黄连生物碱的提取纯化及降脂作用

2011-12-31李学刚王小华

长春中医药大学学报 2011年1期

侯宏，李学刚＊，李平，王小华，冯平

（1.西南大学药学院，重庆 400715；2.重庆北碚区中医院，重庆 400700）

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensisFranch，三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta wall.的干燥根茎。其活性成分为原小檗碱型生物碱，主要包括盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀及总生物碱。研究［1-5］表明，黄连有抗菌、抗病毒、抗心律失常、抗肿瘤、降血糖及降血脂等作用。黄连提取纯化方法很多，有水提、醇提以及柱层析纯化等［6-8］，本实验采用乙醇结合酸溶碱沉的方法提取生物碱并再进一步纯化，在降血脂方面研究提供依据。

1 材料

1.1 药材和试剂黄连采自重庆石柱黄连GAP基地；柱层析硅胶D101大孔树脂、乙醇、硫酸、Ca（OH）2（成都科隆试剂公司）；脂脉康胶囊（12粒×3板/盒，批号20090502，国药准字ZI4020737，山西安特生物制药股份有限公司）；胆固醇（安徽天启化工科技有限公司，纯度≥92.8％）。猪油、鲁花花生油（超市购买），总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定试剂盒（南京建成生物研究所）。

1.2 主要仪器 RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；TG16-W微量高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；EOSBRAVO全自动生化分析仪。

1.3 动物鹌鹑，雌雄各半，2个月龄，体质量（130±20）g，购于重庆万盛鹌鹑养殖场。

2 方法和结果

2.1 提取和分离黄连干燥根茎（10kg）粉粹，95％乙醇浸泡24h过滤，倒出滤液，反复3次，合并滤液，减压浓缩得浸膏2 000g，通过预实验，浸膏采用5倍量的0.5％H2SO4溶解，放置2h，再加Ca（OH）2调pH值9～10，然后其将一部分加入装有D101大孔树脂的柱中，先用蒸馏水洗至无色，再用95％乙醇以2BV/h洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得总生物碱的量；另一部分用氯仿、正丁醇萃取，其中取正丁醇萃取物上硅胶柱色谱，并利用重结晶手段，得到化合物小檗碱、黄连碱及巴马汀。

2.2 黄连生物碱对血清TC、TG、LDL-C及HDL-C的影响选用健康鹌鹑70只用普通饲料适应性喂养1周，随机分为7组：正常对照组，模型组，脂脉康组（460mg/kg，按人用量通过体表面积折算）及小檗碱、黄连碱、巴马汀、总生物碱组（剂量100mg/kg，根据前期血脂实验研究所得）。除正常组喂普通饲料外，其余各组喂高脂饲料（79％普通饲料+14％猪油+6％花生油+1％胆固醇）［9-10］。于实验开始后第4周禁食12h，颈静脉取血1mL，分离血清，利用全自动生化分析仪测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C。结果用均数±标准差（±s）表示，并进行t检验，见表1。

结果显示，用高脂饲料连续喂养鹌鹑4周后血清TC、LDL-C、HDL-C与正常组相比明显升高，表明造模成功；与模型组相比，所有药物组均可以降低鹌鹑血脂指标，其中，小檗碱、黄连碱、巴马汀可明显降低血清TC，差异有统计学意义，但总生物碱降TC效果不明显，均可明显降TG，差异有统计学意义，在一定程度上药物组均可提高HDL-C，但差异无统计学意义。黄连碱降血脂指标最明显。

表1 黄连生物碱对鹌鹑TC、TG、LDL-C、HDL-C的影响（±s，n=10） mmol/L

注：与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别 TC TG LDL-C HDL-C正常组 6.29±0.81 2.37±0.97 1.83±0.90 2.54±0.57模型组 34.88±1.01##5.65±1.92# 28.36±1.16# 5.32±0.33##脂脉康组 33.97±1.27 2.76±0.48 21.23±1.74△ 6.30±0.27小檗碱组 22.46±2.72△ 2.74±0.45 17.72±2.87△△ 5.62±0.41黄连碱组 23.54±3.75△ 2.56±0.22 16.36±3.76△△ 5.87±0.46巴马汀组 25.55±4.75△ 2.96±0.52 20.78±3.13△ 5.77±1.05总生物碱组 31.79±7.39 3.27±0.81 25.48±2.34 6.01±0.46