气相色谱法测定茶籽油中角鲨烯含量的研究

谢 勇，苏素娇，梁一池

（福建中医药大学 药学院，福建 福州 350108）

气相色谱法测定茶籽油中角鲨烯含量的研究

谢 勇，苏素娇，梁一池*

（福建中医药大学 药学院，福建 福州 350108）

建立气相色谱法测定茶籽油中活性成分角鲨烯的含量.结果表明：角鲨烯在10～80μg/mL（r=0.999 6）范围内与峰面积呈良好的线性关系，回收率为103.16%（n=5），RSD为1.865%（n=5）.

茶籽油；角鲨烯；气相色谱法

0 前言

油茶（Camillia oleifera Abel），俗称苦茶、建茶、白花茶，属山茶科，分布在长江流域及以南各省，是重要的木本油科植物[1].油茶与油棕、橄榄、椰子并称“世界四大木本油料”.油茶果实称为“茶果”，由茶蒲和茶籽组成.茶籽油是良好的食用油，色清而味香，其主要成分是以油酸和亚油酸为主的不饱和脂肪酸，含量占90%以上.现代营养科学家们把茶籽油誉为益寿油、多维油、无公害油.茶籽油被美国卫生研究院营养合作委员会主席西莫奥普勒博士誉为“世界上最好的食用油”[2].

角鲨烯是一种重要的生物活性物质，广泛应用于医药、食品、化妆品等许多行业.角鲨烯有类似红细胞的摄氧功能，可增强组织对氧的利用.研究表明，角鲨烯具有极强的供氧能力，可抑制癌细胞的生成，防止癌细胞扩散[3]，并通过供氧增强白细胞代谢活动，对肿瘤化疗等所致的白细胞减少症有较好的疗效[4].此外，角鲨烯可提高血红蛋白携氧能力，促进新陈代谢，降低血清总胆固醇和防止动脉粥样硬化等功能[5]，因此常作为功效成分添加于保健食品如角鲨烯胶囊中.目前，角鲨烯提取多来源于深海鲨鱼肝油，如铠鲨肝油中含量为40%～74%，而江海鲨鱼含量偏低，如闽南近海水层鲨鳐类含量仅为0.012%～0.116%[6].然而，根据世界自然保护联盟（IUCN）提供的数据，有多达1/3的鲨鱼种群面临灭绝风险.因此，有必要从植物中寻找新的角鲨烯资源.油茶是中国特有的木本油料作物，全国现有油茶林333.33万hm2，福建是全国第5大主产区，因此开发油茶角鲨烯具有显著的资源优势.

李冬梅[7]对茶籽油甲脂化物的典型GC图谱分析表明，茶籽油中5种主要甲酯化成分：棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯和角鲨烯中，角鲨烯相对含量达7.62%.然而，目前未有对油茶角鲨烯含量检测方法及分析的系统性研究.作者建立了用气相色谱法测定茶籽油中角鲨烯含量的方法，为评价油茶的质量提供了参考依据.

1 材料与方法

1.1 材料

角鲨烯对照品（批号：140721-200603）：中国药品生物制品检定所；正己烷为分析纯；油茶来源于福建顺昌地区，为湘林油茶高产优良无性系，并经福建中医药大学梁一池教授鉴定.

1.2 仪器与设备

Agilent6890N气相色谱仪及色谱工作站：安捷伦科技公司上海分公司；KQ—500E型超声波清洗机：昆山市超声仪器有限公司；DFY—600型摇摆式高速中药粉碎机：温岭市林大机械有限公司；Sartorius CP225 D电子天平：德国Sartorius公司；AR2130千分之一电子天平：奥豪斯仪器有限公司制造；HH—S型恒温水浴锅：郑州长城科工贸有限公司.

1.3 方法

1.3.1 对照品溶液的制备

精确称取角鲨烯对照品2.1 mg于洁净干燥的5 mL容量瓶中，加正己烷（分析纯）溶解定容至浓度为400μg/mL，作为角鲨烯标准储备溶液.取该储备液， 用正己烷稀释成 10、20、40、60、80、100 μg/mL 6个浓度的标准溶液，摇匀并于4℃冰箱保存备用.

1.3.2 样液的制备

称取茶籽仁粉末约10 g，采用正己烷作提取用溶剂，在索氏提取器中提取，水浴加热回流，7～10min回流1次，抽提时间3 h以上.抽提液用旋转蒸发仪减压回收溶剂，得到金黄色的茶油，气相色谱进样检测角鲨烯含量.

2 结果与分析

2.1 提取方法的确定

取同种油茶粉末约10 g分别采用加热浸提、回流提取和索氏提取3种方法提取，结果见表1.

表1 不同提取方法对茶油角鲨烯提取的影响

由表1可知，茶油的提油率依次为：索氏提取＞回流提取＞加热浸提，角鲨烯的提取率依次为：索氏提取＞加热浸提≈回流提取，故选择索氏提取作为角鲨烯的提取方法.

2.2 色谱条件

角鲨烯是一种高度不饱和烃类化合物，分子质量大，沸点高，难挥发.因此，选用HP-5MS耐高温弹性石英毛细管柱，进样口温度和柱箱温度均设为250℃，在此条件下，既可保证样品的充分气化，又能保证固定液无流失[8].

