RP－HPLC法测定食用油中苯并(a)芘的含量

李燕艳 杨 虹 魏婷婷 杨天奎

(丰益(上海)生物技术研发中心有限公司分析部，上海 200137)

RP－HPLC法测定食用油中苯并(a)芘的含量

李燕艳 杨 虹 魏婷婷 杨天奎

(丰益(上海)生物技术研发中心有限公司分析部，上海 200137)

改进了食用油中苯并(a)芘含量的HPLC检测方法。方法采用Elipse PAH色谱柱，以乙腈－水(88/12，体积比)为流动相，流速1.0 mL/min，柱温25℃，进样量10 μL，以384 nm 为激发波长，412 nm 为发射波长测定荧光强度。方法的检出限为0.4 μg/kg，在0.000 8～0.4 μg/mL浓度范围内线性良好，回收率在85%以上。该方法快速、准确、灵敏，且前处理简单，可直接用于食用油中苯并(a)芘含量的检测。

苯并(a)芘 高效液相色谱 荧光 食用油

苯并(a)芘是有机物不完全燃烧的产物，为目前世界公认的强致癌物质之一。苯并(a)芘是一种具有持久性难降解的多环芳烃，性质稳定，脂溶性强，因此各种动植物食品，尤其是动植物油脂容易受到苯并(a)芘的污染［1］。食品本身不含或很少含有苯并(a)芘，但是在种植、加工、运输、贮存和烹调过程中，往往容易受到污染，因此控制苯并(a)芘在动植物食品尤其在食用油中的含量已显得日益重要。

动植物油脂中苯并(a)芘的检测在中国国家标准和ISO标准中均有阐述，对于油脂中苯并(a)芘的分离富集等前处理过程，国内外文献也提出了很多先进方法，比如基质固体分散萃取技术、固相萃取、咖啡因萃取和超临界萃取等［2－6］。本研究本着经济、快速、简便、可行的宗旨，提出了一种简单且操作性强的快速检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

正己烷、乙腈(色谱纯):CNW Technologies GmbH公司;氯化钠(分析纯):上海凌峰化学试剂有限公司;氢氧化钾(分析纯):宜兴市第二化学试剂厂;纯水、样品油(椰子油，批号LRSHO－01WS;精炼椰子油，批号SAMPLE－A):自制;苯并(a)芘标准品(规格为10 mg):Supelco公司。

Agilent 1200高效液相色谱仪(配四元泵溶剂淋洗系统，自动进样器，荧光检测器):Agilent公司。

1.2 色谱条件

色谱柱:Elipse PAH，4.6 mm ×250 mm，5 μm;保护柱:Lichrosorb RP －C18，4.6 mm ×75 mm，5 μm;流动相:乙腈∶水 =88∶12(体积比);流速 1.0 mL/min;柱温为25℃;检测器为荧光检测器，激发波长和发射波长分别为384 nm和412 nm。

1.3 样品溶液的制备

精密称取样品1 g，用碱液皂化完全，皂化液冷却后加入5 mL水，摇匀，加5 mL正己烷提取，共提取3次，合并正己烷层。加饱和食盐水5 mL进一步净化正己烷层，共净化3次，收集正己烷层并过滤，滤液室温真空旋转蒸发至干。准确加入1 mL乙腈，充分振荡溶解，取该溶液过滤即得。

1.4 系统适用性试验

取上述1 g样品，加适量苯并(a)芘标准品溶液，按1.3制备方法处理，1.2色谱条件进样，考察色谱方法的系统适用性。

1.5 标准工作曲线的配制

用乙腈配制浓度分别为 0.000 8、0.004、0.01、0.02、0.04 μg/mL 的苯并(a)芘标准溶液。各取10 μL进样测定，以峰面积 Y对溶液质量浓度 X(μg/mL)进行线性回归，得标准工作曲线。

1.6 样品重复性测定

分别称取样品6份，按1.3样品溶液制备方法处理进样，考察样品测定重复性。

1.7 样品精密度和稳定性

取同一样品在同一天重复进样8次，每小时进样1次，同时测定出样品的日间精密度和样品稳定性。

1.8 加标回收率的测定

精密称取样品9份，按高、中、低3个浓度加入适量苯并(a)芘标准品溶液，每个浓度3份。

1.9 定量限和检测限的测定

不断稀释苯并(a)芘标准溶液，得出方法的定量限和检测限。

2 结果与分析

2.1 色谱方法适用性

苯并(a)芘在食品中的限度要求非常低［7－8］，因此尽管苯并(a)芘在紫外和荧光下均有吸收，从检测灵敏度的角度出发最终选择荧光作为检测手段。样品在上述条件下处理进样，苯并(a)芘峰与前后的干扰峰分离度在1.5以上，且理论塔板数完全达到了检测的要求，表明该色谱方法完全适用于油脂样品中的苯并(a)芘的检测(表1)。

