辣木油对家兔皮肤创伤的保护作用

段琼芬,李 钦,林 青,段小花,杨 莲,张重权,马李一,王有琼

1中国林业科学研究院资源昆虫研究所,昆明 650224;2云南中医学院药理学教研室,昆明 650200;3云南省中医中药研究院,昆明 650223

辣木油对家兔皮肤创伤的保护作用

段琼芬1＊,李 钦3,林 青2,段小花2,杨 莲2,张重权1,马李一1,王有琼1

1中国林业科学研究院资源昆虫研究所,昆明 650224;2云南中医学院药理学教研室,昆明 650200;3云南省中医中药研究院,昆明 650223

观察辣木油对家兔皮肤创伤愈合的影响。取健康大耳白兔 18只,随机分为空白对照组、京万红组和辣木油组,将背部左右侧各切取直径 2.35 cm大小的皮肤,深及皮下筋膜,造成创伤模型,每天涂药 1次,测定创面面积,计算愈合率和愈合时间;于术后的第 3 d、7 d、10 d,切取涂药部位和空白未涂药部位皮肤全层,制片,作HE染色后镜下观察创面组织形态学的改变并进行皮肤病变程度的分级。结果显示辣木油可加速创面愈合,缩短愈合时,减轻组织的病理变化。提示了辣木油能够促进家兔皮肤创伤的愈合。

辣木油;家兔;皮肤;创面;愈合

Abstract:To investigate the protection effect of external use ofMoringa oil on skin injury of rabbit,18 rabbitswere randomly divided into 3 groups as negative control,Jinwanhong oil treatment,and Moringa oil treatment.A piece of skin deep to subcutaneous fascia with a diameter of 2.35cm was cut on both side of the back of the rabbits to construct the wound model,then the wound were treated with the oil everyday,and the wound area was measured to deter mine the healing rat and the healing time;thewhole der ma of thewound skinwas cut after 3 d,7 d,and 10 d,dyed byHE and observed with microscope to deter mine the corresponding pathogenic degree.The results showed that external use ofMoringa oil can accelerate wound healing,shorten healing time,and alleviating pathogenic changeswhich remind thatMoringa oil can promote rabbit skin wounds restoration and healing.

Key words:Moringa oil;rabbit;skin;wound;healing

辣木油是从辣木科 (Moringaceae)辣木属(MoringaAdans.)辣木 (Moringa oleiferaLam.)[1]种子中提取出来的珍贵植物油,具有扩张血管、抗真菌、抗发炎等多种功效[2-5],广泛应用在食品、化妆品和医药等方面。实际应用中发现的,用辣木油外擦可以治疗人体皮肤损伤,缩短创面的愈合时间,减轻伤口感染,消肿止痛,但未检索到相关的研究报道。因此,本试验选用与临床创伤修复和愈合过程基本一致的家兔背部皮肤全层缺损伤模型[6],就辣木油对

1 材料与方法

1.1 动物

新西兰大耳白兔 18只,雌雄各半,体重 2.0～2.5 kg,购自四川省医学科学院实验动物研究所,动物质量合格证编号:SCXK(川)2004-18。

1.2 药品与试剂

辣木油试样的制备:取云南元江产辣木籽(seeds ofMoringa oleiferaLam)2500 g,经挑选除杂后用小锤破壳取仁,用自制小型液压机压榨得油与油饼,将油饼重复压榨 2次后收存。合并粗油,过滤除去残渣,得深棕色清亮的粗制辣木油将粗制辣木油经脱色处理得供试油样,油样质量为 500 g,浅黄促进家兔皮肤创伤愈合的作用进行了研究。色,凝固点 16℃,密度 (24℃)0.9223 mg/mL;京万红膏:天津达仁堂达二药业有限公司生产,批号211516;碘伏:昆明天亘消毒制品有限公司生产,批号20070119。

1.3 试验方法

1.3.1 分组

将 18只大耳白兔随机分成 3组,分别是空白对照组、京万红组和辣木油组,每组 6只,单笼常规饲养。

1.3.2 造模

方法[7],用 8%硫化钠将家兔背部脱毛,暴露出约 12cm×10 cm的皮肤,2 d后用 10%水合氯醛麻醉并用碘酒、酒精消毒,避开肩胛骨和髂骨,在距脊柱 2 cm的左右两侧,由前到后分别做左1、左 2、右 1、右 2共 4个直径约为 2.35 cm的圆形创面,切除创面全层皮肤至浅筋膜组织。

