金线莲茎尖的组培快繁技术研究

李丹丹 张付远

江西环境工程职业学院园林与建筑学院 341000

金线莲茎尖的组培快繁技术研究

李丹丹 张付远

江西环境工程职业学院园林与建筑学院 341000

本研究以金线莲茎尖作为外植体，研究了不同激素浓度对金线莲茎尖诱导、增殖及生根率的影响。结果表明：对于金线莲比较适合的诱导培养基是：MS+ 6-BA 4. 0mg/L + ZT0. 2mg/L +NAA 0. 5mg/L；增殖较佳的组合是1/2Ms+6-BA0·4mg·L-1+ NAA0· 2mg·L-1。当NAA的浓度达到2·0 mg·L-1时生根率最高，可以达到100%。

金线莲；6-BA；NAA

金线莲为兰科开唇兰属多年生珍稀中草药。素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。金线莲具有凉血泻火、消肿止痛的功效，能调节体内分泌，抑制分泌过多的油质，促进皮肤细胞的新陈代谢，服用后对青春痘、粉刺、各种黑斑、雀斑、老人斑效果奇佳。野生金线莲干货最高曾涨到每公斤3000多元。

金线莲种子微小，胚发育不完全，在自然条件下极难出芽；若以分根或扦插繁殖，则耗时长且繁殖系数低，金线莲赖以生存的自然环境发生变化，野生资源锐减，现已濒绝，加上长期采挖，种质资源稀缺，已濒临灭绝，已不能满足临床需要。目前，虽然组培快繁金线莲虽已有报道，金线莲的组培快繁技术在各个环节上的研究取得较大进展，但还不太稳定，规模化、产业化生产的关键技术有待进一步研究和突破，如诱导培养基、继代培养基和生根培养基的配方问题，若能解决这些制约因素，组培快繁技术在金线莲产业化生产过程中将大有作为[1-2]。

本研究以观赏金线莲幼嫩茎尖为外植体，采用组织培养生物技术金线莲进行组培快繁研究，包括初代培养、继代培养、生根培养等阶段的影响和制约因素的研究。

1 、材料与方法

1.1 材料

以福建的野生金线莲茎尖作为培养的材料。

1.2 方法

1.2.1 外植体的选择与培养

小心切取金线莲的茎尖，流水冲洗1h，取出后吸干表面水分以75%酒精浸泡12s，然后再用0.1%的升汞溶液浸泡15min，无菌水冲洗5 遍，再用无菌滤纸吸干表面水分，在超净工作台上，小心的剥去茎尖外面的包片，接种于： MS+ 6-BA 4. 0mg/L + ZT0. 2mg/L +NAA 0. 5mg/ L的培养基上。

1.2.2 不定芽的增殖

将长1～2cm的茎段接种于诱导不定芽的培养基(表1)上，20d后，茎节间开始膨大、腋芽发白，渐渐突起并伸长。40d后，腋芽生长良好，不经过愈伤组织阶段,并且有的基部又长出新芽。

1.2.3 生根

采用生长健壮，继代3次后的高约 2cm的幼苗用作试验材料。基本培养基是组培苗生根的营养来源, 一般低浓度的营养成分有利于组培苗的根诱导。生根培养以 1/ 4MS为基本培养基，均分别附加0.5 mg·L-1的NAA，共 5个处理。生根培养40d后统计生根情况。

1.2.3 培养条件

培养基均附加蔗糖20 g·L-1，琼脂6.2g·L-1，pH值5.6-6.0。培养温度25 ±2℃，光强 2000～2500Lx，光照10h/ d。

2 、结果与分析

2.1 不同激素浓度配比对金线莲增殖的影响

在金线莲的组织培养过程中，芽增殖是十分关键的环节，只有提高增殖倍数，才能达到快速繁殖的目的。在金线莲继代培养过程中，影响金线莲芽增殖的一个关键因素就是培养基中激素浓度的配比。为了研究激素配比对金线莲芽增殖的影响 ，以1/2Ms为基本培养基，附加6-BA和 NAA进行配比试验（见表1）。

表1 不同激素配比对金线莲芽增殖的影响

从表 1 可以看出，当 NAA 浓度为0. 5 mg·L-1时，随着6-BA浓度的增加，再生芽的增殖系数呈上升趋势，同时 6 -BA 浓度为 3.0mg·L-1时，虽然增殖系数最大，但增殖的芽纤细，叶片小，长势差 ，故6 - BA浓度以3.0mg·L-1为宜。

2.2 NAA浓度对金线莲生根的影响

把继代培养的金线莲无根苗切割成单苗,接种在培养基上诱导生根，培养20 d 后开始有根冒出，随后根的数量进一步增多，并逐渐伸长，到30 d 左右统计各处理的生根情况。

NAA浓度对金线莲生根率的影响比较大，结果见表3。本实验以不附加NAA作为对照，生根率并非随着NAA浓度的增加而增加，当NAA浓度为2.0 mg·L-1时生根率达到最大。试验只对浓度对发根的影响进行了调查, 因此对等其它生长素类及生长素的相互混合使用效果则有待于进一步研究。

表2 NAA浓度对金线莲生根的影响

3 、结论与讨论

3.1 不同激素配比对金线莲芽增殖的影响

影响金线莲组织培养的因素主要有基本培养基、激素配比、有机添加物及培养条件，其中激素配比是最为关键的因素[3-

5]。

对于金线莲芽诱导和增殖最佳激素种类和浓度配比，不同学者研究结果有所差异，王雅英[3]通过正交试验认为Ms+6-BA3. 5mg·L-1+KT1.5mg·L-1+ NAA0.6mg· L-1组合是芽快速成增殖的最佳配方，三种激素对芽继代增殖系数影响大小为6-BA>NAA>KT；刘润东[4]认为6-BA和NAA浓度过高不利于芽丛的发生，在附加6-BA1.0mg·L-1的Ms培养基上，添加低浓度的ZT能明显促进芽丛的发生；范子南[5]认为6-BA对芽分化具有促进作用，随着6-BA浓度的提高其促进芽分化的过程也加强。结合本试验认为：金线莲芽诱导的比较合适激素配比为MS+ 6-BA 4. 0mg/ L + ZT0.2mg/L+NAA0.5mg/L；而增殖较为理想的激素配比为1/2Ms+6-BA3. 0mg·L-1+ NAA0.5mg·L-1

3.2 NAA对金线莲的生根的影响

NAA对金线莲的生根的影响比较大，但生根率并非随着NAA浓度的增加而增加，当NAA的浓度达到2.0 mg·L-1时生根率最高，可以达到100%。

总之随着民间珍稀药用植物资源的日趋枯竭,采用现代生物技术通过组织培养加速开发对发掘传统的民间中草药有着极其深远的意义。

[1]马以忠，邓琳琼，黄丽华.金线莲的研究现状及展望[J].贵州科学.2007，25 (2):81～84

[2]陈芝华，胡启灿.金线莲组培快繁与移栽试验研究[J].三明农业科技.2005，103(3): 13～15·

[3]王雅英，林荣耀，杨忠耿等.金线莲快速繁殖及促根壮苗试验[J].亚热带植物科学. 2005，34( 3) : 40～42

[4]刘润东，郭文杰，林忠宁等.金线莲组织培养及营养成分的分析研究[J]. 广西农业科学. 2006, 37(5) : 506 -509·

[5]范子南，肖华山，范晓红等.金线莲组织培养研究[J]·福建师范大学学报. 1997，13(2) : 82 ～87·

李丹丹，女，硕士，主要从事植物植物组培研究。

10.3969/j.issn.1001-8972.2011.21.019