色谱柱：毛细管柱 HP-5（30.0 m×320μm×0.5 μm），检 测 器 ：FID 检 测 器 ，载 气 N2（纯 度99.999%），空气 400 mL/min，氢气 40 mL/min，分流比1∶10，进样口温度250℃，检测器温度290℃，柱箱温度150℃维持1min，15℃/min升温至250℃，进样口压力204 kPa，进样量1μL.

2.3 系统适应性试验

分别精确吸取混合对照品溶液和供试品溶液各1μL进行测定，结果角鲨烯的理论塔板数为133 650；对称因子为1.03；色谱图如图1、图2所示.

2.4 线性考察

按2.1色谱条件，取角鲨烯对照品溶液10、20、40、60、80 μg/mL 进样测定，记录色谱图，以角鲨烯对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为：y=728.84x-1.171 3，r=0.999 3，表明角鲨烯在10～80μg/mL范围内与峰面积线性关系良好.

图1 对照品色谱图（峰1为角鲨烯）

图2 样品色谱图（峰1为角鲨烯）

2.5 平行实验

称取油茶粉末约10 g共5份，制备供试品溶液，气相色谱进样，记录色谱峰面积，计算得角鲨烯的平均含量为 20.22 mg/100 g，RSD为 1.072%，表明本方法的重复性良好.

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液，每隔2 h进样1次，共进样5次，记录色谱峰面积，计算得角鲨烯的RSD分别为3.093%，表明供试品溶液在10 h内稳定.

2.7 加样回收率试验

称取油茶约5 g，共5份，置索氏提取器中，分别精确加入100μg/mL角鲨烯对照品10 mL，制备5份供试品溶液，气相色谱进样.角鲨烯平均回收率为 103.16%，RSD为1.865%，结果见表2.

表2 加样回收率试验结果

2.8 含量测定

称取不同产地油茶粉末约10 g，每个产地称取3份，置索氏提取器中，加入正己烷50 mL，加热回流抽提3 h以上，抽提液用旋转蒸发仪减压回收溶剂，得到金黄色的茶油.气相色谱进样，以外标法定量，结果见表3.

表3 不同品种茶籽油中角鲨烯的含量

有文献报道，除提取方法对茶油中角鲨烯含量有一定影响外，储存期的长短（无论是茶油还是油茶籽）对角鲨烯含量的影响较大[7].本试验选择采收期一致的几种油茶品种，检测其茶籽油中角鲨烯含量，表明品种间差异较大，含量最高品种较最低品种角鲨烯含量高69.5%.

3 结论

用气相色谱法检测茶籽油中活性成分角鲨烯的含量，以毛细管柱 HP-5（30.0m×320μm×0.5μm）为色谱柱，检测器为 FID检测器，载气 N2（纯度99.999%），空气 400 mL/min，氢气 40 mL/min，分流比 1∶10，进样口温度 250℃，检测器温度 290℃，柱箱温度 150℃，角鲨烯在 10～80 μg/mL（r=0.999 6）范围内与峰面积呈良好的线性关系，回收率为103.16%（n=5），RSD 为 1.865%（n=5）.气相色谱法操作简便，稳定性好，分离度好，重现性好，结果准确.

［1］中国中医药管理局编委会.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，2008：356.

［2］赵振东，孙震.生物活性物质角鲨烯的资源及其应用研究进展［J］.林产化学与工业，2004，24（3） ：107-112.

［3］Harivardhan R L，Couvreur P.Squalene：a natural triterpene for use in disease management and therapy［J］ .Advanced Drug Delivery Reviews，2009，61（15） ：1412-1426.

［4］许瑞波，刘玮玮，王明艳，等.角鲨烯的制备及 应用 进 展［J］. 山 东 医 药 ，2005，45（35）：69-70.

［5］饶丽晶，陈冠敏，黄宗锈，等.角鲨烯亚急性毒性试验研究［J］.海峡预防医学杂志，2008，14（2） ：59-60.

［6］赵振东，孙震.生物活性物质角鲨烯的资源及其应用研究进展［J］.林产化学与工业，2004，24（3） ：107-112.

［7］李冬梅，王婧，毕良武，等.提取方法对茶油中活性成分角鲨烯含量的影响［J］.生物质化学工程，2006，40（1） ：9-14.

［8］雷治国，黄永芳，何会蓉.油茶及其种质资源研究进展［J］.经济林研究，2003，21（4）：123-125.

CONTENT DETERMINATION OF SQUALENE IN CAMELLIA OIL BY GASCHROMATOGRAPHY

XIE Yong,SU Su-jiao,LIANG Yi-chi
（School of Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou 350108,China）

The paper constructed a method for determ ining the content of squalene,an active component in camellia oil,by gas chromatography.The results showed the content of squalene was in a good linear relationship w ith the peak area in a range of 10 to 80μg/m L (r=0.999 6),the recovery rate was 103.16% (n=5),and RSD was 1.865%(n=5).

camellia oil； squalene； gas chromatography

TS 201.2

B

CNKI:41-1378/N.20120208.0844.010

1673-2383（2012）01-0042-03

http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1378.N.20120208.0844.010.html< class="emphasis_bold">网络出版时间：

时间：2012-2-8 08:44:47AM

2011-09-19

福建省自然科学基金计划项目（2011J05073）

谢勇（1976-），男，福建建瓯人，副教授，研究方向为功能性食品.

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