1.3.3 给药

空白组按 0.3 g/wound给予医用凡士林;京万红组按 0.3 g/wound给予京万红软膏;辣木油组按0.3 g/wound给予辣木油。自手术日起,按以上剂量将药物均匀涂于创面,用消毒凡士林油纱布覆盖并用无菌干纱布包扎,以后每天换药 1次,直至创面愈合。

1.3.4 创面愈合情况观察

参考文献方法[8],肉眼观察创面的愈合情况,观察指标为:渗出物量的多少、创缘皮肤收缩、结痂和皮肤颜色的变化。

1.3.5 创面愈合率及愈合时间的测定

在术后的第 3、6、10、13 d,采用描计称重法测量面积,即用透明薄膜覆盖创面,沿创面边缘作标记,画出所需面积范围并剪下,用分度值为 0.1 mg的分析天平称质量并以质量代替面积,按创面愈合率 =(原始创面面积 -未愈合创面面积)/原始创面面积,计算创面愈合率。以 95%的创面愈合率为愈合时间的标准,记录每个创面的愈合时间。

1.3.6 创伤组织病变程度分级检验

参考文献方法[9]进行分级。组织切片方法:于术后的第 3、7、10 d,切取创面组织,经 10%中性福尔马林固定,脱水、包埋制成石蜡切片,切片厚度为20μm,作 HE染色。镜下病变程度分级:显微镜下观察切片的病理学改变情况,将病变程度分为 4级,记为:–、+、++、+++,其中“–”为表皮再生 ＞75%,其余创面被新生的肉芽组织所修复,少量炎细胞浸润,可见较多胶原纤维;“+”为表皮再生 50%～75%,可见大量肉芽组织,但肉芽组织尚未将创面填平,较多炎细胞浸润,无坏死,可见少量胶原纤维;“++”为表皮再生 25%～49%,可见较多肉芽组织,大量炎细胞浸润,少量出血,无坏死,偶见少量胶原纤维;“+++”为表皮再生 ＜25%,伴大量出血、坏死,甚至化脓,未见肉芽组织及胶原纤维。

1.4 数据处理

采用 SPSS13.0统计软件对试验数据进行单因素方差分析以及 Dunnet-t两两比较,对等级数据进行 Ridit检验,P＜0.05时为差异显著;P＜0.01时为差异非常显著。

2 结果与分析

2.1 家兔皮肤创面的愈合情况

肉眼观察到各组动物在术后的第 1 d和第 2 d,所有动物的创面基本上都有渗出液,伤口未开始愈合。术后第 3 d,空白组 6只动物中有 2只的渗出液基本消失,并开始结痂,其余创缘皮肤收缩不明显,2只伤口开始出现少许红晕;京万红组全部创面的渗出液基本消失,创缘皮肤开始收缩,并开始结痂,其中 5只伤口开始出现少许红晕;辣木油组 6只动物中有 5只的渗出液基本消失,创缘皮肤开始收缩,并开始结痂,有 4只伤口开始出现少许红晕。术后第7 d,空白组仍有 3只创面湿润,有渗出物,伤口收缩不明显,未见明显的新生上皮;京万红组与辣木油组的创面干燥、无感染,创缘皮肤收缩明显。术后第14 d,空白组创面修复欠佳,仍有 4只未愈合,京万红组创面基本愈合,辣木油组有 2只未愈合。

试验结果显示,辣木油能有效促进家兔皮肤创面的愈合,防止伤口感染,功效与京万红相似。

2.2 创面愈合率和创面愈合时间

在 1.3.2节所述的 4个创面中,其中“左 1”创面被用来测量面积,剩下的“左 2”等 3个创面则用于后面试验所需的病理取材 (所有组均按此顺序操作)。当给药剂量为 0.3 g/wound时,测得各组试验动物的创面愈合率测的平均值、创面愈合时间的总平均值见表 1。

表1结果显示,辣木油组家兔的创面愈合率在术后第 3 d时,与空白对照组相比差异非常显著 (P＜0.01),表明辣木油对家兔皮肤创伤有非常明显的修复作用,能够促进创面的愈合,且见效比京万红快,但第 3 d后的影响不再有统计学意义,说明当用辣木油来治疗家兔皮肤的机械创伤时,应在伤后前3 d内抓紧治疗。而京万红的药效则比辣木油的缓慢一些,一直到了第 10 d时才有很明显的效果 (P＜0.01),但与辣木油不同的是,从第 10 d后一直到第13 d,它对创面的愈合率仍然有影响,仍然能明显地促进创口的愈合,总的效果显得更好些。此外,若将表 1中各组动物总创面愈合时间的平均值进行成对比较的话,则可知道辣木油组和京万红组与空白对照组相比具有明显的差异 (P=0.031;P=0.013),说明两者均对家兔皮肤机械损伤的创面愈合具有明显的促进作用,而辣木油组和京万红组之间的差异则无统计学意义(P=0.135),说明辣木油的药效与京万红相近。