表1 样品中苯并(a)芘检测的系统适用性数据

2.2 标准曲线

对所配制的标准曲线系列溶液进样，将所得的峰面积与浓度进行数据回归。苯并(a)芘在浓度为0.000 8～0.4 μg/mL的 范 围 内，标 准 曲 线:Y=114 128.80X+6.38，(r=0.999 94，n=6)，线性良好。

2.3 日间精密度和重复性

在上述条件下测定了样品溶液的日间精密度(8次平行测定)和8 h重复性(每隔1 h进样)。RSD值为0.43%。说明样品溶液精密度良好，且在8 h之内样品溶液稳定。2.4 回收率试验

加标回收率试验数据显示，3个浓度的回收率均在85%～95%，且RSD值小于5%，回收率良好，符合食品行业要求，方法准确。

2.5 定量限和检测限

以信噪比3/1和信噪比10/1分别作为检测限和定量限，检测限为 0.4 μg/kg，定量限为 0.8 μg/kg。

3 讨论

本方法与国内外标准文献方法比较:目前的食用油中苯并(a)芘的检测主要是荧光分光光度法、高效液相色谱(荧光检测)法和高效液相色谱(质谱检测)法［9］。难点主要集中在前处理过程中苯并(a)芘的富集和样品的净化步骤。ISO 15302:2007和GB/T 22509—2008的前处理过程使用柱层析进行样品净化，溶剂用量大［10－11］，而且人工装填层析柱时存在个体差异性，因此重复性和精密度难以控制(图1)。GB/T 5009.27—2003中使用液液萃取进行前处理，溶剂用量大，分离步骤复杂，纸层析操作使用了毒性强的苯作为溶剂，且目测法观测时主观差异大，灵敏度也不高［12］。另有文献报道［3，13］，将样品经液液萃取后，用商品化SPE柱净化(图2，图3)，对花生油、茶油、芝麻油等食用油样品回收率良好，但在分离净化某些油品(如椰子油)时出现净化不干净的现象。用上述前处理方式与本方法分别处理样品，对比可见(表2)，本方法净化干净，检测干扰少(图4)。

图4 本方法对样品处理所得色谱图

表2 本方法与ISO、国标及国内外文献的比较

由表2看出目前所使用的操作简单，方法验证令人满意，溶剂用量少，检测成本低，灵敏度高，满足中国国家标准限度要求和欧盟标准限度要求。

4 结论

通过利用本方法对椰子油、茶油、花生油和芝麻油等进行的检测，经过验证，该方法无明显干扰杂质，回收率好，灵敏度好，准确性高，大大节省了检测成本和检测时间，是一种检测食用油中苯并(a)芘含量的良好方法。

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［11］GB/T 22509—2008动植物油脂－苯并(a)芘的测定－反相高效液相色谱法［S］

［12］GB/T 5009.27—2003 食品中苯并(a)芘的测定［S］

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Determination of Benzo(a)pyrene in Edible Oils by Reversed－phase High－performance Liquid Chromatography

Li Yanyan Yang Hong Wei Tingting Yang Tiankui
(Wilmar Biotechnology Research ＆ Development Center(Shanghai)Co.，Ltd.，Shanghai200137)

A method was developed for determination of benzo(a)pyrene in edible oils by HPLC.A elipse PAH HPLC column was used in analysis and acetonitrile/water(88/12，V/V)was taken as a mobile phase.Column temperature was 25 ℃ and the injection volume was 10 μL.Excitation wavelength was 384 nm and emission wavelength 410 nm.The limit of detection was 0.4 μg/kg.It had a good linearity in 0.000 8 ～0.4 μg/mL.Overall recoveries were 85% ～95%.This method was simple，rapid，sensitive and cheap for the assay of benzo(a)pyrene in edible oils.

benzo(a)pyrene，HPLC，fluorescence，edible oil

TS227

A

1003－0174(2011)12－0103－03

2011－01－05

李燕艳，女，1980年出生，工程师，食品分析

杨虹，女，1982年出生，工程师，食品分析