HPLC法测定注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的有关物质和含量

北京四环科宝制药有限公司（100070）曹相林 魏墨玺 马月梅 方贤罗 陈婧

盐酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物，是氯霉素的同类物，抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相似。其水溶性好，当溶液的pH值增高或受到体内酶的作用后，迅速释放出甲砜霉素而发挥作用[1]。盐酸甲砜霉素甘氨酸酯拓宽了甲砜霉素的临床应用，克服了其水溶性差的劣势[2]。有些文献报道的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的有关物质的检测方法中，流动相及其pH值、溶解样品的溶剂的选择是不恰当的，未充分验证盐酸甲砜霉素甘氨酸酯在不同pH值条件下的稳定性或相应峰纯度的考察，有关物质的检测结果欠准确。因此，本研究在大量实验的基础上，建立了一种准确快速检测注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯有关物质和含量的高效液相色谱法。经过系统的方法学验证，选用本方法测定有关物质，能保证各杂质有效检出，峰型对称性好，积分结果准确，且各杂质峰与主成分峰分离度较好。选用本方法测定含量灵敏度高、专属性强、线性范围宽、方法回收率好。完全能够达到质量控制的要求。

1 仪器与试药

岛津LCSolution高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Sartorius PB-10型酸度计（德国赛多利斯公司）；CP225D型电子天平（德国赛多利斯公司）；盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品（批号：20100301）自制；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 HPLC测定方法的建立与验证

2.1 色谱条件的建立 经试验，流动相pH值对盐酸甲砜霉素甘氨酸酯主峰及其杂质峰峰形、峰面积和分离度均有影响。对流动相pH值为3.0和4.5的对比发现，前者明显比后者峰型对称性好，积分结果准确，各杂质峰与主成分峰分离度好。最终确认以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液-三乙胺（20∶80∶0.05）用磷酸调节pH至3.0为流动相，能保证各杂质有效检出。

附表1 重复性试验结果

附表2 精密度试验结果

2.2 空白试验 本品以0.01mol/L的盐酸溶液为溶剂，经试验验证选用本HPLC测定方法，空白溶剂不干扰样品的杂质检测。

2.3 最小检测限 按仪器噪音的3倍响应值测定最小检测量为0.4ng，表明本色谱条件的灵敏度较好。

2.4 方法线性试验 取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯适量，共6 份，精密称定，加0.01mol/L的盐酸溶液制成每1ml约含50、75、100、130、150、200μg的一系列溶液，在选定的色谱条件下，分别精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，浓度对峰面积做标准曲线，结果表明本品在51.45～200.5μg/ml范围呈良好线性，回归线性方程：Y=36.186X+23.439 R2=0.9999。

2.5 重复性试验 取本品适量，照含量测定方法平行配制6份样品，测定样品含量，考察该含量测定方法的重复性。结果显示，采用本法对同批样品，平行试验6份，6次含量测定结果的RSD=0.68%，表明本方法重复性较好。见附表1。

2.6 精密度试验 取重复性试验项下样6，照含量测定方法连续进样6次，考察该含量测定方法的精密度，结果表明本方法精密度良好。见附表2。

2.7 溶液的稳定性试验 考察供试品溶液在第0、30、60、120、180、240、360和480min的稳定性。结果表明，样品溶液在室温中放置480min后峰面积并无明显变化，RSD为0.47%，适合常规分析。见附表3。

2.8 回收率试验 精密称定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品适量（约相当于甲砜霉素8、10、12mg），置100ml量瓶中，加0.01M盐酸溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液。另取盐酸甲砜霉素甘氨酸酯对照品适量，用0.01M盐酸制成每1ml中约含甲砜霉素甘氨酸酯100μg的对照溶液。照上述方法试验，高、中、低3个不同测定量的样品，分别平行试验3次。结果表明，含量测定准确度好，方法可行性较强。见附表4。

2.9 样品含量测定 取本品连续试制的3批样品，采用高效液相色谱法测定含量，见附表5。

附表3 溶液稳定性试验结果

附表4 回收率试验结果

附表5 三批样品的含量测定结果

附表6 溶液稳定性考察结果

2.10 溶液pH值对样品稳定性的影响 分别选用pH4.5流动相、0.001 mol/L盐酸、0.01mol/L盐酸，以有关物质为指标，考察样品配制后放置稳定性情况。结果表明：不同pH值的溶剂对盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的稳定性有明显影响。在pH值对杂质的影响的考察中发现，在考察的3h内，在同一pH值条件下，有关物质随放置时间延长而增长，因此为保证结果准确，有关物质测定时样品应现配现用；在考察的3h内，随着溶液pH值的降低，样品在放置相同的时间内，杂质增长幅度明显降低，因此选用溶解样品的溶剂为0.01mol/L盐酸，能保证测定结果更加准确。见附表6。

3 讨论

本研究在对盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的有关物质及含量测定过程中，考察了色谱条件的流动相组成及其pH值、溶剂pH值对样品的稳定性，进行了系统的方法学研究。采用本方法测定有关物质，能保证各杂质有效检出，峰型对称性好，积分结果准确，且各杂质峰与主成分峰分离度较好；本方法灵敏度高、专属性强、线性范围宽、方法回收率好。解决了某些文献报道的盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的有关物质测定方法检测结果欠准确的问题。值得推广用于注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量控制。