表1 辣木油对家兔皮肤创面愈合率和愈合时间的影响±s,n=6)Table 1 Effects ofmoringa oil on skin wound healing rate and healing t ime of rabbit(±s,n=6)

表1 辣木油对家兔皮肤创面愈合率和愈合时间的影响±s,n=6)Table 1 Effects ofmoringa oil on skin wound healing rate and healing t ime of rabbit(±s,n=6)

注:与空白组比较,＊P＜0.05,＊＊P＜0.01。＊P＜0.05,＊＊P＜0.01vscontrol group

组别Group创面愈合率Wound healing rate/% 创面愈合时间Wound healing(time/d)3 d 6 d 10 d 13 d空白对照组 control group 11.5±6.0 16.70±12.67 41.03±14.31 75.18±11.55 16.50±2.07京万红组 jingwanghong group 17.0±9.36 24.60±13.73 57.75±7.52＊＊ 91.13±4.74＊ 13.67±1.21＊辣木油组 moringa oil group 2.0±13.34＊＊ 26.14±8.21 48.02±10.27 79.79±14.10 14.83±1.47＊

2.3 创伤组织病变程度分级检验

镜下观察到施行手术以后,各组动物的伤口均有局部上皮缺损,形成深达真皮层的溃疡,伴大量出血、坏死,甚至化脓,未见肉芽组织明显增生,其中以空白组炎症最重,化脓最为明显 (空白组 control group、京万红组 jingwanghong group、辣木油组moringa oil group:图 1 a～c)。术后第 7 d,空白组上皮细胞增生不明显,出血较前明显减少,仍可见大量坏死、脓肿及炎细胞浸润,可见少量肉芽组织,未见胶原纤维 (空白组 control group图 1 d);京万红组上皮细胞增生明显,创面未见明显出血、坏死,炎细胞浸润较前减少,可见较多肉芽组织及少量胶原纤维(京万红组 jingwanghong group图 1e);辣木油组上皮细胞增生明显,创面仍有较多量的出血及少量坏死,炎细胞浸润比空白组少比京万红组多,可见较多肉芽组织,偶见少量胶原纤维 (辣木油组 moringa oil group图 1f)。术后第 10 d,空白组上皮细胞增生明显,创面出血,坏死、脓肿较前减少,仍有大量炎细胞浸润,可见少量肉芽组织和胶原纤维 (空白组 control group图 1 g);京万红组创面修复明显,少量炎细胞浸润,从伤口底部及边缘长出的肉芽组织已填平伤口,胶原纤维形成较多 (京万红组 jingwanghong group图 1 h);辣木油组炎细胞浸润比空白组少比京万红组多,从伤口底部及边缘长出的肉芽组织已填平大部分伤口,胶原纤维形成较多 (辣木油组moringa oil group图 1i)。

图1 家免皮肤创面组织切片Fig.1 Slice of a skin injuries tissue of rabbit

将 6份病理试样按照 1.4.6节皮肤组织病变程度的分级方法来分级,得出了不同时间内不同级别的组织病变分级数据记录于表 2中,分析各组病变程度在各个阶段的统计学差异性,从病理学的角度来观察创面愈合过程中的病理变化趋势。

由表 2可见,随着时间的推移,所有组别的动物都有减轻创伤病理变化的趋势,京万红组及辣木油组在第 7天减轻病理变化的趋势与空白组比较均有显著性的区别 (P＜0.05),说明辣木油与京万红一样,都具有抑制创伤组织病理变化的功效,而且在所有的试验时间范围内,两者的药效都没有显著性的区别 (P＞0.05),提示了辣木油可以用来治疗皮肤创伤。

3 讨论

创伤修复期表皮的生长、伤口的收缩对创面的愈合起着非常重要的作用,伤口收缩既能减少感染的机会,又能使机体用少量的组织就能修复伤口,同时,肉芽组织在创伤修复过程中起抗感染及保护创面、清除凝血块及坏死组织、填补伤口等作用,因此,有无健康肉芽组织生长是伤口愈合的关键,另一方面,胶原纤维的增生也是影响创面愈合的重要因素[10]。

