种溶剂平行3次，以DBP碎片离子149的平均峰面积作为考察依据，对这3种溶剂的提取效果进行比较。实验结果表明，对于当归粉和当归原药材，正己烷的提取效果均略优于氯仿和乙酸乙酯，故实验用正己烷提取当归粉和当归原药材中的DBP。

2.2 空白试验

不加试样，按1.3（3）的步骤进行处理，平行3次，能检出少量DBP，空白平均值为0.10μg/g。直接将色谱纯的溶剂进样，不含DBP。但前处理过程中的移液枪头、离心管的塑料盖以及上机分析时的隔垫等都会引进增塑剂的污染，故而空白试验中可检出少量DBP，样品中测得的DBP需扣除空白值。

2.3 标准曲线、线性范围与检出限

准确量取 10，50，100，500μL，1 m L 的 DBP 标准储备液置于10m L容量瓶中，加己烷定容，制成浓 度 分 别 为 0.01，0.05，0.10，0.50，1.00μg/m L 的DBP标准溶液，依次进样，记录碎片离子149的峰面积，以峰面积对浓度进行线性回归。DBP浓度(x)在 0.01～1.00μg/m L 范围内与峰面积 (y)呈线性关系，回归方程为y =9 352.1x -36.686，相关系数r2=0.999 5。按信噪比S/N≥3，以取样量0.5 g计算，扣除空白值，计算方法的检出限为0.05 μg/g。实验中质谱采用全扫描，如果针对DBP的特征离子进行SIM扫描，则检出限还可低2～3个数量级。

2.4 方法回收率与精密度

称取0.5 g当归原药材与当归粉样品各6份，每 3 份一组，分别添加 25，250μL 10.00μg/m L 的DBP标准储备液，考察不同加标水平的回收率，结果见表1（实测值均为扣除空白值后的结果）。由表1可见，两个浓度水平的加标回收率均在90% ～100%之间，测定结果的相对标准偏差（RSD）均小于5%。

表1 回收试验和精密度试验结果（n=3）

2.5 样品测试

某厂家提供当归粉和当归原药材样品各3份，每份样品平行测定3次，代表谱图见图1，检测结果见表2（含量均为扣除空白值后的结果）。由图1可见，当归粉与原材料中均存在棕榈酸，其出峰时间与DBP接近，如果用TIC进行定量，会对DBP的检测造成较大干扰；而在m/z 149的选择离子图中，棕榈酸被去除，可以很好地对DBP进行积分与定量。由表2可知，这批当归粉中DBP的含量比当归原材料中要高一个数量级。

图1 样品色谱图

表2 样品中DBP含量测定结果（n=3）

由于塑料容器会引进增塑剂污染，所以实验过程中容器全部采用玻璃制品，需要做空白试验以获得样品中DBP的真实含量。

棕榈酸极性较大，峰形拖尾严重，对DBP的检测造成较大干扰，故实验选用DBP的特征碎片离子149（棕榈酸不含）进行积分与定量，有效地去除了棕榈酸干扰。

3 结语

通过单因素试验详细考察了不同的提取方法与提取剂，确定了以正己烷为提取剂、从水中液液萃取的方法。同时，通过方法学的考察，证明该方法线性良好，灵敏度、精确度高。该方法满足分析要求，可以用于当归粉和当归原药材中DBP的日常检测。

［1］张丽筑，韩应莲，郝小燕.当归水提物化学成分的研究［J］.贵州科学，2006，24(3): 28-30.

［2］赵文红，酞酸酯类增塑剂毒理研究进展［J］.环境与职业医学，2003，20(2): 135-138.

［3］庞世敏，袁敏，赵桂兰，等.气相色谱法测定邻苯二甲酸酯类增塑剂的研究［J］.华南师范大学学报(自然科学版)，2010(4):70-74.

［4］王金花.食品中塑化剂检测技术评析［J］.北京工商大学学报(自然科学版 )，2011，29(5): 10-11.

［5］SN/T 2037-2007 与食品接触的塑料成型品中邻苯二甲酸酯类增塑剂迁移量的测定 气相色谱质谱联用法［S］.

［6］GB/T 21928-2008 食品塑料包装材料中邻苯二甲酸酯的测定［S］.

［7］SN/T 2249-2009 塑料及其制品中邻苯二甲酸酯类增塑剂的测定气相色谱-质谱法［S］.

［8］SN/T 2250-2009 塑料原料及其制品中增塑剂的测定气相色谱-质谱法［S］.

［9］SN/T 1779-2006 塑料血袋中邻苯二甲酸酯类增塑剂的测定气相色谱串联质谱法［S］.

［10］GB/T 22048-2008 玩具及儿童用品PVC塑料中邻苯二甲酸酯增塑剂的测定［S］.

［11］SN/T 2078-2008 PVC玩具和儿童用品中6种邻苯二甲酸酯的测定 气相色谱-质谱法［S］.

［12］GB/T 20388-2006 纺织品邻苯二甲酸酯的测定［S］.

［13］GB/T 24168-2009 纺织染整助剂产品中邻苯二甲酸酯的测定［S］.

Determ ination of Dibutyl Phthalate (DBP) in Angelica Sinensis and Its Powder by Gas Chromatography–M ass Spectrometry

Yu Wenjuan，Hou Jingwen，Zhu Bangshang
（Instrumental Analysis Center，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240, China）

A simple method for the determination of dibutyl phthalate (DBP) in Angelica sinensis and its powder by gas chromatography-mass spectrometry was established. On the basis of GB standards，the single-factor experiment was employed to optimize the extraction method and the solvent. Hexane as the extractant was determined and the method of liquid-liquid extraction from water was established. The methodological study showed that r2of linear regression was 0.999 5 in the range of 0.01-1.00μg/m L DBP, TIC lim it of the detection was 0.05 μg/g, the recoveries at different levels ranged from 90% to 100% w ith relative standard deviations less than 5%(n=3). The method can meet the requirements of daily analysis of DBP in angelica sinensis and its powder.

gas chromatography; mass spectrometry; angelica sinensis; DBP

O657.7

A

1008–6145(2012)02–0057–03

10.3969/j.issn.1008–6145.2012.02.017

联系人：朱邦尚；E-mail: bshzhu@sjtu.edu.cn

2011-12-22