HPLC法测定清肺合剂中黄芩苷含量

天津市静海县药品检验所（301600）钱颖

清肺合剂是天津中医学院第一附属医院的医院制剂，由黄芩、鱼腥草、麻黄、桔梗、苦杏仁等12味中药组成，具有清肺化痰，止咳平喘的功效。为了控制该制剂的质量，保证临床用药的安全有效，笔者对清肺合剂的质量进行了研究，黄芩为该方的君药，其主要有效成分为黄芩苷。本文采用高效液相色谱法对黄芩苷进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－2010AHT（日本岛津公司）UV－2401紫外分光光度计。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所批号110715－200512）。

1.2 试药 清肺合剂（天津中医学院第一附属医院，批号080212、080903、081103、080510），甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品11.71mg置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精取5ml至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 精密量取5ml置100ml容量瓶中，加甲醇超声10分钟，放置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精取3ml置50ml容量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

2.3 检测波长的确定 取对照品的甲醇溶液在251～320nm范围内进行光谱扫描，结果在314nm、311nm、277nm处分别有最大吸收，在277nm波长处吸光度更灵敏，吸光值更大，故选277nm为检测波长。

2.4 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱DM C185μ 250×4.6mm，流动相乙腈－0.25%磷酸（24:76），流速1ml/分钟，检测波长为277nm，柱温35℃，进样量20ul。理论板数按黄芩苷峰计算不低于4000。

2.5 空白试验 按处方取除黄芩的各味药材，制得样品，按2.2供试品溶液的制备方法，制得阴性空白对照溶液。结果表明，空白样品色谱中，在与黄芩苷对照品相同保留时间处无吸收峰，阴性对照无干扰。

2.6 线性关系考察 精密吸取（5.38mg黄芩苷对照品→甲醇100ml精取3ml→100ml）对照品溶液5μl、7μl、10μl、15μl、20μl，按2.4项下色谱条件进行测定，记录色谱峰面积(A)与进样量(C)，以峰面积积分值为纵坐标，以进样的对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=63438C-106（r=0.99999，n=5）表明黄芩苷进样量在0.0807μg～0.4035μg内线性关系良好，见附表1。

2.7 精密度试验精密吸取2.1项下得对照品溶液20μl，按2.4项下色谱条件连续进样5次，测得黄芩苷峰面积平均值为756638，峰面积RSD为0.3%，见附表2。

2.8 重现性试验精密吸取同一批号080212的样品5份，按2.2方法制备，分别进样20μl。按2.4项下色谱条件分析。测定每份样品中黄芩苷峰面积（见附表3）均值为611850，RSD为0.7%，重现性良好。

附表1 线性关系考察

附表2 精密度试验

附表3 重现性试验

2.9 稳定性试验 取同一批号(080212)样品按2.2项下方法制备，按2.4项下色谱条件分析，分别在0、1、3、4、8、12、24小时，测定样品中黄芩苷峰面积（见附表4）RSD为0.2%，供试品在24h内稳定。

2.10 回收率试验 取已知含量的样品(080212)精密量取9份，每份3ml，分别加入一定量的黄芩苷对照品，再分别置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按2.4项下色谱条件进行测定。

2.11 样品测定 取4个批号的样品，按2.2项下方法制备，按2.4项下色谱条件测定样品中黄芩苷含量，批号080903、081103、080212、080510的含量依次为4.30、4.21、4.15、4.17mg/ml。

附表4 稳定性试验

附表5 回收率试验

3 讨论

本品采用甲醇－水－磷酸(47:53:0.2)，乙腈－0.1%磷酸(26:74)，乙腈－0.25%磷酸(24:76)流动相进行比较。结果认为乙腈－0.25%磷酸(24:76)分离效果好，峰形对称，保留时间合适。以甲醇与50%甲醇超声0'、10'、20'、30'结果发现甲醇作为溶媒比50%甲醇作为溶媒，杂质峰少。10'与20'、30'相比较，无太大区别，为节省时间，故选用甲醇超声10'。本试验结果可靠，方法简单易行，可作为清肺合剂的质量控制方法。