本试验观察到辣木油能促进伤口边缘组织的收缩及创面坏死组织和异物的清除,促进创面炎性渗出物吸收,提高创面愈合率,加速创面愈合。同时镜下观察还发现,在辣木油涂药部位皮肤组织内,炎性细胞减少、上皮细胞增生明显、肉芽组织与胶原纤维的生长均明显优于空白组未涂药部位,统计学处理结果亦显示出二者间有显著性的差异,其上皮细胞增生、肉芽组织数量增多与胶原纤维数量增加呈正相关性,这说明辣木油的药效作用与上皮细胞、肉芽组织和胶原纤维的参与密切相关。

实验中,辣木油在第 3 d时对促进创面愈合具有很好的作用,能明显降低创伤所致的皮肤炎性反应,对皮肤具有保护作用,但延时给药不能明显缩小创面的炎性面积,说明创伤在早期就可能已经形成了某种致炎物质,并产生了损伤,延时给药对已形成的损伤无治疗作用,可能对已形成的致损伤物质无明显的拮抗作用,故给药未能明显降低炎性面积,提示了辣木油用于皮肤损伤的治疗时应及早给药。

结论:辣木油外用能促进家兔皮肤创面的愈合,对家兔皮肤机械损伤有明显的保护作用,其机制可能与促进伤口边缘组织的收缩、创面坏死组织和异物的清除,加速肉芽组织的生长,胶原纤维的增生形成瘢痕,保护伤口,防止感染等有关。

参考文献

1 Folkard G,Sutherland J.Moringa oleifera:a tree and a litany of potential.Agroforestry Today,1996,8(3):5-8.

2 Anwar F.Moringa oleifera:A food plantwith multiple medicinal uses.Phytother Res,2007.21(1):17-25.

3 Mahajan SG,Mali RG,Mehta AA.Effect ofMoringa oleiferaLam.seed extract on toulene diisocyanate-induced immunemediated inflammatory responses in rats.J Im munotoxicol,2007,4(2):85-96.

4 Mahajan SG,Mali RG,Mehta AA.Protective effect of ethanolic extract of seeds ofMoringa oleiferaLam.against inflammation associated with development of arthritis in rats.J Immunotoxicol,2007,4(1):39-47.

5 Chuang PH.Anti-fungal activity of crude extracts and essential oil ofMoringa oleiferaLam.B ioresour Technol,2007.98:232-236.

6 Jin PH(晋培红),Zhang RH(张如鸿).Preparation for the an imalmodel of traumatic skin defects.J Tissue Eng Recons Surg(组织工程与重建外科杂志),2006,2:354-356.

7 Lin ZH(林子洪),Xu HQ(许环亲),Hu JY(胡婧晔),et al.The therapeutic effect of a Chinese vulneraria in compound prescription on skin injury in rabbits.J Pract Med(实用医学杂志),2007,23:2129-2131.

8 Huang K(黄康),Chen YL(陈玉林).Progresson evaluation criterion ofwound healing.Chin J Repar Recons Surg(中国修复重建外科杂志),2001,15(2):126-129.

9 Chen YF(陈云峰),Zhang FC(张风春).Morphology for the model of rabbitwound healing under the action of the earthworm.Chin J Chin Mat Med(中国中药杂志),1998,23(5):305-307.

10 Song SQ(宋述强),Cheng T M(程天民).Progress in phenytoins role of promoting wound healing and its mechanism.Chin Pha rm Bull(中国药理学通报),1999,15:398-401.

Protection Effect of Moringa Oil on Skin Injury of Rabbit

DUAN Qiong-fen1＊,L IQin3,L IN Qing2,DUAN Xiao-hua2,YANGLian2,ZNANG Zhong-quan1,MA Li-yi1,WANG You-qiong1

1Institute of Resource Insects,Chinese Acade my of Forestry,Kun ming 650224,China;2Yunnan College of Traditional Chinese Medicine,Kun ming 650200,China;3Yunnan Institute of Chinese Medicine,Kun ming650223,China

R285.5

A

1001-6880(2011)01-0159-04

2009-07-10 接受日期:2010-07-06

“十一五”国家科技支撑计划项目 (2006BAD18B04);林业公益性行业科研专项项目(200704007)

＊通讯作者 Tel:86-871-3860033;E-mail:qiongfend@hotmail.com